镉对7个南瓜杂交组合幼苗生长及镉积累特性的影响

[目的]选育耐镉南瓜砧木种质资源。[方法]基于基质盆栽试验,研究不同浓度镉(Cd)胁迫(0、8、16 mg/L)对7个南瓜杂交组合幼苗生长及镉积累特性的影响,以0mg/L为对照(CK),利用隶属函数综合评价南瓜不同杂交组合的Cd积累特性。[结果]在不同浓度的Cd胁迫下,“盐边-3×陵川cl”、“河头a2×041-1”的株高、干质量和鲜质量均显著低于CK,而“360-3×041-1”与CK无显著差异。“360-3×041-1”的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性较高,电导率较低。“360-3×041-1”、“盐边-4×陵川cl”的地上部Cd量显著低于其他杂交组合,且转移系数小,对Cd的吸收积累能力较弱。隶属函数综合分析显示,在8 mg/L的Cd胁迫下,7个南瓜杂交组合的耐Cd性依次为:“360-3×041-1”>“盐边-4×陵川c1”>“盐边-3×360-3”>“盐边-2×041-1”>“河头a2×360-3”>“盐边-3×陵川cl”>“河头a2×041-1”;在16mg/L的Cd胁迫下,7个南瓜杂交组合的耐Cd性依次为:“360-3×041-1”>“盐边-4×陵川cl”>“盐边-3×360-3”>“河头a2×360-3”>“盐边-3×陵川c1”>“盐边-2×041-1”>“河头a2×041-1”。[结论]“360-3×041-1”、“盐边-4×陵川c1”、“盐边-3×360-3”对Cd胁迫的耐受性较强,其中“360-3×041-1”在Cd胁迫下的长势最好,Cd转移系数最低,可作为最优的耐镉砧木材料。

设施番茄果实生长与环境因子的关系

在设施环境下,研究环境因子与番茄果实生长的关系,以期为设施番茄精准管理提供参考。以1h为步长,记录设施内温度、光照强度及空气湿度,每7d进行1次果径测定,将采集的环境数据细分为7个变量,分析7个变量与果实日增量随时间的变化,采用DPS软件进行逐步回归,建立显著环境因子与果实日增量的回归模型。春茬两个棚环境因子随时间动态变化规律较一致,秋茬日光温室与其有所不同。番茄品种‘粉冠’和‘金棚’果实日增量呈现先升高后降低的趋势,品种‘珍琪’果实日增量变化波动较大。3个设施内影响果实日增量的显著环境因子有所不同,7个环境变量之间相互影响、相互制约。剔除不显著的环境变量后,建立了3个番茄品种果实日增量与显著环境变量的回归模型,确定了7个环境因子对果实生长的影响及果实生长适宜的环境变量范围。

HA对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎体外发育影响的研究

在TCM-199中添加一些确定的辅助成分,探讨在无血清培养基中添加不同浓度HA对牛卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响。结果表明,在卵母细胞成熟培养液(TCM-199-m)中添加4.0mg/mL的HA时,卵母细胞的成熟率和卵裂率与对照组(BSA)无显著差异(P>0.05),分别为85.14%,83.57%和89.47%,85.24%,但显著高于其他各浓度组(P<0.05),表明HA在卵母细胞无血清成熟培养中可代替BSA。在受精卵体外培养液(TCM-199-c)中添加HA时,囊胚发育率与对照组(BSA)差异不显著(P>0.05),分别为27.64%和26.51%,但显著高于TCM-199-c组(P<0.05),表明HA对牛胚胎体外发育具有明显的促进作用,在无血清培养中可以代替BSA。当在TCM-199-c+HA中添加少量的BSA时,囊胚发育率(31.19%)显著高于其他各组(P<0.05),表明HA欲完全代替BSA还有不完善之处,有待进一步研究。

