基于“三导向”的医学本科生创新创业教育实践的探索

目的探讨“三导向”人才培养模式在医学本科生创新创业教育实践的可行性及实施效果。方法2020年6月—2022年6月,选择85名南昌大学第一附属医院麻醉学专业的本科生作为研究对象,根据不同的人才培养模式分为对照组和试验组。对照组43名实施传统教学模式;试验组42名实施“三导向”人才培养模式。统计分析学生的考试(包括理论考试与技能考试)成绩、“三导向”评分与创新创业满意程度。结果对照组理论成绩和技能成绩为(75.35±7.47)分、(91.37±2.47)分,高于试验组[(81.12±7.14)分、(94.76±2.80)分],差异有统计学意义(P<0.05)。对照组执业能力、职业精神和社会适应评分为(32.47±5.05)分、(31.19±4.26)分、(24.58±3.09)分,均高于试验组[(39.00±4.93)分、(36.57±2.93)分、(27.26±2.44)分],差异有统计学意义(P<0.05)。试验组科研兴趣、教学效果、参与创新创业类活动的意愿满意度评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用“三导向”人才培养模式更能带动医学本科生进行创新创业教育实践,有利于提高学生的综合素质能力。

超声引导下肋横突孔阻滞和竖脊肌平面阻滞在乳腺癌患者术后镇痛效果的比较

目的评价超声引导下肋横突孔阻滞(CFB)和竖脊肌平面阻滞(ESPB)对乳腺癌患者术后镇痛效果的影响。方法选择2020年7月至2021年12月行乳腺癌根治术的女性患者80例,年龄20~75岁,体质指数(BMI)22~33 kg/m^(2),ASAⅡ或Ⅲ级。采用随机数字法分为两组:CFB组与ESPB组,每组40例。每组在全麻后分别进行超声引导下CFB与ESPB,选择T_(4)横突水平,注射0.375%盐酸罗哌卡因0.4 mL/kg。术毕两组均行患者自控静脉镇痛。记录在PACU拔管时间和停留时间。记录拔管后即时及术后2、4、12、24 h疼痛VAS评分。镇痛泵有效按压次数、补救镇痛情况、穿刺不良反应与相关并发症等发生情况。结果PACU拔管时间CFB组明显短于ESPB组(P<0.05),拔管后即时及术后2、4、12 h CFB组的VAS疼痛评分明显低于ESPB组(P<0.05),镇痛泵有效按压次数明显少于ESPB组(P<0.05),补救镇痛率CFB组明显低于ESPB组(P<0.05)。结论与ESPB比较,CFB可以有效缓解乳腺癌手术患者的术后疼痛,也减少了术后镇痛药物的使用,提高患者的舒适度。

术前针刺治疗对糖尿病患者围术期胰岛素抵抗和细胞免疫的影响

目的探究术前针刺治疗对2型糖尿病(T2DM)患者围术期的血糖水平、胰岛素抵抗(IR)以及T淋巴细胞亚群的影响.方法选取接受全身麻醉腹腔镜下胃肠手术治疗的40例T2DM患者,按随机数字表法分为术前针刺组(A组)和空白对照组(C组),每组20例.A组在进行麻醉诱导前30 min针刺双侧足三里穴、合谷穴持续30 min;C组不进行电针刺激.记录针刺前(T_(0))、手术开始30 min后(T_(1))、手术结束当时(T_(2))、手术后24 h(T_(3))2组空腹血糖水平(Glu)、胰岛素水平(INS)、T淋巴细胞亚群水平(CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)的比值),并计算胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI).记录2组手术情况(手术时间、术中液体输注量与失血量、术中丙泊酚和瑞芬太尼用量)及术后情况(镇痛泵按压次数,恶心呕吐发生次数和VAS疼痛评分).结果A组在T_(1)、T_(2)时Glu、INS、IRI明显低于C组,ISI明显高于C组(P<0.001).A组在T_(1)、T_(2)、T_(3)时CD3^(+)细胞水平、CD4^(+)细胞水平、CD4^(+)/CD8^(+)比值明显高于C组(P<0.05或P<0.001).结论术前针刺能够改善T2DM患者的胰岛素抵抗,并提高免疫力.

