Olympus生化仪检测脂肪酶的交叉污染来源分析及处理对策

目的 通过分析Olympus全自动生化分析仪检测脂肪酶（LPS）过程中的交叉污染来源,探讨处理生化仪交叉污染的对策.方法 以去离子水作为样本,通过检测不同项目组合＋LPS筛查可能污染源项目的 组合 将可能污染源组合中各项目的 试剂作为分析样本进行LPS检测,确定具体污染源项目 同样以去离子水作为样本,通过安排可能污染源项目与LPS的检测顺序、组合及重复检测次数来确定试剂针及搅拌棒的交叉污染率 采用混合血清作为样本,按照AU640生化仪比色杯使用规律安排可能污染源项目与LPS的检测顺序、组合及重复检测次数来确定比色杯的交叉污染率.根据交叉污染的不同来源和种类采取相应的处理对策.结果 筛查试验发现血脂组合对LPS检测存在严重的正干扰,其中总胆固醇（T Cho1）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测试剂中可能存在LPS的干扰物质.三者在LPS检测过程中均存在试剂针、搅拌棒和比色杯的携带污染,其中试剂针及搅拌棒的携带污染率为120.3%～565.8%,比色杯的携带污染率为235.2%～450.5%.通过（1）设置AU640生化仪试剂针、搅拌棒和比色杯的特殊清洗程序 （2）将LPS与交叉污染项目分别设置在AU5400生化仪的内、外圈反应杯检测,携带污染情况得到了明显改善.结论 通过以上的实验可以筛查出LPS检测过程中的交叉污染来源,并对两种不同型号的Olympus生化仪采取不同的处理对策,有效的解决了检测试剂的交叉污染问题.

泌尿系统分离的超广谱β酶菌及其耐药性分析

目的:了解泌尿系统分离的产超广谱β内酰胺酶细菌(ESBLs)泌尿系统分离的状况,并对其作耐药性分析。方法:对121株革兰阴性杆菌用复合纸片法做表型确证试验及双纸片协同法进行对照监测。结果:泌尿系统分离的革兰阴性杆菌中,ESBLs菌分离率为23.1%,其中大肠埃希菌占16.5%,肺炎型肺炎克雷伯菌占6.6%,对产ESBLs菌耐药率较低的药物有:阿米卡星(20.0%),阿莫西林、克拉维酸(37.6%),头孢噻肟/克拉维酸(14.1%),头孢吡肟(18.1%),亚胺培南(8.7%),而氨苄西林,头孢唑林等均超过50%。结论:泌尿系统分离ESBLs菌主要为大肠埃希氏菌和肺炎型肺炎克雷伯菌为主,对头孢类等药有较高的耐药性,提示对泌尿系统分离ESBLs菌的治疗根据药敏结果有重要意义。

冠心病患者血清同型半胱氨酸、C反应蛋白检测的临床意义

目的探讨冠心病(CHD)患者血清同型半胱氨酸(HCY)和C反应蛋白(CRP)的水平变化及临床意义。方法选择经冠状动脉造影检查确诊为CHD的门诊及住院患者105例作为观察对象,其中包括稳定型心绞痛(SAP组)31例、不稳定型心绞痛(UAP组)39例、急性心肌梗死(AMI组)35例;并选择同期体检的健康人40例作为对照组。检测所有观察对象的血清HCY、CRP水平,并对检测结果进行统计学分析。结果 CHD组患者血清HCY和CRP水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CHD患者各组之间血清HCY、CRP水平亦存在显著差异(P<0.05)。结论 CHD患者血清HCY和CRP水平与冠状动脉病变程度相关,对CHD的临床诊断及疗效监测有重要价值。

