目的研究A激酶锚定蛋白（AKAP1）在高糖诱导足细胞线粒体分裂中的作用及可能的信号转导通路。方法体外培养条件永生性人足细胞，完全分化并同步化处理后进行后续实验。实验分组：（1）葡萄糖浓度分为5、15、25、35mmol／L组刺激足细胞48...目的研究A激酶锚定蛋白（AKAP1）在高糖诱导足细胞线粒体分裂中的作用及可能的信号转导通路。方法体外培养条件永生性人足细胞，完全分化并同步化处理后进行后续实验。实验分组：（1）葡萄糖浓度分为5、15、25、35mmol／L组刺激足细胞48h；（2）高糖（35mmol／L）培养基分别刺激足细胞12、24、36、48h；（3）正常对照组（5mmol／L葡萄糖）、高渗对照组（30mmol／L甘露醇＋5mmol／L葡萄糖）、高糖组（35mmol／L葡萄糖）、高糖（35mmol／L葡萄糖）＋AKAP1siRNA组。免疫荧光染色检测足细胞中AKAP1的表达和分布，Western印迹检测足细胞中AKAP1、线粒体动力相关蛋白1（dynamin related protein1，Drp1）、P-Drp1蛋白水平。Mitotracker Red染色观察各组足细胞线粒体形态，对长度、纵横比、形状系数定量分析。流式细胞术评价足细胞凋亡水平。结果与正常组比较，高糖刺激导致足细胞凋亡增加（P〈0．05），线粒体分裂增加、纵横比及形状系数降低（均P〈0．05），AKAP1蛋白表达水平、P-Drp1／Drp1以时间、浓度依赖方式增加（P〈0．05）；与高糖组比较，AKAP1siRNA转染后线粒体分裂减少，线粒体纵横比及形状系数升高（均P〈0．05），足细胞凋亡减少；AKAP1蛋白水平及P-Drp1／Drp1下降（P〈0．05）；上述各项高渗对照组与正常对照组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论高糖刺激下AKAP1可能通过线粒体Drp1调控足细胞线粒体分裂，导致足细胞损伤。展开更多
文摘目的研究A激酶锚定蛋白（AKAP1）在高糖诱导足细胞线粒体分裂中的作用及可能的信号转导通路。方法体外培养条件永生性人足细胞，完全分化并同步化处理后进行后续实验。实验分组：（1）葡萄糖浓度分为5、15、25、35mmol／L组刺激足细胞48h；（2）高糖（35mmol／L）培养基分别刺激足细胞12、24、36、48h；（3）正常对照组（5mmol／L葡萄糖）、高渗对照组（30mmol／L甘露醇＋5mmol／L葡萄糖）、高糖组（35mmol／L葡萄糖）、高糖（35mmol／L葡萄糖）＋AKAP1siRNA组。免疫荧光染色检测足细胞中AKAP1的表达和分布，Western印迹检测足细胞中AKAP1、线粒体动力相关蛋白1（dynamin related protein1，Drp1）、P-Drp1蛋白水平。Mitotracker Red染色观察各组足细胞线粒体形态，对长度、纵横比、形状系数定量分析。流式细胞术评价足细胞凋亡水平。结果与正常组比较，高糖刺激导致足细胞凋亡增加（P〈0．05），线粒体分裂增加、纵横比及形状系数降低（均P〈0．05），AKAP1蛋白表达水平、P-Drp1／Drp1以时间、浓度依赖方式增加（P〈0．05）；与高糖组比较，AKAP1siRNA转染后线粒体分裂减少，线粒体纵横比及形状系数升高（均P〈0．05），足细胞凋亡减少；AKAP1蛋白水平及P-Drp1／Drp1下降（P〈0．05）；上述各项高渗对照组与正常对照组差异均无统计学意义（均P〉0．05）。结论高糖刺激下AKAP1可能通过线粒体Drp1调控足细胞线粒体分裂，导致足细胞损伤。
