白术多糖对小鼠胸腺与脾脏指数、组织结构及p38/MAPK信号通路的影响

为探究白术多糖的最适作用浓度,试验选用40只4周龄Balb/c小鼠随机分为对照组和不同浓度白术多糖灌胃组(100、200、400、600 mg/kg),灌胃14 d后,采集小鼠胸腺与脾脏,称重并计算器官指数,制作石蜡切片观察组织结构变化,采用real-time PCR检测组织中p38/MAPK信号通路相关的ASK1、p38、MSK1/2 mRNA的相对表达量。结果显示,与对照组相比,200 mg/kg的白术多糖可显著提升小鼠免疫器官指数(P<0.05),使组织结构更为完善,并且上调ASK1、p38、MSK1/2基因的相对表达量,而添加低浓度或高浓度白术多糖组小鼠的无明显变化。表明添加200 mg/kg白术多糖可激活小鼠胸腺组织细胞与脾脏组织细胞的p38/MAPK信号通路,从而促进免疫器官的发育,增强机体的免疫调节作用。

LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。

不同来源硒对小鼠淋巴结中离子谱的影响

[目的]探究不同来源的硒对小鼠淋巴结中离子谱的影响,进而探讨硒调节淋巴结免疫可能的作用途径。[方法]选择40只BALB/c小鼠,随机分为对照组、亚硒酸钠组、酵母硒组、海藻硒组4组,各组饲料中硒含量分别为0.03、0.23、0.23、0.23 mg/kg。试验第60天无菌采集各组小鼠淋巴结,运用电感耦合等离子体质谱法检测各组小鼠淋巴结中各元素水平。[结果]与对照组相比,亚硒酸钠、酵母硒、海藻硒都能不同程度影响小鼠淋巴结中常量元素、必需微量元素、有毒微量元素的含量,其中酵母硒和海藻硒在降低有毒微量元素沉积方面效果显著优于亚硒酸钠。[结论]有机硒在调节小鼠淋巴结中离子谱方面有着更好的效果。

SYBR Green I实时PCR检测三黄鸡TLR4基因方法的建立

本研究旨在建立三黄鸡TLR4(Toll like receptor 4)基因的实时荧光定量PCR检测技术,为三黄鸡TLR4基因表达的定量分析提供基础.根据GenBank三黄鸡TLR4基因的保守区域设计引物,采用SYBR Green I染料建立荧光定量PCR方法,以阳性重组质粒为标准品建立标准曲线,并进行了溶解曲线分析.结果表明,本研究建立的三黄鸡TLR4基因荧光定量PCR方法具有快速、线性范围广及重复性高等特点,为三黄鸡TLR4基因的进一步研究奠定基础.

不同日龄鹅胚成纤维细胞的分离培养及活力研究

选择发育良好的9、11、13和15胚龄的马岗鹅鹅胚各3枚,分离鹅胚成纤维细胞并培养,于24、48、72、96、120和144 h分别进行细胞计数绘制不同胚龄成纤维细胞的生长曲线、检测细胞活力及细胞增殖率.结果显示,9、11日龄鹅胚成纤维细胞状态更好,死细胞和杂细胞较少;11日龄鹅胚成纤维细胞的细胞生长曲线最理想,活细胞比例为4个日龄中最高;9、11和13日龄鹅胚成纤维细胞的增殖率均保持在较高的水平.11日龄鹅胚更适合用于分离培养成纤维细胞.