联合检测血清胱抑素C、β_2微球蛋白和尿微量白蛋白对早期糖尿病肾病的诊断价值

目的:探讨联合检测血清胱抑素C(CysC)、β2微球蛋白(β2MG)和尿微量白蛋白(mAlb)对早期糖尿病肾病(DN)的诊断价值。方法:采用免疫比浊法分别检测80例早期DN患者(DN组)、63例无肾病的糖尿病患者(NDN组)和60例健康成年人(对照组)血清CysC、β2MG和晨尿中mAlb的含量,并分析比较三者单项、两两联合及三项指标联合检测对早期DN的诊断效能。结果:早期DN组的血清CysC、β2MG和尿mAlb含量及异常检出率均显著高于对照组和NDN组(P<0.05);三者诊断DN的灵敏度分别为79.7%、50.6%和75.9%,三项指标联合检测灵敏度达89.9%,明显高于任一单项和两两联合检测组合(P<0.05);三项指标诊断早期DN的ROC曲线下面积分别为0.896、0.832、0.890,以血清CysC最优。结论:CysC、β2MG与mAlb,都是诊断早期DN较敏感的指标;三项指标联合检测能大大提高检测灵敏度,对于监测早期DN的发生和病情发展程度有重要意义。

急性脑梗死患者同型半胱氨酸、超敏C反应蛋白和纤维蛋白原水平与颈动脉硬化的关系

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)和血浆纤维蛋白原(Fib)水平与颈动脉粥样硬化及其严重程度的相关性。方法对112例急性脑梗死患者(ACI组)和63例健康体检者(对照组)行颈动脉彩色多普勒超声检查,并根据IMT值将患者分为3组:内膜正常组23例,内膜增厚组40例,斑块形成组49例。同时检测所有观察对象的血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平,并分析ACI患者血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平与颈动脉粥样硬化及其严重程度的相关性。结果 ACI患者血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平及颈动脉IMT测量值均明显高于对照组(P <0. 001)。与内膜正常组比较,内膜增厚、斑块形成组ACI患者的血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平均显著增高(P <0. 01);而斑块形成组ACI患者的血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平又明显高于内膜增厚组(P <0. 01)。ACI患者颈动脉IMT测量值与血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平均呈明显正相关(P <0. 001)。结论 ACI患者血清Hcy、hs-CRP和血浆Fib水平与颈动脉粥样硬化及其严重程度密切相关,提示Hcy、hs-CRP和Fib可能参与脑梗死发病机制。

新鲜血清标本重复测定差值法在酶类室内质控中的应用

目的建立一种以新鲜病人血清标本作为酶类质控物进行室内质控的方法。方法以O-lympusAU5400全自动生化分析仪为实验仪器,以血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)作观察指标。每天上午在五项血清酶室内质控合格后,选择2份结果合适的病人新鲜血清标本,下午重复测定一次(间隔6h),连续进行30d。统计30d内所有病人血清标本重复测定结果的偏差,观察其最大偏差是否满足<1/2CLIA’88的要求。结果病人新鲜血清标本5项酶类指标30d重复测定结果的最大偏差均<1/2CLIA’88,可以满足临床要求。结论病人新鲜血清标本重复测定差值法经济、可行,可作为ALT、AST、ALP、CK、LDH等五项酶类室内质控品实际应用中的补充。

人工股骨头置换治疗严重股骨转子间骨折的有限元分析

目的建立股骨转子间骨折、人工关节假体的三维数字模型,应用有限元对人工股骨头置换术后的股骨应力分布进行分析,评价置换术后的初始稳定性。方法利用螺旋CT对志愿者的左侧股骨进行断层扫描获取图像数据,经Mimics软件和Unigraphics建模软件处理,重建股骨三维模型。在此基础上,建立股骨转子间骨折、标准柄股骨假体三维实体模型,最后利用有限元分析软件Ansys10.0建立人工股骨头置换术治疗股骨转子间骨折的三维有限元模型,并对该模型进行生物力学分析。结果应力分析显示:正常股骨的应力由近端向远端逐渐上升,并于中下段达到最高。同时人工股骨头假体的应力集中于中段,与正常股骨的应力变化基本一致。人工股骨头置换没有改变股骨总体的应力模式,股骨距部位未见明显的应力集中区,依然是由近端向远端逐渐增加,应力峰值区域亦于全长股骨的中下段。结论标准柄人工股骨头置换治疗股骨转子间骨折不会引起股骨应力分布的明显改变,可以获得重建后的初期稳定。

