二化螟抗药性监测方法及相对敏感基线

选用安徽太湖县二化螟 (ChilosuppressalisWalker)自然种群 ,用 6种药剂对 6龄幼虫进行毒力测定 ,并与国内外已知敏感品系的LD50 值比较 ,在证实了该种群具有较高的敏感水平后 ,经室内纯化和连续饲养近 2 0代 ,育成相对敏感品系(TH S)。为提高试验准确性 ,简化操作 ,使用 4龄幼虫进行抗药性研究。用于测试的 4龄幼虫形态特征为头宽 (0 86±0 0 4)mm ,体重 (8 5± 1 5 )mg ,前胸与头宽之比 1 19± 0 0 4,体长 (10 0± 0 8)mm。在详细观察 4龄幼虫发育历期和形态特征后 ,选用该龄幼虫 ,建立了包括沙蚕毒素、有机磷、杂环类和生物制剂等类的 6种杀虫剂的相对敏感基线。

小地老虎雄性附腺细微结构和功能及高温的影响

本文通过光镜、电镜和生化分析等方法，研究了小地老虎Ａｇｒｏｔｉｓｙｐｓｉｌｏｎ（Ｒｏｔｔｅｍｂｅｒｇ）雄性附腺的细微结构和功能，结果表明：（１）雄性附腺是一对管状腺，基段粉红色，中段桔红色，端段乳白色。形态分化在蛹前期完成，分泌功能在羽化后４天进入旺盛期；（２）附腺细胞属蛋白质合成型，具有旺盛的合成蛋白质的能力，胞内含有致密的粗面内质网和游离核糖体颗粒，大量的分泌液泡均匀地分布在细胞质中；（３）顶浆分泌和局部分泌是腺体的二种主要分泌方式，前者分泌的颗粒物为糖蛋白性质（ＰＡＳ阳性），后者分泌的网状物为非糖蛋白性质（ＰＡＳ阴性），二者在腺腔内呈有规则的放射状排列；（４）雄性附腺分泌物具有种的特异性，小地老虎、棉铃虫和粘虫等夜蛾科昆虫分泌物的蛋白电泳谱带存在明显的种间差异，高温（３２℃）抑制了雄性附腺分泌某些蛋白质的能力，从而改变精液的成分。

小地老虎雄蛾中胚层生殖道和附腺的细胞结构和分泌功能

通过光镜、电镜及组织化学等方法，研究了小地老虎生殖前期雄蛾中胚层生殖道和附腺的腺细胞结构和分泌功能，以及与精子形态和数量变化的关系，结果表明：（１）以缢缩位置、解剖形态、细胞结构、分泌方式、精子形态变化和数量变动为依据，将中胚层生殖道划分为修精囊、输精管、贮精囊、精包腺１～５段等８个区段；（２）中胚层生殖道和附腺具有相同的组织层次，自内向外分为单细胞上皮层、底膜、肌肉层和围膜等４层，但缺少表皮质内膜；（３）中胚层生殖道和附腺的腺细胞具有旺盛的合成和分泌蛋白质的能力，主要有内质网型和液泡型两种，前者有发达的粗面内质网和高尔基体，后者具有致密的核糖体和分泌泡；至少有４种分泌方式：即颗粒顶泌、液泡顶泌、胞质局泌和胞间分泌；修精囊、贮精囊、雄性附腺、精包腺１段的顶泌物为糖蛋白性质（ＰＡＳ阳性）、局泌物为非糖蛋白性质（ＰＡＳ阴性）。

