白杨素对TNF-α诱导慢性暴露TGF-β卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响

目的研究白杨素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导慢性暴露转化生长因子-β(TGF-β)卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成的影响,并探讨其作用机制是否涉及下调NF-κB(p65)蛋白表达。方法 TNF-α(10μg·L^(-1))处理TGF-β(5μg·L^(-1))预暴露12 d的卵巢癌OVCAR-3细胞24 h,球形成率测定法检测不同浓度(5.0、10.0、20.0μmol·L^(-1))白杨素对球形成率的影响;Western blot检测NF-κB(p65)蛋白表达;NF-κB(p65)siRNA转染探讨作用机制。结果 TNF-α(10μg·L^(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L^(-1))处理增高OVCAR-3细胞系球形成率。白杨素能有效地拮抗致炎因子诱导卵巢癌细胞自我更新作用,呈剂量依赖性(P<0.05),并伴随着NF-κB(p65)蛋白表达下调。与对照siRNA相比,NF-κB(p65)siRNA转染OVCAR-3细胞NF-κB(p65)蛋白表达下调,并明显增强白杨素抑制球形成作用。结论下调NF-κB(p65)蛋白表达参与白杨素抑制TNF-α(10μg·L^(-1))联合慢性暴露TGF-β(5μg·L^(-1))处理诱导卵巢癌OVCAR-3细胞系球形成作用。

芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新和uPAR表达的影响

目的:研究芹菜素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新的影响及机制。方法:采用干细胞条件培养基超低黏附板悬浮培养法从体外培养NCI-H446细胞系得到球细胞。测定球形成率用以评价0(0.1%DMSO对照组),5.0,10.0,20.0μmol/L芹菜素对NCI-H446细胞系球细胞自我更新的抑制作用;Western印迹分析球细胞尿激酶型纤维蛋白酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,u PAR)的表达。结果:0,5.0,10.0,20.0μmol/L芹菜素呈剂量依赖性抑制NCI-H446细胞系第2代球细胞的球形成率[球形成率分别为(18.2±1.9)%,(13.6±1.7)%,(10.6±1.6),(6.9±1.3)%],并呈浓度依赖性下调u PAR蛋白的表达(P<0.05)。结论:芹菜素抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球细胞自我更新作用,可能与下调u PAR表达相关。

miR-519d/Twist1轴介导BrMC抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞体外致癌能力

目的探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)是否通过上调miR-519d,下调Twist1表达,进而抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞(liver cancer stem cell-like cells,LCSLCs)体外致癌能力。方法用球培养法从SMMC-7721细胞系得到第2代球细胞,命名为LCSLCs。不同浓度BrMC(1.0、3.0、10.0μmol·L^(-1))处理LCSLCs,实时定量PCR检测miR-519d表达水平;球形成和琼脂集落形成实验评价体外致癌能力;荧光素酶报告基因实验和Western blot分析Twist1转录活性和蛋白表达;miR-519d模拟物或Twist1基因转导探讨BrMC作用的分子机制。结果与SMMC-7721细胞比较,LCSLCs的miR-519d低表达,而Twist1蛋白高表达。BrMC(1.0、3.0、10.0μmol·L^(-1))浓度依赖性降低LCSLCs球形成和琼脂集落形成率;并上调miR-519d表达、下调Twist1蛋白表达。荧光素酶报告基因实验证实,miR-519d可以直接靶向Twist1 mRNA 3'非翻译区,并调节蛋白表达。miR-519d模拟物增强BrMC(3.0μmol·L^(-1))的作用,然而,Twist1基因转导有效逆转BrMC(3.0μmol·L^(-1))的效应。结论 BrMC通过调节miR-519d/Twist1信号轴,抑制SMMC-7721源性LCSLCs体外致癌能力。