利用新鲜全血标本制作糖化血红蛋白室内质控物的初步应用

目的探讨利用新鲜全血标本制备的溶血液作为糖化血红蛋白（HbAlc）室内质控物使用的可行性。方法选择2份新鲜EDTA—K，抗凝全血标本，其中1份HbAlc浓度为正常值（N）、1份为高值（H）。按SOP制备溶血液，经赋值后分装，置-20℃冻存；与Roche商品化HhAlc室内质控物同时使用，对其质控效果和稳定性进行评估。结果自制HbAlc室内质控物与Roche商品化质控物具有相似的质控效果，质控图走势基本一致，且所有质控点的离散程度基本接近；-20％冻存至少稳定3个月。结论利用新鲜全血标本制备的溶血液可作为免疫比浊法测定l-IbAlc的室内质控物使用。

人工股骨头置换治疗严重股骨转子间骨折的生物力学研究

目的探讨人工股骨头置换（标准柄）治疗股骨转子间粉碎性骨折的生物力学稳定性。方法收集18根成年股骨标本随机分成置换组、DHS组及对照组。置换组（A组）（fF6）模拟股骨转子间四部分骨折，钢丝捆扎固定大小转子及股骨矩，行标准柄股骨头置换，骨水泥固定；DHS组（B组）（萨6）模拟股骨转子间四部骨折，行DHS钢板内固定；对照组（c组）（萨6）采用完整股骨标本。Bose3510-试验机上行轴向加压和扭转测试，测量三组标本位移变化并行统计学分析。结果轴向压力测试：垂直加载100-1000N，A组与C组两组间差异没有统计学意义（P＞0．05）；B组与C组及A组与B组的组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。扭力测试：当扭矩是8Nm时，A组与C组及A组与B组间比较差异无统计学意义（P＞0．05），B组与C组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论应用骨水泥型股骨标准柄假体进行人工股骨头转换置换治疗股骨转子间粉碎性骨折的生物力学性能是具有可行性的。

Survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸对人消化系肿瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的观察凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族survivin、xiap、apollon和livin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对人消化系肿瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法人工合成survivin、xiap、apol-lon、livin的反义核酸和随机序列,经脂质体包裹后作用肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞48 h后,采用WST-8法观察对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 IAPs ASO作用于肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞48 h后,与空白对照组(control)和随机寡核苷酸(random oligodeoxynucleotide,RODN)对照组相比,IAPs ASO能明显抑制肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞的增殖和诱导细胞凋亡(P<0.01)。其中,在作用浓度为0.2μmol.L-1时,survivin ASO对HepG2、Lovo细胞的增殖抑制率最高,分别为84.2%、82.6%。xiap ASO对MGC-803细胞的增殖抑制率最高,为86.56%,并呈时间-剂量依赖效应。survivin ASO诱导Lovo细胞、MGC-803细胞凋亡作用最强,凋亡率为34.95%、27.6%,livin ASO诱导HepG2细胞凋亡作用最强,凋亡率为27.4%。结论针对凋亡抑制蛋白家族survivin、xiap、apollon、livin的反义核酸均能有效抑制消化系肿瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

三台不同生化分析仪间部分生化项目结果比对和偏倚评估

目的分析日本Olympus AU5400型全自动生化分析仪(简称AU5400)与美国Beckman Coulter AU5800型全自动生化分析仪(简称AU5800)、美国强生Vitros FS 5,1全自动干生化分析仪(简称FS 5,1)的葡萄糖(Glu)、钾(K+)、钙(Ca)、肌酐(Cr)四个项目检测结果的可比性。方法按美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件,以AU5400为参考系统,AU5800和FS 5,1为试验系统,同时检测新鲜血清标本的Glu、K+、Ca、Cr,计算相关系数(r)和回归方程,并以1/2 CLIA'88允许偏差范围为标准,对临床可接受性进行分析。结果所有检测项目在试验系统与参考系统间的检测结果的相关系数均大于0.975;除Cr外,其他三项在医学决定水平处的预期偏倚都在临床可接受范围内。结论三套分析系统具有良好的相关性,Glu、K+、Ca三个项目的检测结果具有可比性,可相互认可并被临床所接受;Cr则对其在系统间的不可比性进行原因分析,并在校正后重新分析偏移评估和相关性,也在临床可接受范围内。

