MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究肌原纤维形成调节因子1(MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)途径减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡。方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系。结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡(P<0.01),下调CHOP表达(P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高(P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡(P<0.01)、CHOP表达上调(P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降(P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化(P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01)。结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡。

肌纤形成调节因子1促进微丝修复减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的研究

目的研究肌纤形成调节因子1(MR-1)通过促进心肌细胞微丝修复减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。方法原代培养的乳大鼠心肌细胞,随机分为正常对照组、模型组、过表达组、敲低组、过表达+模型组、敲低+模型组、转染对照组。采用RT-PCR检测MR-1、肌球蛋白调节型轻链2(MLC-2)mRNA表达,Western blot检测MR-1、纤维状肌动蛋白(F-actin)/球状肌动蛋白(G-actin)、MLC-2蛋白相对含量和磷酸化,荧光染色法检测F-actin。结果与模型组比较,过表达+模型组F-actin排列紊乱,其F-actin/G-actin比值升高22.4%(P<0.01),MLC-2mRNA和蛋白表达和磷酸化分别升高26.8%、24.8%和29.6%(P<0.01);而敲低+模型组F-actin排列紊乱,F-actin/G-actin比值降低10.1%(P<0.01),MLC-2mRNA和蛋白表达及磷酸化分别降低18.8%、55.9%和37.6%(P<0.01)。结论 MR-1通过激活MLC-2/F-actin途径修复微丝,减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。

内质网整合应激反应

整合应激反应(integrated stress response,ISR)指细胞在氧化应激、氨基酸剥夺和内质网应激等情况下,通过真核细胞起始因子2(eukaryotic translation initiator factor 2α,eIF2α)所介导的细胞适应反应。近年来研究发现,eIF2α的上游激酶——蛋白激酶R样内质网激酶(protein ki-nase R-like ER kinase,PERK)是整合应激反应的关键分子,并调控另外两条内质网应激信号途径——需肌醇酶-1(inositol-requiring enzyme-1,IRE1)和活化转录因子6(activating transcriptionfactor 6,ATF6)途径,调控蛋白质合成、折叠、细胞自噬与凋亡,并启动与整合细胞核、线粒体和高尔基体等亚细胞器反应,决定应激细胞的转归。本文综述内质网整合应激反应的诱发因素、细胞信号途径及其生理和病理生理作用的研究进展。

西洋参茎叶总皂苷对缺血/再灌注大鼠心肌线粒体膜电位及细胞凋亡的影响

目的:研究西洋参茎叶总皂苷(PQS)对大鼠缺血/再灌注(I/R)损伤后心肌细胞凋亡的影响,并从线粒体膜电位(ΔΨm)及线粒体凋亡通路探讨其可能的机制。方法:健康雄性SD大鼠90只,随机分为假手术(sham)组、模型(I/R)组、PQS(200 mg·kg-1·d-1,灌胃6周)+I/R组、环孢霉素A(CsA;10 mg·kg-1,再灌前10 min腹腔注射)组、CsA+I/R组和PQS+CsA+I/R组,各组n=15。除sham组和CsA组大鼠开胸后冠状动脉左前降支(LAD)下穿线不结扎外,其余各组大鼠常规麻醉后,结扎LAD 30 min,再灌注120 min复制I/R模型。生化分析仪测血清乳酸脱氢酶(LDH)含量,氯化三苯基四氮唑(TTC)和伊文思蓝双染法测心梗面积,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白的表达。采用JC-1作为荧光探针,用激光共聚焦显微镜和荧光酶标仪测定ΔΨm水平。结果:与sham组比较,I/R组血清LDH活性、心梗面积和心肌细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);与I/R组相比,PQS+I/R组、CsA+I/R组和PQS+CsA+I/R组血清LDH活性、心梗面积和心肌细胞凋亡率均显著降低(P<0.05)。Western blotting结果显示,与sham组相比,I/R组心肌Bcl-2蛋白表达量降低,Bax、胞浆cytochrome C和cleaved caspase-3升高(均P<0.05);与I/R组相比,PQS+I/R组、CsA+I/R组和PQS+CsA+I/R组心肌Bcl-2蛋白表达量升高,Bax、胞浆cytochrome C及心肌cleaved caspase-3蛋白表达量均降低(P<0.05)。激光共聚焦显微镜观察结果示,I/R组线粒体JC-1染色后红色荧光强度减弱,荧光酶标仪测相对荧光单位(RFU)较sham组降低(P<0.05);PQS+I/R组、CsA+I/R组和PQS+CsA+I/R组RFU均较I/R组升高(P<0.05)。结论:PQS显著降低大鼠I/R后心肌细胞损伤,减少细胞凋亡,其机制与维持再灌注期ΔΨm稳定、抑制线粒体凋亡通路的激活有关。

