piRNA DQ725559通过抑制心肌细胞铁死亡通路抗心肌缺血再灌注损伤的作用

为探究心肌缺血再灌注损伤(Ischemia-reperfusion Injury,IRI)与铁死亡关系,寻找相关Piwi相互作用RNA(Piwi-interacting RNA,piRNA),利用小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)构建心肌细胞IRI模型,通过细胞生存率反映诱导铁死亡最佳H/R时间点,筛选铁死亡相关piRNA,检测铁死亡相关指标变化。研究结果显示,缺氧18 h/复氧6 h后,心肌细胞铁死亡和IRI呈现关联,抑制DQ725559的表达会加重心肌细胞铁死亡和IRI,过表达DQ725559会减轻心肌细胞铁死亡和IRI。研究结果表明,DQ725559可通过调节心肌细胞铁死亡通路发挥IRI调控作用,过表达DQ725559可成为RNA治疗心血管疾病新策略。

基于声呐图像的类别增量学习方法研究

由于声呐图像分辨率低、样本数少,现有的类别增量学习网络对历史任务目标出现了严重的灾难性遗忘问题,导致所有任务目标的平均识别率降低。基于生成重放的框架模式,提出了一种改进的类别增量学习网络,设计搭建新的深层卷积生成对抗网络取代变分自编码器,作为生成重放增量网络的重构模型,提升图像的重构效果;构建新的卷积神经网络取代多层感知机,作为生成重放增量网络的识别网络,提升图像的分类识别性能。结果表明,改进的生成重放增量网络缓解了历史任务目标的灾难性遗忘问题,显著提高所有任务目标的平均识别率显著提高。

长链非编码RNA NONMMUT044调节心肌缺血再灌注损伤中细胞坏死机制研究

为探究I/R中lnc4对细胞坏死的作用及机制,构建小鼠心肌I/R模型,体外利用H_(2)O_(2)诱导心肌细胞坏死,RT-qPCR法检测lnc4 RNA水平表达情况,PI染色检测心肌细胞坏死率,Evans Blue/TTC双染色检测心脏梗死面积,M型超声心动图观测小鼠心脏功能变化。研究结果显示,600μmol/L H_(2)O_(2)处理心肌细胞6 h后,lnc4表达上调,过表达lnc4能加剧H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞坏死,抑制lnc4能减弱H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞坏死。小鼠心脏I/R损伤中,过表达lnc4增加了心肌梗死面积,加重了心功能损伤。这表明lnc4可能作为心肌细胞坏死关键调节因子,与下游ZMYND8共同参与调节心肌细胞坏死过程。

piRNA-102526参与缺氧/复氧诱导心肌细胞焦亡作用及机制研究

为探究piRNA-102526与心肌细胞焦亡的关系,体外构建小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧模型,设置3 h、6 h、9 h、12 h、24 h缺氧时间梯度及6 h复氧条件,检测小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡水平。利用qRT-PCR检测piRNA-102526表达水平,Western Blotting检测焦亡相关蛋白(GSDMD、Caspase-1、IL-1β、ASC)表达,PI染色和LDH活性检测细胞死亡。研究结果显示,小鼠乳鼠原代心肌细胞缺氧6 h/复氧6 h,细胞焦亡相关蛋白表达水平最高。抑制piRNA-102526表达,小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡加剧,过表达piRNA-102526,小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡减少。这表明,piRNA-102526能通过Caspase-1参与经典焦亡通路,调节小鼠乳鼠原代心肌细胞焦亡过程。

piR-16744对缺氧—复氧诱导的小鼠原代心肌细胞焦亡作用及机制研究

为探究piR-16744对H/R诱导的NMCs焦亡作用及机制,体外构建NMCs的H/R模型,设置缺氧6 h、12 h、24 h复氧6 h的时间梯度。使用RT-qPCR检测piR-16744的表达水平,WB检测焦亡相关蛋白GSDMD、GSDMD-C、Caspase-1及炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平,LDH和PI染色检测细胞死亡率。结果显示,H/R 6/6 h时,NMCs中焦亡相关蛋白的表达水平最高。抑制NMCs中piR-16744的表达可促进焦亡相关蛋白表达,细胞死亡率升高;过表达piR-16744则抑制焦亡相关蛋白的表达,细胞死亡率降低;同时抑制piR-16744和Caspase-1的表达,焦亡相关蛋白的表达水平相较于单独抑制piR-16744组降低。研究表明piR-16744可通过依赖Caspase-1的经典焦亡信号通路调控NMCs焦亡。