嗜酸乳杆菌缓解LPS诱导的急性肺炎小鼠肺部炎症及机制研究

目的探究嗜酸乳杆菌对脂多糖(LPS)诱导的急性肺炎小鼠的炎症的影响及可能的机制。方法将21只小鼠分为对照组(NC)、模型组(LPS)和嗜酸乳杆菌处理组(Probiotics)。NC组(n=6)小鼠正常喂养,LPS组(n=8)和Probiotics组(n=7)小鼠采用LPS(10 mg/kg)气管滴注法建立急性肺炎小鼠模型,Probiotics组小鼠给予嗜酸乳杆菌,7 d后处死小鼠。通过HE染色、肺组织湿/干质量比(W/D)评估肺组织的病理学改变;采用ELISA检测支气管肺泡灌洗液中的炎症因子水平和肺组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;16S rDNA测序检测肠道菌群的多样性;免疫组织化学染色评估ZO-1和TRPV4的表达。结果与LPS组相比,Probiotics组的W/D、炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,IL-10升高(P<0.05);MPO活性减弱(P<0.05);结肠和肺组织中TRPV4表达下调,结肠组织ZO-1表达上调;同时螺杆菌属和脱硫弧菌属的丰度显著改变。结论嗜酸乳杆菌能显著减轻LPS诱导的小鼠肺部炎症,可能与肠道内脱硫弧菌属丰度、TRPV4通道活性和肠黏膜屏障通透性有关。

利多卡因对糖尿病大鼠脊髓神经元的损伤作用

目的探讨利多卡因对糖尿病大鼠脊髓神经元的损伤作用。方法选择健康SPF级雄性SD大鼠30只、GK大鼠30只,12周龄,体重180~200 g。取大鼠脊髓神经元进行体外分离培养。采用随机数字表法将大鼠脊髓神经元分为四组:SD大鼠脊髓神经元组(C组)、SD大鼠脊髓神经元+利多卡因组(CL组)、GK大鼠脊髓神经元组(GK组)和GK大鼠脊髓神经元+利多卡因组(GKL组)。C组和GK组置于DMEM高糖培养基中,在37℃,5%CO_(2)培养箱内培养24 h,CL组和GKL组在相同条件下加入浓度为2 mmol/L的利多卡因培养24 h。采用Western blot法检测脊髓神经元中自噬相关蛋白PINK1、mTORC1、AMPK、p-AMPK、LC3Ⅱ和LC3Ⅰ含量,DCFH-DA法检测脊髓神经元中活性氧(ROS)含量,免疫荧光法检测脊髓神经元中PINK1和LC3含量。结果与C组比较,CL组、GK组和GKL组脊髓神经元PINK1、LC3含量和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ比值均明显升高(P<0.05),mTORC1含量明显降低(P<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05)。与GK组比较,GKL组脊髓神经元PINK1、LC3含量和p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ比值明显升高(P<0.05),mTORC1含量明显降低(P<0.05),ROS含量明显升高(P<0.05)。结论利多卡因诱导GK大鼠脊髓神经元的自噬相关蛋白的表达及ROS的释放,加重对GK大鼠脊髓神经元的损伤。

针对端粒酶蛋白催化亚单位的肿瘤免疫治疗研究

端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)相对分子质量Mr 127 000, 包含1 132个氨基酸,其基因位于5号染色体短臂的最末端(5p15.33),在90%以上的人类肿瘤中高表达,而正常成熟组织中则基本没有表达,可作为广谱的抗肿瘤治疗分子靶点.DC是已知体内激活静息T细胞功能最强的专职抗原递呈细胞,经DC递呈hTERT抗原表位信息后,CTL能识别从hTERT提取的多肽表位,并在体外杀伤多种组织来源的hTERT阳性的肿瘤细胞.因此hTERT是迄今发现的一个最具应用前景的肿瘤广谱相关抗原,针对hTERT的肿瘤免疫基因治疗有可能成为肿瘤免疫治疗的又一研究热点.

