逆转录环介导等温扩增技术在诺如病毒基因检测中的应用

目的建立逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)快速检测诺如病毒的方法。方法采用逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)扩增诺如克病毒特异性基因,并与RT-PCR方法比较。结果与RT-PCR技术相比,RT-LAMP法更加简便快速,能够在等温条件下进行,特异性好,具有更高的灵敏性。结论RT-LAMP方法具有灵敏度高,特异性强,操作简便快速,不需要复杂仪器设备等优点,为临床检测诺如病毒快速简便的新方法。

A组β-溶血性链球菌DNase B基因序列的克隆与序列分析

目的 克隆A组β -溶血性链球菌 (GroupAStreptococcus,GAS)DNaseB基因序列。 方法 根据genBank中登录的多种DNA酶B的序列 ,进行同源性分析 ,设计相对保守的针对DNaseB基因的引物 ,以链球菌基因组为模板进行PCR扩增 ,目的片段经TA克隆至pMD18-T质粒后测定其核酸序列 ,然后进行序列的查询与比对。结果 成功克隆出A组链球菌DNaseB基因全长序列共 810bp ,其中包括中 12 8bp的信号肽编码区和 6 81bp的成熟肽编码区 ,以及 5’端非编码区的一个T。结论 A组 β-溶血性链球菌DNaseB基因序列的成功克隆 。

福州市儿童肠道腺病毒感染的调查与研究

[目的]对福州市儿童肠道腺病毒感染状况进行调查研究。[方法]双夹心ELISA法对1994年8月～2003年7月10 年所收集的837份婴幼儿急性腹泻粪便标本进行检测。[结果]837份标本中检出肠道腺病毒42例,检出率为5.0%,其中 Ad403例(0.4%),Ad4122例(2.6%),未分型17例(2.0%),感染多见于1岁以内婴儿,临床特征为呕吐 发热和腹泻。[结论] 肠道腺病毒是福州地区婴幼儿腹泻的重要病原之一,以Ad41型感染为主。

IL-4受体基因多态性与儿童过敏性紫癜肾炎的相关分析

目的探讨IL-4受体基因多态性与儿童过敏性紫癜肾炎(HSPN)的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性酶切多态性方法检测131例HSPN组患儿和120例健康对照组儿童的IL-4Rα亚单位Q576R位点基因多态性。结果 HSPN组IL-4Rα亚单位QR+RR基因型和R576等位基因频率均高于对照组(P<0.05)。结论 IL-4Ra亚单位R576可能是HSPN患儿的危险因子。

福州市小儿肺炎支原体感染调查

[目的 ]对福州市小儿呼吸道肺炎支原体 (MP)感染进行调查研究。 [方法 ]EL ISA方法测定急性呼吸道感染患儿血清中 MP特异性 Ig M及 Ig G,各年龄组检出情况用 SPSS10 .0软件包进行统计分析。 [结果 ]184例患儿中肺炎支原体 Ig M单项阳性者 30例 (16 .3% ) ,Ig M及 Ig G均阳性者 4 1例 (2 2 .3% ) ,共 71例 (38.6 % )提示近期 MP感染 ,Ig G单项阳性者 33例 (17.9% ) ,提示曾经有过 MP感染。好发年龄为 1岁以上小儿 (P<0 .0 5 ) ,夏秋季节多见。 [结论 ]MP是福州地区小儿呼吸道感染的重要病原之一。

T7-连接双信号放大技术在儿童肺炎支原体感染检测中的应用

目的 应用T7-连接双信号放大技术监测儿童肺炎支原体感染,探讨其临床应用价值.方法 收集271例急性呼吸道感染患儿的呼吸道分泌物标本,行T7-连接双信号放大技术检测肺炎支原体RNA,与荧光定量PCR方法比较,分析其灵敏性和特异性.结果 T7-连接双信号放大技术检测时间仅需2～3 h,其灵敏度和可靠性与荧光定量PCR方法相当,但其不需要昂贵的特殊设备,具有实验室前期投入少,线性范围宽,无需内参,直接定量,试剂盒价格便宜等优点.结论 T7-连接双信号放大技术可方便、快速检测肺炎支原体RNA,其检测效能与荧光定量PCR方法相当,适宜临床推广.