piR -10555对心肌细胞坏死的调控作用及其机制

目的探讨PIWI蛋白互作RNA-10555(piR-10555)对心肌细胞坏死的调控作用及其机制。方法选用500μmol/L的过氧化氢(H 2 O 2)处理H9c2细胞0、6、12、24 h,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测H9c2细胞中piR-10555的表达水平。H9c2细胞分别转染piR-10555类似物agomir-piR-10555及转染piR-10555抑制剂antagomir-piR-10555后使用H 2 O 2处理,通过RT-qPCR方法检测H9c2细胞中piR-10555的表达,并使用碘化丙啶(PI)染色方法和乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒检测细胞的坏死情况。结果在H 2 O 2处理24 h后,H9c2细胞中piR-10555的表达水平显著上调(F=14.51,P<0.05)。转染agomir-piR-10555以后,H9c2细胞中piR-10555表达水平明显升高(F=154.00,P<0.05),H9c2细胞的PI阳性率显著增加(F=32.61,P<0.05),H9c2细胞培养基上清液中的LDH活性明显提高(F=126.50,P<0.05)。转染antagomir-piR-10555后,H9c2细胞中piR-10555表达水平显著降低(F=33.31,P<0.05),PI阳性率显著下降(F=138.70,P<0.05),细胞培养基上清液中的LDH活性明显降低(F=58.60,P<0.05)。结论piR-10555可能参与调控由H 2 O 2诱导的H9c2细胞的坏死。

环状RNA在缺氧/复氧诱导的大鼠H9c2细胞焦亡中的作用及其机制

目的探讨环状RNA(circRNA)在缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞焦亡中的作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为A~F组,分别进行缺氧0、1、3、6、12、24 h处理后,再进行6 h复氧,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒及Western blot方法检测H/R处理的H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白表达水平,确定诱导H9c2细胞焦亡的最佳缺氧时间。将H9c2细胞分为对照组和实验组,对照组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,实验组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测两组H9c2细胞中circRNA的表达水平。将H9c2细胞分为G~I组,G组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,H组转染对照siRNA(NC),I组转染mmu_circ_0000723特异性siRNA(siRNA-mmu_circ_0000723)。转染24 h后,采用RT-qPCR方法检测各组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平。将H9c2细胞分为J~M组,J组H9c2细胞置于细胞培养箱中培养12 h,K组H9c2细胞置于厌氧培养箱进行H/R处理,L组和M组H9c2细胞分别转染对照NC和siRNA-mmu_circ_0000723,并于转染24 h后进行H/R处理。分别采用碘化丙啶(PI)染色、LDH试剂盒和Western blot方法检测J~M组的PI阳性细胞比率、细胞上清液中LDH活性,以及焦亡相关蛋白的表达水平。结果A~F组H9c2细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异有显著性(F=24.86~2153.00,P<0.05)。与A组相比,D组H9c2细胞中LDH活性及焦亡相关蛋白的表达显著性差异最明显(t=4.14~62.88,P<0.05)。与对照组相比,实验组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达水平明显降低(t=9.78,P<0.05)。G~I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723的表达差异有显著性(F=348.20,P<0.05);与G组相比,I组H9c2细胞中mmu_circ_0000723相对表达水平显著降低(t=22.88,P<0.05)。J~M组PI阳性细胞比例、细胞上清液中LDH活性和焦亡相关蛋白的表达水平差异均有显著性(F=34.39~8528.00,P<0.05);与K组相比,M组H9c2细胞上述5个指标均明显升高(t=4.99~54.00,P<0.05),而L组细胞上述5个指标差异无显著性(P>0.05)。结论mmu_circ_0000723通过调控焦亡相关蛋白的表达,在H/R诱发的H9c2细胞焦亡中发挥重要作用。