西洋参茎叶总皂苷通过抑制内质网应激减轻毒胡萝卜素诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究西洋参茎叶总皂苷(PQS)减轻毒胡萝卜素(TG)诱导的心肌细胞凋亡的分子机制。方法:原代培养的心肌细胞分为:control组、TG组、PQS(40 mg/L、80 mg/L及160 mg/L)+TG组、牛磺酸(40mmol/L)+TG组、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)敲低+TG组及随机双链RNA转染对照(mock)+TG组。通过向培养液中加入1μmol/L TG作用24 h诱导离体培养的乳大鼠心肌细胞凋亡。以RNAi方法敲低心肌细胞PERK基因。CCK-8法和流式细胞术检测细胞活性及凋亡率,Western blotting方法检测内质网应激(ERS)标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP 78)、钙网蛋白(CRT)、PERK、p-PERK、真核起始因子2α(eIF2α)、p-eIF2α、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与对照组比较,TG孵育明显诱导细胞凋亡,降低细胞活力,上调PERK和eIF2α磷酸化以及GRP78、CRT、ATF4、CHOP及促凋亡蛋白Bax表达,降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达(P<0.05);与TG组比较,PQS 160 mg/L及敲低PERK均可显著降低细胞凋亡率,升高细胞活力(P<0.05);3种不同浓度的PQS可呈剂量依赖性降低Bax蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05),敲低PERK基因及PQS(160 mg/L)预处理均可降低ERS分子GRP78、CRT、ATF4及CHOP表达,降低PERK及eIF2α的磷酸化水平(P<0.05)。结论:PQS 160 mg/L减轻ERS诱导剂TG诱导的心肌细胞凋亡,PQS预处理可以模拟PERK敲低减轻TG致心肌细胞凋亡的效应,提示PERK-eIF2α-ATF4-CHOP途径参与PQS减轻ERS相关凋亡的作用。

不同危险分层原发性高血压病患者甲襞微循环改变

目的:观察原发性高血压病不同危险分层患者甲襞微循环变化。方法:115例原发性高血压病患者,根据心血管危险分层分为低危组(n=7)、中危组(n=28)、高危组(n=34)和极高危组(n=46),以同期20例年龄、性别匹配的健康志愿者为健康对照组。采用ZL-104型微循环检测仪和微循环图像分析系统检测各组甲襞微血管视野清晰度、管袢长度、管袢数、畸形管袢数、交叉管袢数、输入支管径、输出支管径、袢顶直径、血流速度、红细胞聚集程度、白细胞数、白微栓、袢周渗出、出血、甲襞微血管乳头及乳头下静脉丛的统计学差异。结果:低危组甲襞微循环各项指标与健康对照组比较均无统计学差异(P>0.05),中危组到极高危组甲襞微循环渐次出现明显的形态、流态和袢周状态的变化,且与低危组差异均有统计学意义(P<0.05)。形态上主要表现为:视野清晰度变差、微循环管袢数减少、畸形管袢数占比增加、输入支管径变细;流态上主要表现为:微血管内血流速度减慢、红细胞聚集增多;在袢周状态上主要表现为:微血管袢周渗出增多。且有高血压危险分层越高,上述改变越严重的趋势。结论:高血压病患者出现与危险分层相关的甲襞微循环改变。甲襞微循环变化对高血压病患者病情评估、治疗与预后判断有重要临床意义。