肿瘤标志物项目检测标本周转时间分析及优化

目的分析肿瘤标志物项目检测标本周转时间(TAT)的影响因素,观察优化检测流程等持续改进措施对缩短TAT的效果。方法利用实验室信息管理系统(LIS)收集优化前肿瘤标志物项目检测标本TAT的相关数据,统计分析导致TAT延长的原因和关键节点。随后采取强化相关人员全员岗位培训、增加检测频次以及优化标本送检流程等一系列持续改进措施,并比较优化前后肿瘤标志物项目检测标本TAT合格率的变化。结果流程优化前肿瘤标志物项目检测标本TAT的平均合格率仅为32.5%;经全员岗位培训和规范流程后,2017年11月TAT合格率得到了大幅提升(66.1%,P<0.005);2017年12月增加中午直落检测岗后,TAT合格率增加到了73.4%;增加周日检测岗及时处理当天标本,使周日送检标本的TAT合格率大幅度提升(28.6%比61.3%,P<0.001);优化隔夜标本处理流程后,隔夜标本的比例大幅下降(12.8%比6.2%,P<0.05)。经过上述一系列持续改进措施和工作流程优化,肿瘤标志物项目检测标本的TAT合格率得到明显提升(32.5%比77.9%,P<0.005)。结论优化流程可有效缩短肿瘤标志物项目检测标本的TAT,更好地满足临床诊疗需要。

hsa-miR-203真核表达载体的构建及对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的构建hsa-miR-203(人微小非编码RNA-203)的真核表达载体,观察其对人慢性粒细胞白血病细胞株(K562)增殖和凋亡的作用。方法构建hsa-miR-203靶向基因的真核表达载体PmiR-203,用脂质体转染法将PmiR-203转染K562细胞;可溶性噻唑盐-8(WST-8)法检测转染后的K562细胞增殖的情况,流式细胞术检测转染后K562细胞的早期凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测bcr/abl mRNA的表达水平,比色法测定caspase-3、caspase-9的活性。结果本法成功构建了重组真核表达载体PmiR-203,流式细胞术结果表明,K562细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达率52.6%。PmiR-203转染K562细胞48 h后,能明显抑制K562细胞的增殖,并促进细胞的早期凋亡。实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的PmiR-203能显著下调bcr/ablmRNA的表达水平,转染后K562细胞的caspase-3、caspase-9的活性明显增强。结论成功构建了hsa-miR-203的真核表达载体PmiR-203,后者主要通过下调bcr/abl融合基因的表达抑制K562细胞的增殖,并通过活化caspase-3、caspase-9促进K562细胞的早期凋亡。

泌尿生殖道脲原体喹诺酮类耐药机制的初步研究

目的探讨泌尿生殖道脲原体感染耐喹诺酮类药物情况及耐药机制。方法选择2017年2月广州市番禺区中心医院接诊的泌尿生殖道感染患者556例进行标本采集,采用支原体培养、鉴定及药敏一体化试剂盒对标本进行支原体鉴定及药敏试验,然后分析脲原体菌株对3种喹诺酮类药物(氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星)的耐药情况。选取其中7株有代表性的菌株(对至少1种喹诺酮类药物高度耐药)提取DNA并行聚合酶链反应扩增gyrA、gyrB、parC、parE基因片段并测序,然后与标准菌株(ATCC 27815)的相应片段进行序列比较,分析这4个基因与喹诺酮耐药决定区域相关的突变。结果单纯脲原体感染的病例有246例(44.2%)。药敏试验结果显示,对3种喹诺酮类药物全敏感者占17.5%(43/246),对其中至少1种药物高度耐药者占15.4%(38/246)。对氧氟沙星高度耐药的菌株有36例,占14.6%。对司帕沙星敏感的菌株有88例,占35.8%。测序结果显示,7株菌株的gyrA和gyrB片段与微小脲原体(Up)ATCC 27815的相应基因序列相似度为100%,而与解脲脲原体(Uu)ATCC 33699的相应基因序列相似度则较低,7株菌株可能均为Up而非Uu。7株耐药菌株的parC基因均发生C248T突变,并导致相应位点氨基酸改变(S83L),parE均发生T1473C突变。除C248T为非同义突变外,其余突变位点均为同义突变。结论泌尿生殖道脲原体感染对喹诺酮类药物严重耐药,parC基因的C248T(S83L)突变很可能与本地区脲原体耐药的机制有关,但S83L突变不能解释脲原体对3种喹诺酮类药物耐药程度不同的问题,提示有其他耐药机制参与。

