β-环状糊精对pEGFPC3质粒DNA酸变性保护作用的初步研究

目的 探讨 β -环状糊精对pEGFPC3质粒DNA酸变性的保护作用。 方法 用琼脂糖凝胶电泳法首先检测pH 1 0～ 2 5范围内的酸液对pEGFPC3质粒DNA的变性作用 ,然后用同样的方法研究了 β -环状糊精的保护效果。结果 pH 1 0的酸液对pEGFPC3质粒DNA的变性作用最强 ,pH 1 5～ 2 5的酸液对其有部分变性作用 ,pH 1 5～ 2 .5范围内 β -环状糊精对质粒DNA具有较为明显的保护作用 ,对于pH 1 0的情况仍不足提供相应的保护。 结论 β

壳聚糖-DNA复合物形成机理研究

为了探讨壳聚糖-DNA复合物的形成机理,通过向Na2SO4、DNA和溴化乙啶(EB)的混合溶液中分别加入不同体积的壳聚糖溶液,运用荧光分光光度计检测溶液荧光值的变化,发现随着壳聚糖浓度的增加,荧光值下降,说明壳聚糖和EB DNA之间的结合存在竞争性;通过测定Na2SO4离子浓度对壳聚糖-EB-DNA体系的影响发现,随着离子浓度的增加,壳聚糖-EB-DNA三者形成的平衡体系整体荧光强度不断减弱,这说明,壳聚糖是以静电与DNA相互作用的。

壳聚糖作为基因治疗载体的研究

本文从壳聚糖-DNA复合物/微球的形成方法和机理、稳定性、转染细胞效率等方面综述了壳聚糖在基因治疗领域目前的研究现状。

壳聚糖-DNA质粒(pEGFPC3)复合物的制备和释放研究

为了寻找一种有效的基因治疗载体,研究了壳聚糖与质粒DNA(pEGFPC3)复合物的形成、收集、释放,结果发现,当+/-电荷比等于或大于2时,所得的复合物可用两倍复合物体积的无水乙醇收集;壳聚糖酶和溶菌酶在37℃下,2h内能将复合物中的壳聚糖降解而释放出DNA质粒。研究表明,壳聚糖是一种有应用潜力的基因治疗载体。

Bax基因诱导鼻咽癌细胞中相关基因的mRNA差异显示分析

目的:应用差异显示技术,筛选鼻咽癌相关基因的异常表达。方法:选用连接有bax基因的真核表达质粒pSFFV-bax-neo,采用脂质体转染法,将其转染到CNE2细胞中,以转染有空载的pSFFV-neo质粒的CNE2细胞为对照,采用Trizol试剂快速抽取法,提取mRNA经逆转录成cDNA,用锚式引物和随机引物进行PCR扩增,加入同位素,用6%的测序变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳PCR产物进行分离。切下聚丙烯酰胺凝胶上明显的6条差异带,回收差异cDNA,进行第二次PCR扩增,经低溶点琼脂凝胶回收,获取大量PCR扩增的差异cDNA片段,同位素标记作为探针,抽取RNA,进行点样,杂交,洗膜放射自显影等步骤,进行细胞RNA的Northern印迹斑点杂交。结果:表明4条cDNA片段均为CNE2细胞表达片段。结论:发现bax可诱导CNE2细胞中有某些相关基因表达,并抑制了CNE2细胞某些相关基因表达。

红曲霉深层发酵生产红曲色素的研究

研究了发酵条件对红曲霉EW983产红曲色素的影响,摇瓶培养的最佳条件是:温度为31～32.5℃,培养时间为3d,接种量为5％(V/V),装液量为70mL/500mL三角瓶,转速为250r/min,培养基初始pH为3.8。摇瓶发酵液的红色素色价为410U/mL,比培养条件优化前增加了35.8％。在500L发酵罐中培养,发酵液的红色素色价平均为263U/mL。

棒曲霉GM-69深层发酵生产木聚糖酶的研究

报道了发酵条件对棒曲霉GM-69产木聚糖酶的影响,并用50L发酵罐进行了深层发酵试验.确定产酶摇瓶培养的最佳条件:培养时间为72h,温度为28℃,培养基起始pH为3.8,接种量为5%(V/V),转速为250r/min,装液量为90mL/500mL三角瓶.其酶活力最高362IU/mL,平均为343 IU/mL,比培养条件优化前增加了55.6%.50L发酵罐发酵最佳条件:转速为400r/min,通风量为1:0.6～1,罐压为0.08Mpa,装量为70%,发酵周期为72h,温度28℃,培养基起始pH3.8,接种量5%(V/V),酶活力平均为351IU/mL.