miR-138对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:探讨microRNA-138(miR-138)对人胃癌SCC-7901细胞株增殖能力的影响及可能的机制。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine2000将miR-138 RNA转染人胃癌SGC-7901细胞株,采用荧光实时定量PCR检测miR-138表达丰度;采用流式细胞术检测转染后的细胞周期;采用MTT法检测细胞生长曲线;采用Western blotting检测人端的端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白的表达。结果:转染miR-138 RNA后,SGC-7901细胞内miR-138表达丰度升高,细胞增殖能力受到显著抑制,同时hTERT蛋白表达水平下调。结论:miR-138可抑制人SCC-7901细胞的增殖能力,机制可能是通过抑制靶基因hTERT蛋白的表达。

端粒酶hTERT促进肿瘤细胞侵袭与转移及其机制研究

目的观察hTERT基因修饰对人骨肉瘤细胞系U-2OS生物学行为的影响。方法采用脂质体法将克隆有人全长cDNAhTERT的真核荧光质粒(pIRES2-EGFP-hTERT)转染端粒酶阴性的人骨肉瘤U-2OS细胞,经G418筛选,免疫组化和Westorn Blot鉴定后,检测其端粒酶活性的改变、生长周期以及生物力学的变化。结果成功转染人真核荧光表达载体的U-2OS细胞能有效抵抗G418,并可有效表达hTERT蛋白,细胞内端粒酶活性明显增强,G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高,并且还明显增强了对细胞外基质的粘附力。进一步采用Transwell小孔迁移实验检测发现,hTERT/U2OS侵袭能力明显增强。结论转染hTERT基因后,U-2OS细胞内可同时通过端粒酶途径延长端粒。hTERT基因修饰可促进细胞周期进程,促使细胞从G1期→S期。通过替代途径延长端粒的肿瘤细胞在hTERT基因修饰后,增殖能力及侵袭能力明显增强。

miR-29在胃癌中的表达及其临床意义

目的观察胃癌组织中miR-29的表达情况及其与年龄、性别、分化程度、淋巴结转移、TNM分期和预后的关系,探讨miR-29在胃癌中表达的临床意义及其价值。方法收集胃癌手术标本,采用Trizol试剂抽提总RNA,采用实时荧光定量PCR技术检测86例胃癌组织中miR-29的表达水平,并对所有病例进行随访。结果有淋巴结转移的胃癌患者miR-29低表达的比例显著高于无淋巴结转移组(59.6%vs.25.0%,P=0.004),Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者miR-29低表达的比例显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者(63.8%vs.40.0%,P=0.029),miR-29与年龄、性别、分化程度无关。43例miR-29低表达胃癌患者的中位生存期为35.0月,3年生存率为39.6%;43例高表达者的中位生存期为44.0月,3年生存率为66.1%,两组差异显著(P=0.007)。结论 miR-29在胃癌组织中高表达能抑制肿瘤淋巴结转移进而改善预后,可作为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。

特发性门脉高压症

特发性门脉高压症临床少见,病因不明,是导致门脉高压的第二大原因.主要表现为门脉高压、显著脾肿大伴脾功能亢进及贫血,肝功能基本正常.病理改变主要表现为门静脉纤维化,肝内门静脉终末支破坏,以及肝实质萎缩,但无肝硬化改变.血流动力学改变为肝内窦前性门脉高压,即肝门静脉压力显著升高而肝静脉楔压基本正常,脾静脉及门静脉血流量增加.治疗基本与肝硬化所致门脉高压相同,预后主要取决于上消化道静脉曲张的严重程度及其处理.