小地老虎变态期间马氏管超微结构与酯酶活性的变化

本实验用光镜和电镜观察了小地老虎Agrotis ypsilon Rottemberg幼虫在变态期间马氏管超微结构的变化及成虫马氏管的重组过程,同时还研究了变态期马氏管酯酶的活性。结果表明:(1)变态期间马氏管外形完整,除至预蛹期隐肾复合体解体外,其余无明显变化。(2)变态期间管壁细胞变化显著。幼虫6龄末期马氏管细胞结构开始变化,主要特点为:细胞质电子密度高,充满了核糖体颗粒,微绒毛萎缩,线粒体从萎缩的微绒毛中退出进入细胞质,基膜内褶破坏。进入预蛹期幼虫马氏管细胞解体:基膜内褶、顶端微绒毛、线粒体及细胞质内的其它细胞器消失,并形成自体吞噬泡,细胞质内仅存细胞核及各种类型的液泡。但是在变态期间因底膜始终存在,故马氏管外形不变;至蛹后期,成虫马氏管细胞在原位重组,基膜内褶由浅变深,微绒毛由短变长,线粒体内嵴从无到有。(3)变态过程中羧酸酯酶和酸性磷酸酯酶的活性变化趋势基本相同,以六龄幼虫最强,预蛹期次之,蛹期最低。

小地老虎雄蛾中胚层生殖腺缢缩瓣膜结构和功能

该文通过光镜、电镜和生化分析等方法，详细观察了小地老虎雄蛾中胚层生殖腺缢缩的形态、数目、位置和细胞特化的瓣膜结构，并研究了缢缩的瓣膜结构和隔离中胚层生殖腺分泌物的功能。结果表明：缢缩是雄蛾中胚层生殖腺上显著收缩段，有７个，分别在雄性附腺－贮精囊、贮精囊－精包腺１段、精包腺１～５各段之间，精包腺５段－Ｃ形管；缢缩自内向外分为４层，即瓣膜细胞、底膜、肌肉和围膜，肌肉层发达；缢缩瓣膜结构是细胞极度伸长特化形成的，其特点是：多数细胞伸长超过原长度的一倍以上，顶区膨大呈蘑菇突，纵横交错堵塞管腔，其顶段的微绒毛致密而细长，稠密的粗面内质网和稀疏的高尔基体环绕在核的四周，细胞间隙发达；缢缩瓣膜结构具有隔离相邻区段中胚层生殖腺分泌物的功能，致使各区段分泌物在蛋白质电泳谱带数和迁移率，以及经ＰＡＳ染色后在腺腔横切面上的构象存在显著差异。

夜蛾科昆虫“细胞变态”模式的研究

夜蛾科昆虫小地老虎、棉铃虫和粘虫,由幼虫经蛹至成虫的变态过程中,马氏管、直肠、脂肪体、后肠和前肠等成虫器官细胞的发生,具有相同的"细胞变态"模式:(1)预蛹期这些器官的幼虫细胞的细胞器如微绒毛、基膜内褶、线粒体和内质网等在崩解后,形成自体吞噬泡;(2)至前期蛹(1～5d),幼虫细胞残骸内的细胞核迅速分化或分裂,在自体吞噬泡逐渐消失的同时,成虫细胞器不断发生,形成成虫细胞的雏形;(3)后期蛹(5日龄后)成虫细胞进一步发育和分化,羽化后成虫细胞执行与幼虫不同的生理功能。"细胞变态"的启动在预蛹期,此时存在特种类型的脑神经分泌细胞,前胸腺处于蜕皮激素释放高峰期。成虫细胞分化关键时期是前蛹期。

小地老虎成虫直肠的发生和直肠乳突细胞功能性分化

本研究观察了小地老虎Ａｇｒｏｔｉｓｙｐｓｉｌｏｎ末龄幼虫、预蛹、蛹和成虫的直肠结构及成虫直肠乳突的细胞结构特点。结果表明：（１）成虫直肠是由幼虫的隐肾复合体解体后，原有幼虫直肠细胞经过分裂、重组和分化形成的，关键时期是预蛹至化蛹５ｄ；（２）成虫直肠乳突呈圆盘形，自内向外包括内膜、乳突细胞、底膜、肌肉和围膜５层。乳突细胞按结构和功能特点分为帽状细胞、微气管细胞、网状细胞和盘底细胞４种；（３）试验发现成虫直肠膨大是由乳突体积扩增引起的。细胞结构剖析，直肠乳突有一整套完整而精细的结构，能扩增乳突体积和供应足够氧气及营养。文中还讨论了直肠的多种生理功能。