小鼠卵巢冷冻移植后卵泡发育和卵母细胞成熟的研究

本研究探讨了冷冻保存的1日龄小鼠卵巢异体异位移植后,其原始卵泡重新启动生长发育的能力。一日龄B6C2F1 小鼠卵巢分离冷冻后置液氮中保存,保存1周-6个月后解冻,并将卵巢移植到8-12周龄B6C2F1受体鼠肾脏包膜下,移植至少14 d。每侧肾囊移植2枚卵巢的40只受体鼠中卵巢的回收率为45．00％(72/160),而每侧肾囊移植1枚卵巢的20只受体鼠的回收率为82．50％(33/40)。移植卵巢上卵泡的发育基本与体外自然生长鼠的卵巢卵泡发育情况一致。对卵巢移植 19 d的受体鼠用孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)处理后,从移植卵巢上发育成熟卵泡中获得的卵母细胞在MEMα培养基中培养16-17 h,有40．90％,的卵母细胞发生生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD), 其中89．02％的卵母细胞发育到第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ,MⅡ)。将剩余的卵母细胞继续培养到20-21 h,又有50．83％的卵母细胞发生生发泡破裂,但其中只有21．40％的卵母细胞能够发育到MⅡ期。以上结果说明,小鼠早期卵巢经过冷冻- 解冻并异体异位移植后,其原始卵泡能够重新启动生长发育,发育后的卵泡卵母细胞能够在体外培养成熟。这些结果意味着原始卵泡或卵巢冷冻-移植技术有可能充分利用雌性生殖细胞用于濒危动物保种、建立动物基因库和人类辅助生殖等。

猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活效率影响因素分析

研究了月龄和卵巢采集后的保存条件对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活效率的影响 ,以确立猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。试验包括 :(1)卵巢保存的生理盐水温度 (2 2、30、37、38.5、4 0℃ )对猪卵母细胞体外成熟和发育潜力的影响。 (2 )卵巢保存时间对猪卵母细胞体外成熟和后期发育的影响。 (3)初情期前后母猪卵母细胞对体外成熟和发育潜力的影响。结果表明 ,(1) 38.5℃保存的卵巢卵母细胞激活后的卵裂率 (79.6 4 % )和囊胚率(18.11% ) ,37℃的卵裂率 (76 .18% )和囊胚率 (33.82 % )相比 ,差异不显著 (P >0 .0 5 )。当温度达到 4 0℃时 ,卵裂率(2 1.6 8% )和囊胚率 (0 )与 37℃相比差异极显著 (P <0 .0 1)。 30℃与 37℃相比 ,卵裂率和囊胚率之间差异不明显 (P>0 .0 5 )。而当温度降低到 2 2℃时 ,卵裂率和囊胚率明显降低 (P <0 .0 5 )。 (2 )猪卵巢在体外保存 2和 6h对卵母细胞激活后的卵裂率 (6 8.86 %VS 6 8.74 % )和囊胚率 (16 .12 %VS 16 .0 9% )无显著影响 (P >0 .0 5 )。 (3)初情期前、后母猪卵母细胞激活后的卵裂率没有显著差异 (72 .90 %± 7.0 4 %VS 77.35 %± 8.2 9%P >0 .0 5 ) ,但初情期后母猪卵母细胞激活后的囊胚发育率显著高于初情期前 (2 2 .5 2 %± 7.4 8%VS 36 .6 2 %± 10 .2 5 % 。

Spindle-view系统在猪卵母细胞去核中的应用

应用Spindle—view对体外成熟培养36、42、44和45h的猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体进行去核操作，并与传统去核方法（McGrath—Solter去核法，挤压去核法）相比较，结果表明：①在42～48h之间利用Spindle—view得到的猪卵纺锤体影像与极体的相对位置没有明显的变化；②Spindle—view适合用于猪体外成熟卵母细胞减数分裂纺锤体的观察及去核；去核效率与其他两种方法相比差异极显著（95．5％，42.1％，74．2％，P〈0．01）；③纺锤体成像是否清晰可用于猪卵母细胞的质量监控。

利用Red同源重组系统进行牛β酪蛋白基因敲除

利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行乳腺生物反应器质粒构建的研究却未见报道。实验采用含有完整的牛β酪蛋白基因的CSN2质粒作为基因打靶的载体,设计不同的同源臂,成功地敲除了β酪蛋白基因的编码区。并且同时利用同源重组技术对敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。为进一步利用CSN2质粒两端的调控序列,插入新的基因,研究其表达功能,或者进行乳腺生物反应器的研究奠定了基础。

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数.卵巢保存时间在2 h以内最好,最长不超过6 h.30～39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于2～8 ℃(16.7 %、0 %)和20～29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的.采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为69.2 %、64.3 %).M199是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17β-E2和M199 + 50 IU/mL GnRH+1 μg/mL 17β-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为35.4 %、42.7 %).