创伤后应激障碍对大鼠肠系膜和软脑膜微循环的影响

目的:研究创伤后应激障碍(PTSD)大鼠肠系膜和软脑膜微循环的改变及其机制。方法:成年健康雄性SD大鼠18只,随机分为正常对照组(n=6)和PTSD组(n=12)。采用单程延长刺激法复制PTSD大鼠模型,通过旷场实验检测大鼠的行为学改变;采用活体微循环观测技术观察大鼠肠系膜及软脑膜微血管内径和血流速度的改变;采用ELISA检测大鼠血浆去甲肾上腺素(NA)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和内皮素-1(ET-1)水平。结果:与正常对照组比较,PTSD组大鼠在旷场中穿行格数及直立次数显著减少(P<0.01);肠系膜及软脑膜细动脉、细静脉管径明显变细(P<0.05),血流速度趋缓;血浆NA和ET-1含量显著升高(P<0.01),但eNOS水平无显著变化(P>0.05)。结论:PTSD大鼠存在肠系膜和软脑膜微循环障碍。

理气活血颗粒改善气滞血瘀冠心病患者足背皮肤微血管功能

目的:研究理气活血颗粒对气滞血瘀冠心病患者足背微血管功能的影响。方法:气滞血瘀冠心病患者31例,随机分为2组:安慰剂组(16例)和理气活血颗粒组(15例),患者每次给予安慰剂或理气活血颗粒1袋,一日2次,连续服用12周,随访12周。用激光多普勒血流仪检测患者入组期、治疗期、随访期足背微血管基础血流灌注量、局部加热至44℃时的血流灌注量、加热后比值、足部皮肤温度、足趾压力和趾/肱指数。结果:入组期,理气活血颗粒组与安慰剂组的基础血流灌注量、加热后血流灌注量、加热后比值、足部皮肤温度、足趾压力和趾/肱指数之间的比较均无显著性差异(P>0.05)。治疗期,理气活血颗粒组基础血流灌注量、加热后血流灌注量和加热后比值均有升高的趋势,其中理气活血颗粒组的加热后血流灌注量(164.86±44.82 PU)高于安慰剂组(120.62±65.24 PU),两组之间的比较差异显著(P<0.05)。随访期,理气活血颗粒组的加热后比值有增高的趋势,但是与安慰剂组比较无统计学意义(P>0.05),其它微血管功能指标无明显改变。结论:理气活血颗粒可以提高气滞血瘀冠心病患者足背皮肤血流灌注量,改善其足背皮肤微血管储备能力。

钙网蛋白介导缺氧预处理对心脏保护机制的研究

目的探讨缺氧预处理(HPC)对于心肌钙网蛋白表达与肌浆网钙稳态的影响及其信号转导机制。方法选择SD大鼠22只,随机分为假手术组6只,模型组8只,HPC组8只。复制SD大鼠HPC和心肌梗死模型,检测左心室压力最大上升速率和最大下降速率(±dp/dtmax)、TTC法测定心肌梗死面积,差速离心法制备心肌肌浆网并鉴定其纯度,以Millipore滤过法测定肌浆网Ca2+摄取活性和肌浆网Ca2+释放速率,Western blot检测钙网蛋白、p38丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶水平。结果与假手术组比较,模型组+dp/dtmax和-dp/dtmax分别下降39%和46%(P<0.05);与模型组比较,HPC组分别升高43%和59%(P<0.05),肌浆网Ca2+摄取升高[(60.38±5.76)nmol Ca2+/(mg·min)vs(31.10±3.13)nmol Ca2+/(mg·min)],肌浆网Ca2+释放降低[(32.12±1.18)nmol Ca2+/(mg·15s)vs(39.61±1.16)nmol Ca2+/(mg·15s),P<0.05],钙网蛋白表达和p38丝裂原活化蛋白激酶水平明显升高(P<0.05)。结论 HPC通过p38丝裂原活化蛋白激酶途径上调钙网蛋白表达,改善心肌肌浆网Ca2+摄取和肌浆网Ca2+释放功能、减轻细胞内钙超载而保护缺血心肌。