环介导恒温扩增技术在轮状病毒基因检测中的应用

目的建立环介导恒温扩增技术快速检测轮状病毒的方法。方法采用环介导恒温扩增反应(LAMP)技术扩增轮状病毒特异性基因,并与传统PCR技术检测结果比较。结果 LAMP法更加简便快速、且在恒温条件下进行,特异性好,且具有更高的灵敏性。结论 LAMP方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便快速、不需要复杂仪器设备等优点,为临床检测轮状病毒提供了快速简便的新方法 。

糖原磷酸化酶同工酶BB金标记免疫层析法的建立

目的建立胶体金免疫层析检测人糖原磷酸化酶同工酶BB(GPBB)的方法。方法采用胶体金标记抗单克隆GPBB抗体D1,将其与生物素化的抗GPBB单抗D2包被于吸水纤维,将链霉亲合素结合于硝酸纤维素膜,制成免疫层析试条,依据试剂条上出现肉眼可见的红色线条判定结果。用其检测96例发病6h内的胸痛患者血浆中的GPBB,与心肌肌钙蛋白I(cTnI)和肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)的检测结果比较,评价其诊断急性心肌梗死(AMI)的敏感性和特异性。结果金标记试条检测GPBB的浓度低限值为7.4ng/ml,与ELISA方法比较符合率达96.15%;诊断发病4h内和6h内AMI的敏感性分别为64.71%和83.92%,高于cTnI(29.42%、51.79%)和CK-MB(20.59%、55.36%),分别P<0.05,特异性比较差异无统计学意义。结论本法简便、快速、准确,可用于AMI早期筛查。

以原发性肾病综合征为表现的系膜增生性肾炎106例分析

为探讨表现为原发性肾病综合征 (PNS)的系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)治疗、疗效和预后 ,将106例PNS患儿按临床分为单纯型和肾炎型两组。按病理分为单纯MsPGN和非单纯MsPGN(MsPGN伴局灶性节段肾小球硬化或/和肾小管间质病变 ) ,并对临床和病理资料进行分析和总结。结果表明 ,72例经泼尼松8周治疗后获缓解 ;单纯型和肾炎型肾病两组之间泼尼松完全效应无明显差异 (χ2=1.19,P>0.05) ,单纯MsPGN组完全效应明显高于非单纯MsPGN组 (χ2=25.6,P<0.01) ,辅以环磷酰胺冲击治疗 (CTX_PT)可提高疗效 ,提示临床分型有其局限性。MsPGN若合并局灶节段肾小球硬化或/和肾小管间质病变者预后不容乐观。

泼尼松“拖尾疗法”治疗频繁复发性肾病综合征疗效与病理的关系

目的 探讨泼尼松“拖尾疗法”治疗频繁复发的原发性肾病综合征的疗效及其与组织病理学变化的关系。方法 对 5 6例行肾穿刺且随访到位的患者在行“拖尾疗法”的同时 ,按其是否接受环磷酰胺冲击治疗 (CTX-PT)分组 ,分别观察其疗效与组织病理学变化的关系。结果 病理表现为单纯微小病变、轻微病变或系膜增生性肾炎的 30例频繁复发原发性肾病综合征者应用拖尾疗法的同时按是否联用 CTX- PT分组观察疗效 ,两组均未再发 ,无统计学意义。伴肾小管间质损害的 2 6例中 ,联用 CTX- PT 1 2例 ,复发 2例 ;未联用 CTX- PT 1 4例 ,复发 8例 ;两组有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 “拖尾疗法”可降低原发性肾病综合征复发的频率 ,伴有肾小管间质损害者联用 CTX- PT复发频率明显低于单纯接受“拖尾疗法”

学龄前儿童肾小球疾病临床病理分析(附65例分析)

目的 为探讨学龄前儿童肾小球疾病病理与临床的关系。方法 对近 10年来 6 5例经皮肾活检的该年龄组肾小球疾病按临床分类与病理诊断作回顾性对照分析。结果 显示学龄前儿童继发性肾小球肾炎占 36 .92 %。乙型肝炎病毒相关性肾炎 (HBV- GN)在本地区发病比例较高。 Ig A肾病 (Ig A- GN)是该年龄组一种常见的临床病理综合征。结论 对临床诊断棘手的肾小球疾病应尽早行肾活检 。

测定胃黏膜幽门螺杆菌乳胶凝集法的建立与初步应用

目的建立乳胶凝集技术快速检测胃Hp抗原的方法并探讨其临床运用效果。方法采用乳胶凝集技术快速检测胃黏膜Hp抗原,并与快速尿素酶方法和荧光定量PCR方法比较。结果对于近3个月内未服用过制酸剂、铋剂或抗生素的送检者,乳胶凝集法和快速尿素酶法具有相等的检测效能;对于已服用上述药物的患者,乳胶凝集法和荧光定量PCR法具有相等的检测效能。结论乳胶凝集方法具有灵敏、特异、操作简便、快速、不需要复杂仪器设备等优点,为临床检测Hp提供了快速简便的新方法。

