人脐带静脉内皮细胞的继代培养

人脐带静脉内皮细胞继代培养25代。应用光镜、电镜及Ⅷ因子相关抗原的免疫荧光方法进行鉴定与观察。在RPMI-1640培养液中加入20%人血清,内皮细胞生长因子200μg/ml,肝素100μg/ml及培养皿的明胶覆膜是人内皮细胞长期培养的重要条件。

氢过氧化枯烯对培养人血管内皮细胞的损伤作用

本实验用氢过氧化枯烯作用于培养的人脐带静脉内皮细胞,探讨脂质过氧化对血管内皮细胞的作用。结果表明,氢过氧化枯烯激发和促进了内皮细胞的脂质过氧化过程,使内皮细胞的过氧化脂质含量升高。在形态结构上内皮细胞出现收缩和生物膜系统的损伤。用放射免疫方法测定,内皮细胞培养液中的6-keto-PGF_1α含量减少,表明PGI_2的产生受到抑制。上述变化可认为:内皮细胞对脂质过氧化的作用是敏感的,提示脂质过氧化通过损伤内皮细胞,可能在动脉粥样硬化发病机理中起重要作用。

脂质过氧化和维生素E对培养人内皮细胞的影响

用联胺作用于培养人内皮细胞,激发并促进了脂质过氧化。随联胺浓度增加,内皮细胞过氧化脂质浓度增加,前列环素合成减少。其形态变化主要为细胞收缩,质膜泡形成,内质网扩张,线粒体肿胀,细胞空泡化及坏死脱落。抗氧化剂维生素E能显著降低联胺引起的过氧化脂质的升高,增加前列环素的合成并明显减轻内皮细胞的形态损伤。但在高浓度联胺时,维生素E无明显保护作用。这些结果提示,脂质过氧化可能通过损伤内皮细胞而在动脉粥样硬化发生中起重要作用,维生素E由于保护内皮细胞的氧化性损伤而可能有防治动脉粥样硬化的作用。

脂质过氧化对培养的内皮细胞表达细胞粘附分子的影响

为观察脂质过氧化损伤对细胞粘附分子表达的影响，用联胺诱发培养的人血管内皮细胞脂质过氧化后，检测其丙二醛含量及单核细胞粘附率，并用激光共聚焦显微镜观察细胞粘附分子表达的情况。结果发现，实验组较对照组内皮细胞丙二醛含量升高，单核细胞粘附率显著增加（P＜0．01），内皮细胞上有血管细胞粘附分子－1及内皮细胞白细胞粘附分子－1的表达，且其表达量均随时间增多。提示内皮细胞粘附分子的表达增加可能是脂质过氧化损伤导致单核细胞粘附增多的重要机制。

建立血管壁模型的一种新方法及其应用

为探讨建立血管壁模型的新方法，采用胰蛋白酶和胶原酶处理人胎儿羊膜，将人血管内皮细胞及平滑肌细胞分别培养在羊膜的两侧面，用联胺诱发脂质过氧化，观察单核细胞迁移的情况。结果显示，内皮细胞及平滑肌细胞可分别培养在经过处理的羊膜的两面，以构建成类似于机体的血管壁模型。该模型上的内皮细胞及平滑肌细胞发生脂质过氧化后，大量单核细胞迁移入平滑肌细胞层。通过此模型可观察如单核细胞等其它血细胞在血管壁内的情况，该构建血管壁模型的新方法对血管壁生理、动脉粥样硬化及炎症等方面的研究都很有意义。

维生素E对培养人内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

本实验以维生素E作用于培养的人血管内皮细胞,从形态结构和功能方面观察了维生素E对内皮细胞脂质过氧化作用的影响,探讨维生素E抗动脉粥样硬化作用的途径。结果表明:维生素E能抑制内皮细胞的脂质过氧化反应,使脂质过氧化引起的细胞收缩和生物膜系统损伤的程度减轻,使细胞PG_2合成增加。提示维生素E通过防止内皮细胞的氧化性损伤,可能在抗动脉粥样硬化病变形成中起重要作用。

联胺对培养人内皮细胞的损伤及维生素E的保护作用

以联胺作用于培养人内皮细胞,激发和促进了脂质过氧化。随联胺浓度增加,内皮细胞过氧化脂质浓度增高,前列环素(PGI_2)合成减少,并出现细胞生物膜系统损伤。抗氧剂维生素E能显著降低联胺引起的过氧化脂质的升高,增加PGI_2的合成,并明显减轻内皮细胞的形态损伤。但在高浓度联胺时,维生素E无明显保护作用。这些结果提示脂质过氧化可能在动脉粥样硬化发生中起重要作用,而维生素E由于保护内皮细胞的氧化性损伤,可能有抗动脉粥样硬化的作用。