善于归纳 学以致用

“巧妇难为无米之炊”，现在学生们感叹作文难写，往往就是手头缺少素材，归根结底，是学生的积累不够。那么学生的写作素材从何而来呢？主要源于以下几个方面：一是源于生活，哪里有生活，哪里就贮存着丰富的材料，只要你善于发现和挖掘；二是源于书本，书本上很多文章中的事物和语言，都可以作为学生写作的素材；

“张开联想的翅膀,拓展写作思路”课堂实录

时间：2007年5月12日 地点：清远市第一中学 学生：高中一年级（19）班 教师：陈顺仪导入：创造需要联想和想象．而联想和想象是创造的前提。在作文构思的初始阶段。为打开思路，就要张开联想和想象的翅膀。

在语文教学中实施情感教育完善学生人格

新课标中语文教学的三维目标之一是情感态度与价值观，这就是说语文教学除教学生学好语文和必要的语言基础知识，进行严格的语文基本训练的同时，还必须注重情感的陶冶与熏陶，培养学生健康高尚的审美情趣和审美能力。这个要求是根据语文科的特性提出的。语文科区别于其他课程，除其工具性外，最具典型的是其情感性。语文课是实现情感教育的首选基地，语文教材中那些文质兼美的文学作品，给学生提供了真、善、美的标准，发挥好语文教学中的情感教育，不仅对学生的成长具有举足轻重的作用，能激发学生的求知欲，增强学生的学习兴趣，培养学生良好的思想品德和发展学生的智力，而且能促使素质教育的发展。其作用具体表现如下：

在写作教学中培养学生的推理能力

大多数中学生写议论文，在说理论证过程中缺乏逻辑性．常犯一些毛病．如只提具体材料而缺少论述的中心，或虽有观点，但不是对材料的合理归纳。或归纳时缺乏辩证思维指导．把事物的某种偶然联系或个别属性贸然推及一般。出现“轻率归纳”和“以偏概全”的逻辑错误：或中心论点与分论点缺乏内在的逻辑联系，中心论点概括不了分论点，分论点说明不了中心论点。因而导致推出的结论不可靠，论证欠严密．文章说理不强。这是推理能力不强的表现。

Hsa-miR-203联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病K562细胞的作用

目的探讨hsa-miR-203联合甲磺酸伊马替尼(mesylate imatinib MI)对人慢性粒细胞白血病K562细胞的影响。方法体外培养K562细胞,利用LipofectamineTM2000将has-miR-203模拟物转染至K562细胞,MTT法检测使用miR-203、MI以及两者联合使用对细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测对细胞早期凋亡率的影响。结果 miR-203转染至K562细胞(24、48、72 h)后,联合MI显著抑制K562细胞增殖,抑制效果较各单独使用组作用明显增强。单用miR-203浓度为50μmol·L-1时的抑制率分别为19.69%、25.62%、35.21%。而联合不同浓度(0.5、1、2、3、4μmol·L-1)的伊马替尼,抑制率随着作用时间增加,呈时间—依赖效应。单用hsa-miR-203、伊马替尼及两者联合作用于K562细胞48 h后,早期凋亡率分别为7.8%、8.9%、12.5%。结论当一定浓度的hsa-miR-203与不同浓度的伊马替尼联合之后,对K562细胞的增殖抑制作用增强,hsa-miR-203提高了K562细胞对伊马替尼的敏感性,其机制可能为共同促进K562细胞早期凋亡有关,并为白血病的治疗提供新的依据。

遵循规律,培养学生语文应考能力

从近年高考命题看，高考对学生能力要求越来越高，既抓基础又抓能力应是高考复习努力的方向。学生的语文能力是在不断获取知识、理解和运用知识的过程中形成和发展的。因此，要培养和提高学生的语文应考能力，应遵循规律，提高复习效率。