新疆阿拉尔地区棉铃虫自然种群对常用杀虫剂的敏感水平

用点滴法和浸叶法测定了新疆阿拉尔棉铃虫田间自然种群（ＡＬ种群）３龄、４龄幼虫和初孵幼虫对拟除虫菊酯、有机磷、氨基甲酸酯和有机氯４类１４种常用农药的毒力反应，并与国内外已知敏感基线进行比较。结果表明，该种群处于高敏感水平，３龄幼虫的ＬＤ５０接近内地敏感种群或比内地敏感种群更低；在供试药剂中灭多威、氰戊菊酯、甲基对硫磷、久效磷和辛硫磷相对毒力指数仅为０１６～０５；与印度、澳大利亚、泰国、印度尼西亚等国的敏感品系相比，ＡＬ种群４龄幼虫的ＬＤ５０明显较低。在供试的８种药剂中，除甲基对硫磷外，灭多威、西维因、氯氰菊酯、久效磷、溴氰菊酯、氰戊菊酯、硫丹的相对毒力指数仅为００９～０４。试验还用浸叶法测定了常用杀虫剂对该敏感种群初孵幼虫的毒力基线。

小地老虎马氏管细微结构的特点

本文通过光镜和电镜观察,研究了小地老虎Agrois ypsilon Rottemberg六龄幼虫和成虫马氏管及管壁细胞的形态特点和排泄方式。幼虫马氏管中不同细胞的分泌方式和亚细胞结构有很多差异,端段和中段的马氏管细胞基内褶发达,并发现在隐肾内的端段细胞中,有一类含有大量的线粒体。在幼虫中,胞吐排泄占有重要地位,并观察到有微绒毛顶部胞吐、微绒毛间胞吐和顶膜胞吐三类。成虫马氏管细胞主要有二种类型,即大型的基本细胞和小型的底细胞,前者为主,后者数量较少。基本细胞中存在复杂的液胞系,排泄以排放液胞为主。

小地老虎蜕皮腺的形态和结构

用电镜和光镜以及组织化学方法研究了小地老虎(Agrotis ypsilon)幼虫蜕皮腺的形态与结构,及其在5龄—6龄幼虫的蜕皮期和预蛹—蛹的变态期的变化,并对蜕皮腺分泌的蜕皮液进行了组织化学分析。结果表明:(1)幼虫期的蜕皮腺共有15对,其中12对位于胸部1—3节和腹部1—9节的背侧面,其余3对位于前、中、后胸基节窝的外侧,至化蛹30小时后逐渐解体;(2)蜕皮腺的分泌细胞均为“液泡型”,在幼虫每次蜕皮期间出现周期性变化,随着蜕皮过程的结束,细胞由分泌状态进入静止状态,体积逐渐变小,色泽由乳白色趋向透明,液泡变小或消失,内质网数量溅少,液泡内含物对PAS反应减弱;(3)蜕皮前蜕皮腺分泌细胞的内含物PAS强阳性,表明蜕皮液是粘多糖或糖蛋白性质的,它通过导管分泌到新旧表皮层之间。

二化螟对杀虫单等4种杀虫剂的抗药性

以安徽太湖县敏感地区二化螟 (ChilosuppressalisWalker)自然种群为敏感种群 ,根据用药水平差异 ,有代表性地选用浙江、江苏和安徽 3地区田间种群 ,监测了二化螟对杀虫单等 4种杀虫剂的抗性水平。结果表明 :(1)浙江慈溪二化螟 3龄幼虫对杀虫单已产生高水平抗性 (RR =5 4 6 ) ,对杀螟松产生了中等水平抗性 (RR =13 9) ,对敌敌畏和氰戊菊酯仍较敏感 ;(2 )安徽安庆二化螟 3龄幼虫对杀虫单处于中抗水平 (RR =10 8) ,对杀螟松、敌敌畏和氰戊菊酯仍较敏感 ;(3)江苏兴化二化螟 3龄幼虫与安庆相似 ,对杀虫单中抗 (RR =12 6 ) ,对其它被试药剂仍较敏感 ;(4 )不同地区用3龄和 6龄幼虫测定的抗药性水平相近。同时用太湖敏感种群和慈溪高抗种群进行的增效试验表明 ,TPP对杀虫单无增效作用 ,但PBO在抗性种群中对杀虫单有一定的增效作用 。

