大鼠肺孢子虫肺炎动物模型建立及病原学病理学观察

纯系Wistar大鼠皮下注射醋酸可的松25mg/次,每周2次,用药7周即可成功诱发大鼠肺孢子虫肺炎。相差显微镜直接镜检、姬姆萨氏染色(Giemsa's stain)、六亚甲基四胺银染色(GMS stain)和亚甲胺蓝染色(TBO stain)均可检出包囊。其中六亚甲基四胺银染色可显示囊壁特征性的括弧样结构,具有确诊价值。病理改变主要为肺泡间隔增厚和淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡中少量蜂窝状渗出物。对肺孢子虫的滋养体。

弓形体感染与儿童智力发育障碍的初步研究

用乳胶凝集试验(Latex agglutination)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-Iinked immunosorbent assay)检测79对弱智儿童及母亲、107对智力正常儿童及母亲血清弓形体抗体。结果表明:两法有良好一致性。两项试验双阳性率依次为6.33,8.86、0和0.93％。弱智组双阳性率显著为高(P<0.05)。19例合并先天性畸形的弱智儿童双阳性率为15.7％,显著高于智力正常儿童或无先天性畸形的弱智儿童(0％,3.33％,P<0.01)。因此,弓形体感染可能是造成儿童智力发育障碍的病因之一,并与儿童先天性畸形有一定关系。建议国内对孕妇常规进行血清弓形体抗体检查。

肺孢子虫病实验与临床研究 Ⅱ．免疫印迹试验检测人血清肺孢子虫抗体

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析鼠源卡氏肺孢子虫包囊可溶性抗原呈现２０条以上多肽区带，主带分子量分别为＞１００、８５－９４、６７、５２和３４ｋＤａ。ＥＩＴＢ检测表明重庆地区健康人血清中存在识别１１０、１０５、８５、６７、５２和４６ｋＤａ的ＩｇＧ型抗体，抗体阳性率为５６．７％（５９／１０４）。其中８５ｋＤａ抗原能与抗人源肺孢子虫单克隆抗体２Ｇ２起反应。健康人血清抗８５ｋＤａ抗原的抗体阳性率为３７．５％（３９／１０４），但ＩｇＭ型抗体均为阴性。另外检测７例确诊的卡氏肺孢子虫病患者，４例血清ＩｇＧ型抗体阳性，其中３例抗８５ｋＤａＩｇＧ型抗体阳性。

蒿甲醚治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎的初步观察

用皮下连续注射醋酸可的松６周建立大鼠肺孢子虫肺炎动物模型，并用国产蒿甲醚进行实验治疗。经蒿甲醚１００ｍｇ／ｋｇ·次，每日１次连续５ｄ，大腿肌肉注射后，治疗组大鼠肺印片中卡氏肺孢子虫包囊均数较未治疗对照组有所减少，而与戊烷脒治疗组相近，提示蒿甲醚可能是一种有前途的抗卡氏肺孢子虫新药。

聚合酶链反应结合非放射性标记探针检测粪便中微小隐孢子虫

目的：利用非放射性标记探针技术检测经聚合酶链反应扩增后的人粪便中微小隐孢子虫ＤＮＡ，观察该方法的特异性和敏感性。方法：用裂解法从粪便标本直接制备微小隐孢子虫模板ＤＮＡ，用一对人工合成的寡核苷酸作ＰＣＲ引物，扩增长度为４５２ｂｐ的微小隐孢子虫目的ＤＮＡ片段。将扩增产物直接点在或经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法转移到硝酸纤维素膜上，再和生物素标记的寡核苷酸探针杂交，经底物（ＢＣＩＰ）呈色观察。结果：阳性杂交信号只见于微小隐孢子虫ＤＮＡ扩增产物，而约氏疟原虫、杜氏利什曼原虫、贾第虫、白色念珠菌、大肠杆菌和人白细胞ＤＮＡ均无杂交信号。ＰＣＲ结合斑点杂交或Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法检测隐孢子虫ＤＮＡ的敏感性均为０．１ｐｇ。结论：非放射性探针检测人粪便隐孢子虫ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物，具有敏感性高、特异性强、操作较简便及无放射性污染等优点。

隐孢子虫病免疫学研究进展

隐孢子虫是人与某些家畜家禽的一种重要的分布广泛的腹泻病原虫、根据Current统计,在1980年前,全世界发表的有关隐孢子虫病文献不足30篇;但到1991年7月则迅速增加到950篇以上。本文仅就隐孢子虫病免疫学有关文献综述如下。 隐孢子虫抗原 Tilley和Upton采用SDS-PAGE、Westernblot、植物血凝素结合和^(125)

一种新发现的腹泻病原虫──圆孢子虫（Cyclospore cayetanensis）

一种新发现的腹泻病原虫──圆孢子虫（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｅｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）陈雅棠综述刘约翰审校重庆医科大学传染病寄生虫病研究所（６３００４２）１９８６年，Ｓｏａｖｅ等首先报告在４例从海地、墨西哥旅游归来的腹泻病人粪便中发现了一种球虫样小体。１...