牛体外成熟卵母细胞孤雌激活的研究

比较 3种化学激活方法和 4种电化学激活方法对牛体外成熟卵母细胞进行孤雌激活的效果。结果显示 ,单独用离子霉素和用离子霉素 + 6 DMAP +CB或 +CHX +CB激活牛卵母细胞 ,两者之间差异极显著 (P <0 0 1) ;用不同强度电脉冲 + 6 DMAP +CB激活牛卵母细胞 ,各组间卵裂率差异均不显著 (P >0 0 5 )。结果表明 ,虽然电化学激活方法最高可获得 82 9%的卵裂率 ,比化学激活方法中最好的高 4 8% ,但后者不需电融合仪 ,操作相对简便。

塑料大棚温光条件与番茄坐果数相关关系的模拟

坐果数是番茄产量形成的重要因素,而植株的坐果潜力在很大程度上受环境因子的影响,特别是温光条件。建立温光条件与番茄坐果数关系的模拟模型,对设施番茄环境量化管理十分必要。试验在春茬大棚番茄生长期定期统计单株坐果数和棚内植株冠层的温度和光照强度,采用多项式回归,以每7 d的总有效积温和有效光合辐射累积的乘积模拟番茄坐果数的变化趋势,建立了2个品种番茄坐果数的模拟模型,并用回归直线和回归估计标准误差RMSE对模拟值和实测值的符合度进行检验。结果表明,两个模型的回归系数均接近于1,达到了较好的拟合,说明以大棚温光为联合驱动因子能较好地模拟番茄坐果数的变化趋势,且准确性高,实用性强。

基于温度和太阳辐射的番茄果型果径模拟模型

根据塑料大棚内番茄果实生长与温度和太阳辐射的关系,建立了以环境影响因子积为尺度的设施番茄果实果径及果型指数模拟模型,并用独立的试验数据进行了检验。验证结果表明,设施番茄第一到第五序果果径的模拟值与实测值之间的回归估计标准误差(RMSE)分别为1.14、0.68、1.06、1.30和0.78 cm;果型指数的模拟值与实测值之间的回归估计标准误差(RMSE)分别为0.053、0.035、0.035、0.094和0.142。模型对设施番茄各序果果实的果径和果型指数的模拟值与实测值的符合度较好,实用性较强,可以为设施番茄生产提供理论依据和决策支持。

昆明小鼠早期胚胎体外发育阻滞原因分析

为了分析小鼠早期胚胎在体外发育阻滞的原因 ,建立早期胚胎体外培养系统 ,应用几种不同的培养系统对昆明小鼠单细胞胚胎在体外培养了 96～ 12 0 h。结果表明 ,小鼠单细胞胚胎在 M1 6 和 BWW培养液中卵裂均受到阻滞 ,且两者之间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CZB和 HTF培养液能有效地克服小鼠胚胎的 2 -细胞发育阻滞 ,与 M1 6 和 BWW相比 ,2 -细胞卵裂率和囊胚率均存在显著性差异 (P<0 .0 1) ;在 M1 6 培养液中添加牛磺酸对早期胚胎发育有促进作用 (P<0 .0 1) ;小鼠早期胚胎在 CZB和牛输卵管上皮细胞 (COEC)共培养体系中的卵裂率较对照组明显提高 (P<0 .0 5 )

番茄器官生长动态与环境温度和光照关系的模拟

在4个塑料大棚内研究了春季栽培的2个无限生长型番茄品种的生长动态与棚内关键环境因子温度和光照的关系。通过对2个品种株高、绿叶数、花数、坐果数、果实体积等因子与周均有效积温和周均光合有效辐射积关系的分析,建立了器官生长与两大环境因子的模拟模型。结果表明株高、绿叶数、果实体积、花数和坐果数与温光因子多表现为二项式关系。

猪体细胞克隆胚的胚胎移植研究

试验采用Spindle-view法对卵母细胞进行去核以构建重构胚,并利用这些重构胚先后对12头上海白猪进行了胚胎移植。结果有1头猪顺利怀孕到终期,经剖腹产产下1头健康的克隆巴马小型猪,另外,有3头母猪移植后51 d、76 d和77 d返情,怀孕率33.3%。

