贵州光枝勾儿茶内生真菌Diaporthe sp.代谢产物分离鉴定及其抑菌活性研究

为探究黔产苗药光枝勾儿茶中1株具有抗菌活性的内生真菌Diaporthe sp.QX4G6代谢产物的化学成分,并从中筛选抑菌活性化合物,经对菌株Diaporthe sp.QX4G6扩大培养后,利用多种分离方法对代谢产物进行分离纯化,结合光谱技术与文献报道鉴定其结构;以微量肉汤二倍稀释法和平板涂布法分别测定单体化合物对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性。结果表明,从Diaporthe sp.QX4G6菌株代谢产物中分离纯化得到4个单体化合物,经核磁共振和质谱分析,分别鉴定为邻苯二甲酸二丁酯(化合物1)、1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯酰基]-2-[(E,E)-7,10-十八碳二烯酰基]-3-硬脂酰基甘油化合物(2)、3-(4-甲苯氧基)-丙酸(化合物3)、酪醇(化合物4)。抑菌试验结果显示,化合物1—3对大肠杆菌和沙门氏菌均表现出一定的抑制活性,相同条件下对沙门氏菌的抑制作用较强;其中化合物3的抑菌活性最强,对2株细菌的最小抑菌浓度(MIC)分别为7.81μg/mL和3.91μg/mL,最小杀菌浓度(MBC)分别为15.63μg/mL和7.81μg/mL。综上,4个化合物均为首次从茎点霉属(Diaporthe sp.)内生真菌代谢产物中分离得到,其中3个化合物在体外对大肠杆菌和沙门氏菌具有一定的抑菌作用,为进一步开发利用光枝勾儿茶内生真菌代谢产物提供科学依据。

黔中金荞麦活性物质提取工艺优化及提取物抑菌活性研究

为优化贵州地区优质牧草黔中金荞麦活性物质的提取工艺,并探究提取物抑菌活性,试验通过回流法、超声法、水煮法及鲜样榨汁法对黔中金荞麦地上部分和地下部分进行提取,通过打孔法检测各提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌效果,确定提取方法;利用高效液相色谱法(HPLC)检测提取物中的有效物质含量,对溶液浓度、料液比、提取温度进行优化,设置正交试验确定最优提取工艺。以微量肉汤二倍稀释法检测在最佳提取条件下提取的黔中金荞麦提取物对3种细菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:黔中金荞麦地下部分的70%乙醇超声提取物对3种细菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好,抑菌圈直径为24.2 mm。最佳提取工艺为乙醇浓度50%,提取温度60℃,料液比1∶40。提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌的MIC介于31.25~62.5 mg/mL之间,MBC介于为62.5~500 mg/mL之间;对金黄色葡萄球菌的抑制效果较好,MIC和MBC分别为31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。说明黔中金荞麦地下部分醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和沙门氏菌均具有抑制作用,且对金黄色葡萄球菌抑制效果较好,作为减抗替抗饲料添加制品具有现实可行性。

牛源化脓隐秘杆菌的分离鉴定与黔中金荞麦体外抑菌试验

为分离致病性牛源化脓隐秘杆菌并探究黔中金荞麦对该菌的体外抑制作用,本试验对采集于贵州省凯里市某养殖场疑似患牛呼吸道综合征的病死牛肺组织进行细菌分离、形态学观察、生理生化鉴定、分子生物学鉴定、药敏试验和致病性试验,并运用打孔法探究黔中金荞麦提取物对分离菌株的体外抑制效果。结果显示,分离菌株为革兰阳性短棒状杆菌,结合生理生化和PCR鉴定结果,确定该菌为化脓隐秘杆菌,系统进化树分析也显示,分离菌株与化脓隐秘杆菌的模式菌株处于同一分支;该分离菌株可致10只小鼠于24 h内全部死亡;其对头孢他啶、利福平、青霉素等7种抗菌药敏感,对环丙沙星中介,对克林霉素、左氧氟沙星、庆大霉素等8种抗菌药耐药;黔中金荞麦不同组织部位、不同处理方法的提取物对该分离菌株均具有一定抑制效果,其中地下部分70%乙醇超声30 min提取物的抑菌效果最好,抑菌圈直径为(28.13±0.25)mm,与头孢喹肟的抑菌效果相当。本试验首次从贵州地区分离到致病性牛源化脓隐秘杆菌,黔中金荞麦对该菌具有良好的体外抑制效果。本试验结果可为该肉牛养殖场疫病防控以及牛化脓隐秘杆菌感染的治疗和预防提供参考依据。