不同危险分层的原发性高血压患者球结膜微循环的改变

目的：研究高血压病不同危险分层对原发性高血压患者球结膜微循环形态及功能的影响。方法根据血压水平（1、2、3级）、其他心血管危险因素（年龄、吸烟、血胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、早发心血管家族史、体质量指数、高敏C反应蛋白等）、靶器官损害及并发症的情况，对118例高血压病患者进行分层，研究不同危险分层的高血压病患者和同期20例健康志愿者球结膜微循环的变化。结果与健康对照组比较，低危组高血压病患者球结膜微循环改变主要表现为稀疏网格结构、微血管数目减少及细静脉管径变细，两者差异有统计学意义（P＜0.05）。中危以上（含中危）组高血压病患者球结膜微循环出现形态、流态和袢周状态的明显改变。其形态改变主要为视野清晰度下降、微血管数减少、细动脉及细静脉管径变细、微血管粗细不均增多，并出现网格结构、微血管瘤、囊状扩张及缺血区。其流态改变主要为微血管内血流速度减慢、红细胞聚集。其管周渗出增加、含铁血黄素沉着增多。随着高血压危险分层的增加，球结膜微血管密网格结构比例逐渐增多、微血管数逐渐减少、微血管内血流速度逐渐减慢、红细胞聚集程度逐渐加重，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论高血压病患者出现与危险分层相关的球结膜微循环改变。

物流行业清洁生产评价指标体系的构建及应用研究

物流行业作为第三产业,逐渐变成中国新的经济增点,促进经济的快速发展。随着中国物流行业的飞速发展,物流行业带来资源能源环境的问题也日益增多。针对物流行业环境污染现状,为发掘物流过程中的清洁生产潜力,更有效开展物流行业清洁生产工作,结合物流行业运作的特点,根据清洁生产及其评价体系的相关理论,构建了三个层次,6个一级指标和26个二级指标的物流行业清洁生产评价指标体系,并应用于湖北省某物流企业的清洁生产评价,用以提高该企业清洁生产水平,增强其可持续发展性。

双碳背景下基于二元语义法的清洁生产审核评价方法研究

随着国家绿色低碳循环经济发展,双碳目标达成的迫切需求,清洁生产的实施是企业实现低碳发展的有效手段。构建基于二元语义的清洁生产审核评价方法,选取了两个典型水泥企业,对其进行案例分析,计算得出两个企业评价信息二元组分别为(2,-0.052)、(2,-0.073)。显示该审核评价方法更严谨、可靠、直观的体现清洁生产水平的等级,以及清洁生产水平的差异,二元语义组中的偏差值映射出的企业各项现状的差异可反应清洁生产实际效果及潜力,对企业持续清洁生产工作与低碳发展具有指导意义和辐射作用。

芜铜长江公铁大桥接线桥面沥青混合料的设计与性能评估

本文介绍了芜铜长江公路大桥的引桥桥面铺装工程沥青混凝土的配合比设计,以及改性剂对关键各项路用性能的影响评估。结果表明,改性剂对沥青混合料的抗水损性能和疲劳性能等改善明显,低温抗裂性满足技术要求,可应用于工程实践;掺加WT-I的沥青混合料,其低温抗裂性和疲劳性能优于掺加WT-II的沥青混合料,而后者对沥青混合料高温性能的改善优于前者。