胃黏膜癌变过程中hTERT和相关基因表达的变化及其临床意义

目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)、c-myc、bcl-2、NF-κB蛋白在正常胃黏膜(normalmucosa,NM)、肠化(intestinalmeta-plasia,IM)、异型增生(dysplasia,DYS)、早期胃癌(earlygastriccancer,EGC)和进展期胃癌(advancedgastriccancer,AGC)中的表达水平、相互联系及其临床意义。方法经手术或胃镜病理证实的不同病变胃黏膜组织132例为研究对象(其中NM20例、IM30例、DYS15例、EGC24例、AGC43例),采用免疫组化SP法分别检测其hTERT、c-myc、bcl-2、NF-κB的表达水平,并对各指标阳性表达率、相关性及临床病理联系进行比较分析。结果在胃黏膜癌变过程中,除bcl-2外,hTERT、c-myc、NF-κB的表达随着胃黏膜病变程度的加重而逐渐增加,各组间比较差异显著;进一步分析表明hTERT与c-myc在IM、DYS、AGC等3组中具有显著的相关性(P<0·05),而hTERT与bcl-2、NF-κB在IM、DYS、EGC、AGC等各组中均无显著的相关性(P>0·05);临床病理分析表明,hTERT在低分化及未分化中的表达显著高于高、中等程度分化(P<0·05),而与性别、年龄、肿瘤大小等无关。结论hTERT随着胃黏膜病变程度的加重,其阳性表达率逐渐增高,提示hTERT可能在胃黏膜癌变过程中具有重要意义,是胃黏膜癌变的早期事件;c-myc过表达可能是激活hTERT过表达的重要调节因素;hTERT不仅可以作为胃黏膜癌变的早期诊断指标,而且有可能成为胃癌或其他肿瘤基因治疗或免疫治疗的良好靶位。

胃癌组织中miR-29的表达及其临床意义

目的:研究胃癌组织中miR-29的表达情况及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2005年至2010年中国人民解放军第324医院收治的进展期胃癌113例患者的手术标本,定量PCR检测胃癌组织及癌旁组织内miR-29的表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织内miR-29的表达显著低于对应的癌旁组织(2.62±1.17vs3.14±1.70,P=0.006),伴淋巴结转移的胃癌患者低表达miR-29百分率显著高于无淋巴结转移组(58.9%vs32.5%,P=0.007),miR-29低表达胃癌患者中位生存率显著低于miR-29高表达者(33.0vs44.0个月,P=0.013)。结论:胃癌组织低表达miR-29,miR-29有可能成为胃癌的预后判断指标及治疗靶标。

肝素酶:抗肿瘤转移的新靶点

肝素酶(hpa)是裂解硫酸乙酰肝素蛋白多糖的惟一酶类,能破坏细胞外基质及基底膜,并参与肿瘤血管生成,与肿瘤的侵袭转移密切相关.hpa也由此逐渐成为引人注目的抗肿瘤治疗新靶点,其抑制剂的研制可望为抗肿瘤治疗开辟新的途径.本文综述了hpa的结构与功能,对肿瘤转移的促进作用与机制,以及hpa抑制剂作为抗肿瘤新药的最新研究进展.

活体生物光学分子成像技术研究进展

活体生物体内光学成像技术是近年发展起来的新兴技术,在生命科学研究中占有重要地位。其原理为采用荧光报告基团或荧光染料标记的目的细胞,通过灵敏的光学成像仪器,检测活体生物体内细胞生物学行为。按发光模式可分为生物自发光和荧光激发光两类。相对于传统光学成像技术,具有无创、可多次重复、实时活体成像、灵敏、安全等优势,目前已成为肿瘤诊断、治疗、疗效判断及抗肿瘤药物筛选等研究领域中不可缺少的工具。

负载hTERT复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的:构建负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的复制缺陷型腺病毒.方法:将克隆有正义hTERTcDNA的腺病毒穿梭质粒pDC315-hTERT与腺病毒包装质粒pBHGlox-DeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒表达载体(Ad-hTERT).对Ad-hTERT扩增、纯化并浓缩后,进一步行感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.结果:纯化浓缩后的Ad-hTERT滴度可达5×1012pfu/L.电镜下可见在HEK293细胞中形成的病毒颗粒,PCR双引物鉴定Ad-hTERT可扩增出Ad及hTERT特异片段,而对照则不能扩出hTERT片段.结论:成功构建了负载hTERT基因的复制缺陷型腺病毒.