隐孢子虫病实验与临床研究——Ⅱ.不同动物隐孢子虫感染观察

BALb/c小鼠66只、Wistar大鼠38只、豚鼠10只和家兔6只分别给予皮下注射醋酸可的松,每周2只.连续给药3周后开始用金胺—酚染色、改良耐酸染色和沙黄—美蓝染色法检查动物粪便中隐孢子虫卵囊.小鼠隐孢子虫卵囊阳性率为71.21%(47/66);大鼠则为34.21%(13/38).小鼠粪便中卵囊数量明显多于大鼠.小鼠粪便中隐孢子虫卵囊可分为大型囊(7.47μ×5.90μ)和小型囊(4.6μ×4.33μ)两种.豚鼠与家兔均未能检出隐孢子虫卵囊.小鼠口服或皮下注射地塞米松均未能诱发隐孢子虫感染.

隐孢子虫病实验与临床研究 Ⅰ、免疫抑制大鼠的隐孢子虫与卡氏肺孢子虫双重感染

纯系 Wistar 大鼠38只,皮下注射醋酸可的松25mg/次,2次/周,连用4周开始检查大鼠粪便涂片中隐孢子虫卵囊和肺印片中卡氏肺孢子虫包囊。结果表明,大鼠用药4周粪便即可检出隐孢子虫卵囊,11周时检出率最高。用药4周肺印片亦可检出卡氏肺孢子虫包囊,7—8周时全部大鼠均可检出。

蒿甲醚治疗实验大鼠肺孢子虫肺炎的电镜观察

用皮下注射醋酸可的松６周建立实验大鼠肺孢子虫肺炎动物模型，并用国产蒿甲醚进行试验治疗。治后大鼠肺组织超薄切片透射电镜观察，发现蒿甲醚可导致卡氏肺孢子虫产生以下３种超微结构改变：（１）胞浆内出现大量空泡；（２）线粒体肿胀；（３）核膜破裂。以上改变与戊烷脒对照组相似。

隐孢子虫病实验与临床研究——Ⅲ.实验小鼠隐孢子虫病透射电镜观察

描述对免疫抑制小鼠肠上皮细胞寄生的隐孢子虫滋养体、裂殖体和大配子的超微结构及肠上皮细胞改变的透射电镜观察结果。虫体在肠上皮细胞附着处可见一明显电子致密带,并被肠上皮细胞来源的纳虫空泡包围。虫体在附着处其胞浆膜形成复杂的膜性皱褶并和肠上皮细胞质膜紧密接触。在裂殖子内可见电子致密颗粒和棒状体样结构,其意义尚不明瞭。

蠕虫幼虫移行症——感染性疾病(7)

蠕虫幼虫移行症——感染性疾病（７）重庆医科大学传染病寄生虫病研究所（６３００４２）陈雅棠蠕虫幼虫移行症是临床常见的一组由动物寄生性蠕虫幼虫在人体内移行而引起的疾病。由于人不是适宜的终宿主，因此该类蠕虫幼虫在人体内一般不能发育成熟为成虫，但幼虫移行过程...

多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答

目的 观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法 在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体 (pQ ELP)的基础上 ,以亲和层析法纯化重组蛋白 ,SDS PAGE鉴定 ,Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白 (A组 )及ELP重组蛋白加弗氏佐剂 (B组 )免疫Balb c小鼠 (10只 组 ) ,以生理盐水 (NS组 )作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞 (PMNC)在受到特异抗原刺激后 ,产生IL 4、IL 12和IFN γ的能力 ,3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果 本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后 2周 ,A、B组小鼠均产生了大量的特异IgG1抗体 ,B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN γ外 ,A组、NS组IFN γ及各组IL 4和IL 12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高 ,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的 2 .8和 10 .8倍 ,受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时 ,A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论 多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答 。

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗构建及鉴定

目的构建和鉴定细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合基因疫苗。方法自行设计引物,从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA为模板,通过RT-PCR分别扩增Eg95和EgA31抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Eg95和EgA31,得到Eg95-EgA31融合基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,定向克隆到大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,构建重组质粒pGEX-Eg95-EgA31,抽提质粒进行双酶切鉴定,电穿孔法转化两歧双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb),构建细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT-PCR扩增出约1 016bp的Eg95-EgA31融合基因;重组质粒用双酶切鉴定可切出预期大小片段,以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到约1016bp的Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合基因疫苗,为该疫苗的开发利用奠定了实验基础。