DFOG对卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/FoxM1表达的影响

目的 :检查金雀异黄素(genistein,GEN)及其新型合成类似物7-二氟甲氧基-5,4’-二-正辛烷氧基金雀异黄素(7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octyl genistein,DFOG)对人卵巢癌OVCAR3源性球细胞迁移和Twist1/Fox M1蛋白表达的作用。方法 :Transwell小室细胞迁移试验检测细胞迁移率。蛋白质印迹分析细胞Twist1和Fox M1蛋白表达水平。结果 :与OVCAR3细胞相比,OVCAR3源性球细胞迁移率更高。GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)抑制OVCAR3源性球细胞迁移。此外,GEN(40μM)或DFOG(5μM和10μM)平行地下调Twist1和Fox M1蛋白表达。结论 :GEN及其类似物DFOG抑制OVCAR3源性球细胞体外迁移与其抑制Twist1和Fox M1蛋白表达相关。

芹菜素上调SHP-1蛋白表达抑制肝癌MHCC97H细胞STAT3磷酸化及球形成

目的 :研究芹菜素抑制肝癌MHCC97H细胞球形成是否涉及上调Scr同源结构域2磷酸酶-1(SHP-1)蛋白表达和抑制信号转导子和转录激活因子-3(STAT3)磷酸化。方法 :芹菜素(10、20和40μM)处理MHCC97H细胞或SHP-1 siRNA转染细胞;球形成法测定肿瘤球形成率;蛋白质印迹分析细胞SHP-1和p-STAT3蛋白表达。结果 :芹菜素以浓度依赖方式降低MHCC97细胞球形成率,同时上调SHP-1蛋白表达以及抑制STAT3蛋白磷酸化。SHP-1 siRNA转染减弱芹菜素抑制MHCC97细胞STAT3蛋白磷酸化和球形成的作用。结论 :芹菜素上调SHP-1蛋白表达,进而降低STAT3蛋白磷酸化水平参与抑制MHCC97肝癌细胞球形成作用。

TWIST1基因敲低对DFOG抑制OVCAR3源性球细胞自我更新和FoxM1表达的影响

目的:探讨7-二氟甲氧基-5,4’-二-正辛烷氧基金雀异黄素通过下调Twist1/FoxM1表达抑制OVCAR3源性球细胞自我更新作用分子机制。方法:表达TWIST1 sh RNA腺病毒感染OVCAR3源性球细胞敲低TWIST1基因表达。肿瘤球形成试验检查细胞自我更新能力。蛋白质印迹法检测细胞Twist1和FoxM1蛋白表达水平。结果:与OVCAR3细胞比较,OVCAR3源性球细胞具有更强自我更新能力以及高水平表达Twist1和FoxM1蛋白。TWIST1 sh RNA有效抑制OVCAR3源性球细胞肿瘤球形成和下调Twist1和FoxM1蛋白表达。TWIST1 sh RNA协作DFOG(5μM)抑制OVCAR3源性球细胞肿瘤球形成和Twist1和FoxM1蛋白表达。结论:DFOG可能通过调控Twist1表达抑制FoxM1表达,进而抑制OVCAR3源性球细胞自我更新。

IL-8对THP-1巨噬细胞共培养SKOV3细胞EMT和Twist1蛋白表达的影响

目的:研究白介素-8(IL-8)对THP1巨噬细胞共培养卵巢癌SKOV3细胞上皮-间充质转化(EMT)和Twist1蛋白表达的作用。方法:建立THP-1巨噬细胞/SKOV3细胞Transwell共培养系统,并制备共培养条件培养基(Co-CM)。完全培养基、Co-CM、添加重组人IL-8(rhIL-8:10ng/mL)完全培养基或抗-IL-8中和抗体免疫耗竭Co-CM处理SKOV3细胞。蛋白质印迹分析细胞E-cadherin、N-cadherin和Twist1蛋白表达。结果:与完全培养基处理细胞相比,添加重组人IL-8(rhIL-8:10ng/mL)完全培养基或Co-CM处理上调SKOV3细胞N-cadherin和Twist1蛋白表达,并下调E-cadherin蛋白表达。与Co-CM处理细胞相比,抗-IL-8中和抗体免疫耗竭Co-CM处理增高SKOV3细胞E-cadherin蛋白表达水平,与此同时,显著的降低细胞N-cadherin和Twist1蛋白表达水平。结论:IL-8促成THP-1巨噬细胞共培养SKOV3细胞EMT与调控Twist1蛋白表达有关。