负载肝素酶复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定

目的包装负载人肝素酶(hpa)全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体(Adhpa)。方法将肝素酶正义腺病毒穿梭质粒pDC315hpa与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE1,3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Adhpa,并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Adhpa进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/ml。电镜证实病毒浓缩液中存在病毒颗粒,并可见病毒在HEK293细胞中复制。PCR双引物鉴定Adhpa可扩增出Ad及hpa特异片段,而对照则不能扩增出hpa片段。结论成功包装了负盘。

miR-29在胃癌患者血清中的表达及其对预后的影响

目的观察胃癌患者术前、术后血清标本中miR-29的表达情况及其与预后的关系,探讨胃癌患者血清中miR-29的检测在胃癌早期诊断及预后判断中的价值。方法采用实时荧光定量PCR技术检测46例胃癌患者手术前后及30例健康成年人血清中miR-29的表达水平。结果胃癌患者血清中miR-29表达水平显著低于健康成年人;胃癌患者术后血清中miR-29表达水平较术前上调,且上调水平越高预后则越佳。结论 miR-29在血清中的表达水平可作为胃癌早期诊断及预后判断的miRNA指标。

人肝素酶基因正反义荧光真核表达载体的构建及肝癌细胞转染

目的构建正义和反义人肝素酶绿色荧光蛋白真核共表达载体,并分别转染人低转移肝癌细胞株MHCC97-L及高转移细胞株MHCC97-H和HCCLM6。方法采用基因重组技术,用EcoRⅠ从pcDNA3-Hpa质粒上切下约1.7 kb的人肝素酶全长cDNA片段,然后连入pIRES2-EGFP质粒的EcoRⅠ酶切位点上,经BamHⅠ酶切鉴定出正义和反义表达载体,并进一步测序确认。用脂质体法将肝素酶正义真核表达载体转入人低转移肝癌细胞株MHCC97-L,反义真核表达载体转入人高转移肝癌细胞株MHCC97-H和HCCLM6,24 h后荧光倒置显微镜下检测转染结果。结果经BamHⅠ酶切后,正义质粒形成5.3 kb和1.7 kb两条DNA片段,而反义重组质粒为6.5 kb和0.5 kb两条DNA片段,与理论计算值完全一致;测序结果进一步确认了方向的正确性。转染成功的肝癌细胞在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光。结论成功构建了人肝素酶的正、反义真核表达载体,并成功转染人低、高转移肝癌细胞株,为进一步研究正、反义肝素酶基因转染对肝癌细胞的转移能力的影响奠定了基础。

miR-29a靶基因VEGF-A的生物信息学预测及鉴定

目的预测并鉴定miR-29a的靶基因血管内皮生长因子VEGF-A。方法采用生物信息学技术,预测miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR结合位点;分别采用RT-q PCR、Western blot技术检测过表达miR-29a后,BGC-823细胞内VEGF-A表达水平的变化;采用双荧光素酶实验,验证miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR的结合位点。结果生物信息学技术预测显示miR-29a可稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR;miR-29a过表达后可明显抑制BGC-823细胞VEGF-A mRNA 及蛋白表达水平;双荧光素酶实验证实,与阴性对照相比,miR-29a拟似物(mimics)可通过稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR抑制荧火虫荧光素酶活性(0.48±0.08 vs 1.00±0.22,P<0.05)。结论 miR-29a通过直接结合于靶基因VEGF-A mRNA 3'UTR抑制VEGF-A蛋白表达。