二化螟体内乙酰胆碱酯酶的分布及纯化方法

研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰胆碱酯酶的活性最低 ,显著低于头部和腹部。成虫体内AChE的活性明显高于幼虫。在亚细胞的分布上 ,乙酰胆碱酯酶主要位于膜上 (86 % ) ,近 46 %的活性存在微粒体中。在 3种纯化乙酰胆碱酯酶的方法中 ,以 3 羧基苯基 乙基二甲基铵作配体的亲和层析法纯化效果最佳 ,乙酰胆碱酯酶的最高纯化倍数为 5 36 0 5倍 ,产率 30 46 %。

二化螟对杀虫剂抗药性的研究进展

综述了国内外关于二化螟抗药性的研究成果,包括:二化螟的分布、危害、防治,抗药性产生和发展,抗药性机理,抗药性测定方法以及抗药性治理措施。

高温胁迫影响雄性棉铃虫生殖力的生理机制

为明确高温 ( 33℃ )影响棉铃虫雄性生殖力的生理机制 ,在明确棉铃虫对高温敏感期的基础上 ,用孚尔根涂片法通过光镜定性观察和定量分析了高温对精子发生和形成过程的影响 ,同时也对高温下精包腺和附腺的结构和功能作了研究。结果表明 ,棉铃虫雄性 6龄幼虫至 3日龄蛹期以及成虫期对高温敏感 ,6龄幼虫和蛹前期对高温的敏感性是由于高温影响了真核和无核精子的形成过程 ,其中精细胞囊期对高温最敏感 ,精细胞囊经受高温后 ,不能充分伸长 ,导致蛹后期精巢中出现大量畸形精细胞囊 ,高温还导致畸形精子束的产生 ;

高温胁迫对雄性棉铃虫生殖力的影响

观察了 2 8 ,33和 36℃温度条件下棉铃虫生存和繁殖情况 ,并以 33℃高温处理不同发育阶段的雌虫和雄虫 ,比较分析了高温胁迫对其生殖力的影响。结果表明 :(1) 36℃高温胁迫下 ,棉铃虫的生存严重受影响 ,在此温度下试虫不能完成个体发育 ,无法进行生殖活动 ;33℃高温对其生存影响较小 ,但影响生殖 ,其产卵力和交配力都显著下降 ,且无有效卵产出。 (2 )高温对生殖力的影响存在性别和虫态差异。棉铃虫在未成熟期对高温 (33℃ )胁迫雄性敏感性大于雌性 ;雄性 6龄幼虫至 3日龄蛹期间对高温敏感 ,以 1～ 3日龄蛹最敏感 ;成虫期雌雄对高温均敏感。

二化螟抗杀虫单和甲胺磷品系的生化特性(英文)

二化螟抗性和敏感品系分别采自浙江和安徽太湖。毒力测定结果表明 ,抗性品系对杀虫单和甲胺磷分别产生了 37 7和 5 2 7倍的抗性。代谢酶活性的测定结果显示 ,抗性品系多功能氧化酶氧脱甲基活性、氮脱甲基活性分别是敏感品系的3 3和 1 34倍 ,而羧酸酯酶活性和谷胱甘肽转移酶活性两个品系之间没有显著差异。说明多功能氧化酶活性提高可能是二化螟对甲胺磷、杀虫单抗性的一个重要机制。为了研究二化螟可能存在的对沙蚕毒素杀虫剂靶标不敏感机制 ,采用RT -PCR等分子生物学技术 ,分别对 5个敏感个体和 4抗性个体中克隆杀虫单作用的靶标烟碱型乙酰胆碱受体α1亚基 (nAChRαsubunit 1)cDNA序列进行了分子克隆。序列比较发现一共存在 33个单核苷酸的多态性 ,其中 14个引起了编码氨基酸的改变。但是没有发现与抗性有关的特有的碱基突变。