A组乙型溶血性链球菌DN aseB基因亚克隆及pET-28a(+)-DNaseB载体构建

运用PCR扩增技术,以质粒pMD18-T-DNaseB为模板,扩增出0.5 kb截短的DNaseB基因,先将该基因片段与pMD19-T载体连接,确定该序列正确并进行大量繁殖后,再将DNaseB基因定向克隆入pET-28a(+)表达载体中,构建新的原核表达载体pET-28a(+)-DNaseB,转化该重组质粒至受体菌E.coli DH5a中,采用SDS碱裂解法提取该质粒DNA,经EcoR I和Hind双酶切鉴定和核苷酸序列分析,证实插入的基因片段具有正确的DNaseB基因核苷酸序列,将pET-28a(+)-DNaseB转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经过IPTG诱导其目的蛋白得到了表达.

医院内乙型肝炎表面抗原污染监测

为调查乙型肝炎表面抗原(HBsAg)在医院内污染情况,我们对某院部分科室的诊疗器械和各种物品253份进行检测,现将结果报告如下。一、调查对象对某综合性医院部分科室使用过的诊疗器械和各种物品的表面随机采样,样本共253份。另采消毒后诊疗器械样本80份作对照。二、检测方法用蘸有磷酸盐缓冲液(pH7.4)棉拭子,在科室的医疗器械、门把、病床、操作台。

雷公藤红素下调P物质介导的肥大细胞NK-1R mRNA表达

目的研究雷公藤红素对P物质(susbstance p,SP)介导的肥大细胞活化的影响,方法应用CCK8检测雷公藤红素对小鼠P815肥大细胞的毒性作用,筛选出最佳的浓度和时间后将细胞分为细胞空白组,SP模型组,低、中、高浓度雷公藤红素组,雷公藤红素预处理细胞后,再采用SP刺激肥大细胞,致使其活化。采用ELISA检测组胺的释放量,RT-PCR检测NK-1R mRNA表达情况。结果雷公藤红素对细胞的毒性作用呈浓度时间依赖性,随着浓度和时间的增加毒性越大;与模型组相比,组胺的释放量随浓度的增加而减少,肥大细胞表面NK-1R mRNA表达下降(P<0.05),差异有统计学意义。结论雷公藤红素能抑制小鼠P815肥大细胞组胺的释放,可能跟NK-1R的表达有关。

30例小儿传染性单核细胞增多症EB病毒抗体的检测及临床分析

[目的 ]探讨小儿传染性单核细胞增多症抗 EBV检出情况及临床分析。[方法 ]采用酶标法检测血清抗 EBVIgM和IgG ;血凝试验法检测嗜异性抗体。 [结果 ] 3 0例患儿血清抗 EBVIgM阳性率 86 7% ;嗜异性抗体阳性率 73 3 %。[结论 ]EBV特异性抗体阳性是传染性单核细胞增多症的重要诊断标准之一。

诺沃克样病毒分子生物学研究进展

本文着重对诺沃克样病毒 (NLV )分子生物学的研究进展 ,包括毒粒的形态结构、基因组成和分子流行病学特点及预防等问题给予综述介绍。

福州地区腹泻患者诺瓦克样病毒感染的分子流行病学特点

目的 调查研究福州地区腹泻患者诺瓦克样病毒感染的分子流行病学特点。方法 分别应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)和逆转录一聚合酶链反应 (RT -PCR) ,对 1 998年 1 0月至 2 0 0 2年 1 1月在我院门诊及住院部收集的 2 88份腹泻患者粪便标本进行轮状病毒和诺瓦克样病毒病原检测。结果 ELISA法检测轮状病毒感染的阳性率为 54 2 % ,发病年龄主要是 1月～ 3岁的婴幼儿 ,发病季节集中在冬春季 ,高峰为 1 1和 1 2月份。RT -PCR检测显示诺瓦克样病毒基因组Ⅰ的阳性率为 1 1 1 % ,主要是 7岁以上儿童及成人 ;诺瓦克样病毒基因组Ⅱ的阳性率为 2 8 8% ,主要是 6月～ 3岁婴幼儿 ;诺瓦克样病毒感染均无明显季节特异性。结论 在福州地区诺瓦克样病毒是仅次于轮状病毒的又一常见腹泻病原 ,其中婴幼儿腹泻以诺瓦克样病毒基因组Ⅱ为主。