芹菜素对肝细胞癌SMMC-7721细胞系干样细胞自我更新及CK2α表达的影响

目的:研究芹菜素是否能下调CK2α表达和抑制SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞自我更新。方法:干细胞培养基超低粘附培养板悬浮培养法扩增肝癌干样细胞;肿瘤球形成法检测肝癌干样细胞的自我更新能力;Western-blot检测细胞CK2α蛋白表达水平。结果:人肝细胞癌SMMC-7721细胞系第2代球细胞具有最强自我更新潜能,可用作肝癌干样细胞模型。芹菜素以浓度依赖方式降低肝癌干样细胞的肿瘤球形成率以及CK2α蛋白表达水平。结论:芹菜素抑制肝癌干样细胞自我更新作用与其下调CK2α表达相关。

白介素-8对SKOV3细胞系卵巢癌干样细胞特性的影响

目的:研究白介素-8(IL-8)能否促成人卵巢癌SKOV3细胞系细胞肿瘤干细胞样细胞特性。方法:用添加或未添加重组人IL-8(rh IL-8:10.0 ng/m L)的干细胞条件培养基处理SKOV3细胞。肿瘤球形成和琼脂集落形成试验测定球形成率和集落形成率。蛋白质印迹分析肿瘤干细胞标志蛋白CD133和CD44表达水平。结果:rh IL-8(10.0 ng/m L)显著地增高SKOV3细胞肿瘤球形成率和琼脂集落形成率。此外,rh IL-8(10.0 ng/m L)上调SKOV3细胞CD133和CD44蛋白表达。结论:rh IL-8具有促进SKOV3细胞肿瘤干细胞样细胞特性作用。

抑制HADC1介导曲古抑菌素A抑制MHCC97H源性球细胞自我更新

目的 :确定组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(HADCI)曲古霉素A(TSA)抑制人肝细胞癌MHCC97H源性球细胞组蛋白脱乙酰基酶-1(HADC1)表达以及自我更新作用。方法 :比色法测定HADC1活性;实时荧光定量PCR分析HADC1 mRNA表达;Western blot分析HADC1蛋白表达水平;球形成培养法检测肿瘤球形成能力。结果 :与单层贴壁生长细胞比较,MHCC97H源性球细胞高表达HDAC1,并具有更强自我更新能力。TSA下调MHCC97H源性球细胞HADC1表达,并显著抑制其自我更新能力。结论 :抑制HADC1表达参与曲古抑菌素A抑制MHCC97H源性球细胞自我更新作用。

蔓荆子总黄酮阻断FoxM1-MMP2信号轴抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞迁移和侵袭

目的:研究蔓荆子总黄酮(FVTF)对SMMC-7721源性肝癌干样细胞(LCSLCs)迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:体外干细胞培养基悬浮培养得到第2代SMMC-7721源性球细胞用作LCSLCs,用溶媒(0.1%DMSO)做对照,不同浓度FVTF处理LCSLCs,运用细胞迁移试验、Transwell小室侵袭试验检测FVTF对LCSLCs迁移和侵袭能力的影响,采用Western bolt分析Fox M1和MMP2蛋白,探讨FVTF发挥作用的机制。结果:与对照组相比,FVTF能下调Fox M1和MMP2蛋白表达,并显著抑制LCSLCs迁移和侵袭能力,且呈浓度依赖性。结论:FVTF有效抑制SMMC-7721源性LCSLCs的迁移和侵袭能力与阻断Fox M1-MMP2信号轴相关。