二化螟对3种杀虫剂的抗性测定及增效作用研究

采用 4龄幼虫点滴法测定了江苏省不同地区二化螟种群对杀虫单、甲胺磷和三唑磷的抗性水平 ,并以浙江慈溪种群为对象 ,进行了活体增效和药剂混配增效作用研究 .结果表明 :1 )江苏常熟二化螟种群对杀虫单已达极高抗水平 (抗性倍数 1 2 6.0 ) ,高淳种群为高抗水平 (抗性倍数 68.4 0 ) ,其它地区也表现为中等抗性 .2 )吴县、常熟、兴化和高淳 4个种群对甲胺磷表现为中等抗性 ,其它种群抗性较低 .3 )高淳和宿豫种群对三唑磷为中等抗性 ,其它种群为敏感群体 .4 )活体增效测定表明 ,磷酸三苯酯 (TPP)和氧化胡椒基丁醚 (PBO)对二化螟有较明显的增效作用 ,顺丁烯二酸二乙酯 (DEM)的增效作用不明显 .5 )敌百虫和三唑磷 (5∶1 )、敌百虫和丙溴磷 (4∶1 )、杀虫单和阿维菌素 (4 0∶1、80∶1 )按质量比进行混配时 ,增效倍数分别为 4 2 7、2 0 6、1 0 2 8和 2 1 0 。

不同饲养密度对棉铃虫蛾寿命和生殖力的影响

测定了不同饲养密度下棉铃虫蛾的寿命和生殖特性。结果表明，棉铃虫成虫的寿命因不同的饲养条件和性别而异。单头饲养时，雌蛾寿命４～３７ｄ，平均１８．９ｄ；雄蛾５～２６ｄ，平均１５．８ｄ；雌雄寿命差异不显著。单对瓶养和每笼１０对饲养蛾雌雄寿命亦无显著差异。但不同饲养密度下雌蛾或雄蛾寿命均呈显著或极显著差异。单对饲养蛾产卵量最高达２５００粒，最低仅１粒；单对和１０对饲养蛾平均每雌产卵量分别为９０７粒和９５３粒，两者无明显差异。群体饲养有促使雌蛾提早产卵的作用。单对、１０对和３０对饲养密度下每雌接受精包数分别为０．９４，１．９０和０．８１个；未交配蛾比例以３０对饲养蛾最高，达４０％，１０对饲养蛾最低，仅达１０％；每笼１０对蛾是获得较高交配率的最佳密度。雌蛾寿命与产卵量呈反比关系，与残留卵量呈正相关关系，表明产卵量的增加以寿命减少为代价。

杀虫单对二化螟谷胱甘肽转移酶(GSTs)的抑制作用

以二化螟为材料研究了杀虫单、甲胺磷和顺丁烯二酸二乙酯 (DEM)对谷胱甘肽转移酶 (GSTs)的抑制作用。离体抑制试验结果表明 ,杀虫单和DEM都对二化螟GSTs活性有强烈的抑制作用 ,在实验设置的反应体系中 ,2 5mmol·L-1杀虫单和DEM与酶液保温 2min后 ,对GSTs的抑制率达到 70 %以上 ;6min后 ,达到 90 %以上。杀虫单和DEM的抑制中浓度 (IC50 )分别是 1 33和 1 71mmol·L-1,而甲胺磷没有抑制作用。活体实验结果显示 ,用 0 1mol·L-1杀虫单、甲胺磷和DEM 0 0 5 μL分别处理二化螟 4龄幼虫 48h后 ,杀虫单和DEM对GSTs活性的抑制率分别达 10 3%和 14 5 % ,甲胺磷则表现出 8 6 %的诱导作用。酶动力学实验显示 ,杀虫单和DEM都是GSTs的可逆性抑制剂 ,这种抑制作用不是竞争性的。由此表明 ,杀虫单是GSTs的强抑制剂 ,这在杀虫单的毒杀机制中具有重要的意义。

高温对小地老虎和东方粘虫精子发生和形成的影响

小地老虎和东方粘虫精子发生之后，开始分化出真核精子和无核精子。当温度超过３２℃时；出现大量的畸形精细胞囊，精子形成受阻，核与鞭毛明显缩短，鞭毛中微管所受影响最大。但３２℃温度以下不影响真核到无核精子的发生和二叉发生的转换。由此可见，小地老虎和粘虫夏季由南向北迁飞也是一种回避高温的适应性行为。