雌性猕猴尿中生殖激素的变化

用人血清激素放射免疫测定试剂盒 ,测定了 4只未孕雌性猕猴 8个月经周期尿中促黄体生成素(LH)、孕酮 (P)和雌二醇 (E2 )的含量 ,结合对猕猴繁殖行为学的观察 ,研究了各激素分泌之间的关系及其与繁殖行为的内在联系。结果表明 :4只雌性猕猴 8个月经周期的平均长度为 (2 6 .2 5± 2 .10 )d ,行经时间 (2 .2 5± 0 .6 6 )d ,LH峰值出现在 (12 .75± 0 .91)d ,平均峰值为 (86 .30± 2 0 .11)miu/mL ;P峰值出现在 (19.75± 1.87)d ,平均峰值为(7.4 7± 1.78)ng/mL ;E2 峰值出现在 (11.75± 1.81)d ,平均峰值为 (6 79.11± 90 .6 6 ) pg/mL。研究表明 ,人血清激素放射免疫测定试剂盒可以测定出猕猴尿中生殖激素的变化趋势 ;LH、P、E2 的变化情况基本上能反映出猕猴月经周期中卵泡形成、排卵及黄体形成的时间。

猪体细胞克隆研究进展

综述了用核移植方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况,并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。

山羊卵泡卵母细胞的采集与体外成熟研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0℃下培养的成熟率显著低于在38.5℃、39.0℃下培养的成熟率(P<0.05);卵母细胞培养18 h和培养20h的成熟率极显著低于培养24 h和培养26 h的成熟率(P<0.01);此外,卵母细胞体外成熟培养时,培养液中的胎牛血清添加量以10%～15%为宜。

小鼠胚胎干细胞与复合丝素膜的生物相容性研究

探索胚胎干细胞与丝素材料结合的可行性及生物相容性,建立一套在丝素膜上小鼠胚胎干细胞的体外培养体系。通过形态观察、MTT比色法、克隆形成率分析、碱性磷酸酶检测、免疫荧光染色、核型分析等方法,研究丝素膜对小鼠胚胎干细胞的黏附、生长情况、未分化状态的维持、胚胎干细胞特性、遗传、分化等方面的影响。结果显示,两者之间具有良好的生物相容性,丝素膜材料支持小鼠胚胎干细胞的体外无限扩增和未分化特征,并保持其正常核型。证实丝素材料可作为胚胎干细胞结合的良好生物材料。

应用RNA干扰技术体外抑制兔成纤维细胞HGPRT的表达及其核移植研究(英文)

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine guaninephos phoribosyltransferase,HGPRT)的功能缺失与痛风、肾结石和雷纳综合症(Lesch-Nyhan Syndrome)等疾病相关.制作HGPRT基因表达降低的模式动物,将有利于人们对这种疾病的发病机理和治疗做进一步的研究.构建了针对HGPRT基因表达的shRNA干扰载体,并将质粒转染兔成纤维细胞,获得携带该干扰片段的转基因细胞系,经PCR鉴定转基因成纤维细胞克隆阳性率为83.3%.RT-PCR及Western blot检测结果表明转基因干扰成纤维细胞系HGPRT mRNA和蛋白质表达量明显降低.最后,以转基因成纤维细胞进行核移植,囊胚率为27.8%,与正常来源的成纤维细胞囊胚率相比较差异不显著.说明,通过RNAi可稳定干扰兔成纤维细胞HGPRT基因的表达,为进一步通过核移植技术建立HGPRT RNAi转基因兔模型创造条件.

保温措施对小鼠麻醉效果的影响

目的研究动物实验中保温措施对小鼠麻醉效果的影响。方法实验分为戊巴比妥钠40mg／kg、水合氯醛400mg／kg及氯胺酮100mg／kg与咪唑安定5mg／kg复合麻醉三个麻醉药物组，每组各设常温（20-22℃）和保温2个组（37-40℃），各组C57BL／6小鼠雌雄各10只，腹腔麻醉后观察各组麻醉效果。结果各麻醉药物组内同性别比较，保温状态下的深度麻醉和麻醉后恢复自主期相对常温状态比较均有极显著差异。结论在手术麻醉中，经保温措施可以明显缩短深度麻醉期和麻醉后恢复自主期的时间，对选择性使用短效麻醉及动物的顺利安全苏醒有实际意义。