白杨素调控miR-320和Twist1表达抑制卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤功能

目的 :研究白杨素能否调节miR-320和Twist1表达抑制人卵巢癌SKOV3源性干细胞样细胞体外致瘤能力。方法 :不同浓度白杨素(5.0、10.0和20.0μM)处理肿瘤球培养得到的第2代球细胞即卵巢癌干细胞样细胞。实时定量PCR检测miR-320表达水平。球形成率测定和琼脂集落形成试验评价体外致瘤能力。Western blot分析Twist1蛋白表达。分别用miR-320模拟物或Twist1基因转导探讨白杨素的作用机制。结果 :与亲本细胞相比,SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞miR-320低表达,而Twist1蛋白高表达。白杨素(5、10和20μM)以浓度依赖方式降低SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞球形成率和集落形成率;同时,上调miR-320表达和下调Twist1蛋白表达。miR-320模拟物转染增强白杨素(10μM)的效应。Twist1基因转导能有效逆转白杨素(10μM)的作用。结论 :白杨素通过调控miR-320/Twist1信号轴抑制SKOV3源性卵巢癌干细胞样细胞体外致瘤性。

8-溴-7-甲氧基白杨素抑制促炎因子诱导的肺癌H460细胞干性

目的 :研究8-溴-7-甲氧基白杨素(Br MC)抑制炎性因子(TNF-α联合TGF-β)诱导的H460肺癌干细胞特性作用。方法 :不同浓度Br MC处理TNF-α诱导TGF-β慢性暴露H460细胞。球形成培养和琼脂集落形成法检测自我更新能力和体外致瘤性。Western blot分析肿瘤干细胞标志物CD133、CD44、Bmi1和Oct4表达。结果 :Br MC以剂量依赖方式减少TNF-α诱导TGF-β慢性暴露H460细胞球形成和琼脂集落形成率;并下调CD133、CD44、Bmi1和Oct4蛋白表达。结论 :Br MC能有效地抑制TNF-α诱导TGF-β慢性暴露H460细胞肿瘤干细胞特性。

地西他滨对肝癌干样细胞DNMT1表达和自我更新的影响

目的 :研究DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨(Decitabine,DAC)抑制SMMC-7721细胞系肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLC)DNMT1表达和自我更新作用。方法 :球细胞培养法测定细胞球形成率。5-甲基胞嘧啶检测法测量细胞甲基化程度。实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹分别分析DNMT1的mRNA和蛋白表达。结果 :与SMMC-7721细胞相比,LCSLC具有更高DNMT1表达水平和更强球形成能力。DAC能抑制SMMC-7721源性LCSLC的DNMT1表达和球形成能力。结论 :DAC可能通过抑制DNMT1表达减弱SMMC-7721源性LCSLC自我更新能力。

白杨素及其类似物BrMC对SMMC-7721细胞系球细胞DNMT1活性和球形成的影响

目的:检测白杨素(Chrysin,ChR)及其类似物8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy chrysin,BrMC)是否抑制SMMC-7721细胞系球细胞DNA甲基转移酶1(DNA Methyltransferase 1,DNMT1)活性和自我更新能力。方法:干细胞条件培养基悬浮培养法获得SMMC-7721细胞系球细胞;DNA甲基转移酶活性检测试剂盒测定DNMT1活性;球形成法检测肝癌球形成率;qRT-PCR分析干细胞表面标志物CD133和CD44 mRNA表达水平。结果:ChR(40μM)以及BrMC(5和10μM)显著抑制SMMC-7721细胞系球细胞DNMT1活性,降低肝癌球形成率,下调CD133和CD44 mRNA表达。结论:ChR和BrMC能有效地抑制SMMC-7721细胞系球细胞DNMT1活性和自我更新能力。

立德树人,百年大计——浅析小学班主任德育工作策略

小学阶段是义务教育的开始时期,这一时期学生的身心都需要得到引导而往正确的方向发展,德育工作在这一时期显得尤为关键,因此,小学班主任应当在德育工作中采取有效的策略。德育能够帮助提高小学生的道德认识,促进其良好道德行为的发展,促进学生的全面素质发展,因此,本文主要探讨小学班主任德育工作的策略。