超氧化物歧化酶对人内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

本实验首次应用超氧化物歧化酶(SOD)作用于培养的人血管内皮细胞,在细胞的形态结构和PGI_2合成功能方面,观察SOD抗氧化性损害的作用。结果表明:SOD能使氢过氧化枯烯引发的内皮细胞脂质过氧化物蓄积明显减少;使脂质过氧化作用引起的细胞收缩、生物膜系统改变和PGI_2合成减少的程度减轻。SOD可能通过减轻内皮细胞的过氧化损伤而对动脉粥样硬化有防治作用。

脂质过氧化对血管内皮细胞促增殖活性的影响

为探讨脂质过氧化对血管内皮细胞源生长因子的影响，以氢过氧化枯烯作用于培养的牛主动脉内皮细胞后，收集内皮细胞条件培养基，并用肝素亲和层析法处理，分组测定其对3T3细胞3H-胸腺嘧啶核苷掺入率的影响，并用放射免疫法测定各脂质过氧化作用组内皮细胞培养基中内皮素的含量。结果发现．氢过氧化枯烯使培养的内皮细胞的脂过氧化物蓄积增加，且内皮细胞条件培养基对3T3细胞的DNA合成有促进作用．对Swiss3T3细胞的促增殖活性主要存在于非肝素结合部分。氢过氧化枯烯作用后的内皮细胞的内皮素分泌水平比对照组增加。由此推测脂质过氧化作用引起的内皮细胞对平滑肌细胞的促增殖活性可能与内皮素等非肝素结合的分子有关。

树脂包埋胃粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜的研究

树脂包埋胃粘膜上皮细胞内β－葡萄糖醛酸酶免疫电镜的研究张弘，康麟，于安民，陈铁镇，刘树立（中国医科大学病理解剖学教研室，沈阳１１０００１，沈阳市大东区卫生局）许多研究证实了细胞中含有的溶酶体酶与炎症反应，细胞毒性，抗原改变等有关，有的文献提示溶酶体酶...

LDL和HDL对培养的人血管内皮细胞的影响

本文以不同胆固醇浓度的低密度脂蛋白和高密度脂蛋白或将其混合,施加于培养呈融合状态的人脐带静脉血管内皮细胞。通过相差显微镜、扫描电镜和透射电镜观察,发现LDL对内皮细胞有损伤作用,并随所含胆固醇浓度的增高,其损伤程度加重,损伤机制可能与脂质过氧化物的增加有关。HDL对内皮细胞有保护作用,可使其免遭LDL的损伤,可能与HDL可阻止LDL所引起内皮细胞膜中胆固醇的过多或毒性堆积等有关。

氢过氧化枯烯对整装培养人血管内皮细胞损伤作用的研究

本实验改良了传统方法,自创PF膜和浮膜培养法,首次整装培养人血管内皮细胞成功,经高锰酸钾固定剂固定,消化细胞内蛋白质,保留脂质膜性系统,应用透射电镜进行整体观察。在此基础上,用氢过氧化枯烯处理,造成整装内皮细胞线粒体,内质网的脂质过氧化损伤模型。本实验进一步证实脂质过氧化对内皮细胞生物膜的损伤,并报告了内质网和线粒体损伤的整体结构变化。

脂质过氧化对血管内皮细胞源性生长因子合成和基因表达的影响

本研究以氢过氧化枯烯作为脂质过氧化反应的引发剂，作用于培养的牛主动脉内皮细胞，制备内皮细胞条件培养液，测定其对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成的影响；并以抗血小板源性生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＰＤＧＦ）抗体中和实验和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析测定了脂质过氧化作用对内皮细胞ＰＤＧＦ产生的影响。结果表明：氢过氧化枯烯使内皮细胞内脂过氧化物蓄积；氢过氧化枯烯组内皮细胞条件培养液作用的Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞［３Ｈ］－ＴｄＲ的掺入量明显高于正常对照组；以抗ＰＤＧＦ－ＡＡ、抗ＰＤＧＦ－ＢＢ中和抗体处理后，氢过氧化枯烯作用组的内皮细胞条件培养液对Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３细胞的增殖促进活性未见减弱；并且以氢过氧化枯烯作用后内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的水平比正常组有所减低。提示，由氢过氧化枯烯引发的脂质过氧化反应，使内皮细胞源性生长因子的分泌增加；并且可能为ＰＤＧＦ以外的分子物质。