白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究

目的 研究白果内酯治疗实验大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效。方法 以地塞米松皮下注射大鼠 6周诱导建立肺孢子虫肺炎动物模型 ,用不同剂量白果内酯治疗实验大鼠 ,以免疫抑制为对照组 ,通过大鼠肺质量 /体质量的值 ,肺印片每视野的包囊均数为指标评价疗效。结果 白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺质量 /体质量的值分别为 0 0 0 97± 0 0 0 3 3、0 0 10 2± 0 0 0 2 1,明显低于免疫抑制组对照组 0 0 14 6± 0 0 0 3 4(P <0 0 5 )。白果内酯 2 0mg/kg、3 0mg/kg治疗组大鼠肺印片每视野的包囊均数分别为 2 3 1± 0 88、1 95± 0 5 7明显低于免疫抑制组对照组 7 3 9± 2 3 3 (P <0 0 1)。

双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响

目的 检测双氢青蒿素对卡氏肺孢子虫肺炎（PCP）大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响。方法 以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立PCP动物模型,用60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠,杀鼠取肺,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用PI和TUNEL法检测其凋亡,同时设有正常大鼠对照组。结果 感染组和治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率显著高于正常对照组,治疗组大鼠肺泡巨噬细胞凋亡率明显低于感染组。结论 卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞发生凋亡,经双氢青蒿素治疗后PCP大鼠肺泡巨噬细胞凋亡降低。

聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫

目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作ＰＣＲ的模板。用一对人工合成的寡核苷酸序列作为ＰＣＲ引物，扩增长为４５２ｂｐ的Ｃ．ｐ．目的ＤＮＡ片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色检测。结果：从感染Ｃ．ｐ．的人和豚鼠粪便标本ＤＮＡ抽提物中均扩增出目的片段，而从其他几种寄生虫、肠道微生物或宿主ＤＮＡ中均不能扩增出目的片段。本方法的敏感性比目前常用的检测方法高约１００倍。结论：ＰＣＲ技术检测人和动物粪便中的Ｃ．ｐ．，具有敏感性高且特异性强的特点，有希望成为隐孢子虫病诊断和流行病学调查的有力手段。

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31融合蛋白诱导小鼠免疫应答

目的研究细粒棘球绦虫(Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31融合蛋白免疫小鼠后诱导的免疫应答。方法 56只SPF级雌性Balb/c小鼠随机均分7组,分别为重组Bb-Eg95-EgA31皮下注射组(A组)、肌肉注射组(B组)、鼻腔内接种组(C组)、口服灌胃组(D组)、空载体对照组(E组)、Bb对照组(F组)和Bb培养用液体培养基(MRS)对照组(G组)。免疫后8周各组鼠用50个Eg原头节攻击,攻击25周后,处死小鼠,分离细粒棘球蚴包囊并称重,计算囊重抑制率;ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE和脾细胞上清液IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平;MTT法测定脾细胞增殖反应;流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T细胞百分比和脾细胞凋亡发生率。结果重组Bb-Eg95-EgA31免疫组小鼠的囊重抑制率分别为45.33%、41.33%、70.67%和62.67%;血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgG1水平升高,IgG3和IgE降低;脾IFN-γ、IL-12和TNF-α水平升高,IL-10水平降低;脾T淋巴细胞明显增殖;脾CD4+和CD8+T细胞显著增加;脾细胞凋亡发生率显著降低。结论细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-E-gA31融合蛋白能诱导小鼠产生有效的保护性免疫应答。

经双氢青蒿素治疗后卡氏肺孢子虫肺炎大鼠的肺部病理学变化

目的 研究经双氢青蒿素治疗后卡氏肺孢子虫肺炎 (PCP)大鼠肺部病理学变化。方法 以地塞米松磷酸钠皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型 ,用 6 0mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠 ,杀鼠取肺 ,用光镜和电镜观察肺部病理学变化 ,同时设有感染对照组和正常对照组。结果 肺印片中卡氏肺孢子虫 (Pc)包囊数目显著减少 ,肺组织炎症明显减轻 ,Pc滋养体表膜和核膜破裂 ,胞质中出现大量空泡和高电子密度颗粒 ,Pc包囊中也出现空泡 ,囊内小体变性坏死。结论 双氢青蒿素可杀死Pc滋养体和包囊 ,从而减轻肺组织的炎症反应。

旋毛虫病患者血清细胞因子和一氧化氮水平检测

目的 检测旋毛虫病患者血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 1β(IL - 1β)和一氧化氮 (NO)水平。方法 分别收集 2 0例旋毛虫病患者和健康志愿者血清 ,用试剂盒分别检测血清 TNF-α、IL - 1β和 NO水平。结果 旋毛虫病患者血清 TNF-α和 NO水平显著升高 ,IL - 1β水平轻微升高。结论 TNF-α和 NO可能在宿主杀伤旋毛虫。