浮膜培养人内皮细胞及其整装电镜标本制作技术的研究

用Falcon塑料培养器皿的原料,自制一种支持膜(PF),经明胶处理后,首次用于浮膜培养人内皮细胞。细胞生长至亚融合时,以高锰酸钾混合固定液固定、消化细胞以保存细胞的膜系统。将固定后的细胞连同pF贴附于铜网上,干燥后在TEM80kv条件下,细胞的内质网及线粒体等超微及立体超微结构可被清楚地观察到。还讨论了本方法的优缺点并与文献中的其它整体细胞方法做了比较。

氢过氧化亚油酸与硒对人内皮细胞的影响

以氢过氧化亚油酸作为脂质过氧化物,亚硒酸钠作为抗氧剂,作用于培养的人脐带静脉内皮细胞,探讨脂质过氧化与抗氧化作用对细胞结构和功能的影响。结果表明,氢过氧化亚油酸能引起细胞收缩、生物膜系统损伤及前列环素合成减少;硒可使细胞脂质过氧化损伤程度减轻。提示:硒可能通过阻止内皮细胞脂质过氧化反应,起抗动脉粥样硬化病变发生的作用。

氢过氧化亚油酸对家兔动脉内皮细胞的损伤作用

用不同浓度氢过氧化亚油酸(LAH)作用于家兔隔离颈动脉段3～5min,于不同时间处死动物。在光镜、电镜下观察过氧化脂质引起的动脉内皮细胞(EC)损伤。结果主要表现为EC的收缩,通透性升高和以质膜泡形成为特点的生物膜系统损伤,以及单核细胞(MC),平滑肌细胞(SMC)的反应。

人主动脉内皮细胞的培养及免疫细胞化学研究

人主动脉内皮细胞体外长期培养在国内首次成功。内皮细胞培养10～15代,细胞倍增时间20h～25h,累积倍增数25～30。应用相差显微镜,扫描、透射电镜,Ⅷ因子相关表面抗原的免疫荧光抗体及血管紧张素转换酶的单克隆抗体,对培养的人主动脉内皮细胞进行形态学及免疫细胞化学的观察与研究。证明,长期培养后的多核内皮细胞是具有内皮细胞特点的变形内皮细胞。

抗氧化剂对脂质过氧化内皮细胞表达细胞粘附分子的影响

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒对脂质过氧化诱导内皮细胞表达细胞粘附分子及单核细胞粘附的影响，用联胺诱发培养内皮细胞脂质过氧化，检测维生素Ｅ和元素硒对单核细胞粘附的影响，用免疫组化及共焦显微镜观察维生素Ｅ和元素硒对内皮细胞表达血管细胞粘附分子１ 及内皮细胞白细胞粘附分子１ 的影响。结果显示抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒可抑制内皮细胞脂质过氧化，抑制血管细胞粘附分子１ 及内皮细胞白细胞粘附分子１ 表达，减少单核细胞粘附。提示抗氧化剂有可能通过抑制内皮细胞表达细胞粘附分子。

长期培养的人血管内皮细胞超微结构研究

内皮细胞培养是研究内皮细胞生物学的重要方法。近年国外开展内皮细胞长期培养,并用于细胞生物学,动脉粥样硬化病理学、血栓形成等机制的研究中。本文在国内首次对长期培养的人血管内皮细胞进行超微结构的研究。本实验按[1]的方法进行脐蒂静脉内皮细胞的长期培养达25代(积累倍增数60-75,倍增时间20-25小时)。按[1、2]方法对流产胎儿主动脉内皮细胞长期培养达10-15代、(积累倍增数25-30,倍增时间20-25小时)。

脂质过氧化和抗氧化作用对培养人内皮细胞的影响——冷冻复型的电镜观察

首次应用冷冻复型方法对培养人血管内皮细胞的内部结构进行观察,表明内皮细胞的冷冻复型样品所显示的细胞器结构清晰,立体感强;对膜性系统的观察结果与扫描电镜和透射电镜下常规样品观察结果相符,而在显示细胞表面的小孔和核膜孔方面优于以前的电镜方法。并观察了氢过氧化枯烯和硒作用下内皮细胞膜性系统的改变,进一步探讨脂质过氧化与抗氧化作用对细胞的影响。