黔中金荞麦提取物安全性评价及对大鼠肠道菌群的影响

为探讨黔中金荞麦提取物临床使用的安全性及对大鼠肠道菌群的影响,以昆明小鼠和大鼠为研究对象,进行急性毒性和亚慢性毒性试验。急性毒性试验测定黔中金荞麦提取物的半数致死量(LD_(50)),大于5.00 g/kg;亚慢性毒性试验,黔中金荞麦水、醇提取物各剂量组对大鼠体质量无不良影响,醇提物高剂量组可致部分大鼠死亡,其余各组对大鼠外观行为无不良影响。与对照组比较,黔中金荞麦醇提物低剂量组大鼠白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYMPH)显著性升高(P<0.05);黔中金荞麦醇提物中剂量组大鼠总蛋白(TP)极显著降低(P<0.01),尿素氮(BUN)和雌性大鼠脾脏系数呈显著降低(P<0.05);黔中金荞麦醇提物高剂量组甘油三酯(TG)无显著性变化(P>0.05),其余血液生化指标均有显著或极显著变化,雌性大鼠脾脏系数呈极显著降低(P<0.01)。黔中金荞麦水提物高剂量组TP极显著降低(P<0.01),TG显著增加(P<0.05)。组织病理学检测表明,高剂量的黔中金荞麦水提物和醇提物对大鼠肝脏和肾脏结构具有一定影响。与对照组比较,黔中金荞麦水提物组大鼠肠道菌群丰度减少,醇提物组丰度增加,饲喂提取物后菌群多样性和物种均匀度均减少。水提物、醇提物及对照组优势菌群门类均为拟杆菌门和厚壁菌门,最优菌属分别为唾液乳酸杆菌属(9.06%)、拟杆菌属(37.67%)和拟普雷沃菌属(5.91%)。线性判别分析效应大小分析(LEfSe)表明,与对照组比较,黔中金荞麦水提物组拟杆菌属、醇提物组乳杆菌属等有益菌相对丰度增加。根据外源性化学物急性毒性分级标准,黔中金荞麦水提物和醇提物为无毒物质;结合亚慢性毒性试验结果和病理组织观察结果,高剂量的黔中金荞麦水提物(40 g/kg)和醇提物(34 g/kg)可影响大鼠肝脏和肾脏结构;黔中金荞麦提取物可改变大鼠肠道菌群结构,调节菌群种类和数量。

鸽源沙门氏杆菌的分离鉴定与药敏性

【目的】分离鉴定临床鸽源沙门氏菌,探明分离菌对常见抗生素及自拟复方中药的敏感性,为肉鸽养殖场沙门氏菌合理用药和中兽药防治提供科学依据。【方法】通过病死鸽病料分离沙门氏菌,进行形态学、培养特征、生化特征、16SrRNA测序鉴定;使用临床常用抗生素、自拟中药复方对分离菌进行药敏试验。【结果】分离菌株符合沙门氏菌形态学、生化试验等特性,16Sr RNA测序鉴定为沙门氏菌;该菌对头孢拉定、链霉素、多粘菌素B、多西环素、四环素、阿奇霉素、复方新诺明耐药;对新霉素、克林霉素中度敏感;对诺氟沙星、恩诺沙星、左氟沙星等8种常见抗生素敏感;对自拟中药复方四(白头翁、鱼腥草、金银花、乌梅、诃子、白术等中药)高度敏感,对方二(白头翁、黄柏、黄芩、蒲公英、乌梅等中药)、方三(连翘、蒲公英、夏枯草等中药)、方五(由黄芩、秦皮、诃子、柴胡等10味中药)为中度敏感。【结论】分离鸽源沙门氏菌对头孢拉定等7种常见抗生素耐药;自拟中药复方在抑制鸽源沙门氏菌方面具有一定效果,其中,中药复方四对该菌高度敏感。

黔中金荞麦醇提物对断奶仔猪肠道菌群的影响

为了探究黔中金荞麦醇提物对断奶仔猪肠道菌群的影响,选取12头健康的断奶柯乐仔猪平均分为2组,Ⅰ组(试验组)饲喂98.5%基础日粮+1.5%黔中金荞麦提物,Ⅱ组(对照组)饲喂100%基础日粮,第15 d采集直肠粪便利用高通量测序技术分析仔猪肠道菌群的变化。结果:(1)Ⅰ组的细菌OTU(运算分类单元)数比Ⅱ组大,真菌OTU数比Ⅱ组小,2个组的细菌菌群丰富度差异不显著(P>0.05);Ⅰ组的细菌菌群多样性比Ⅱ组大,真菌菌群丰富度和多样性比Ⅱ组小,细菌群落结构差异显著(P<0.05)。(2)细菌分类:门水平主要有厚壁菌门(51.88%、36.17%)、拟杆菌门(32.23%、26.90%)、变形杆菌门(4.26%、22.17)等,属水平主要有埃希菌-志贺菌属(1.77%、15.56%)、琥珀酸弧菌属(1.51%、7.87%)、乳杆菌属(4.87%、2.34%)等;真菌分类:门水平主要有子囊菌门(40.67%、46.65%)、新美鞭菌门(35.56%、9.02%)、担子菌门(5.48%、7.16%)等,属水平主要有新美鞭菌属(35.36%、9.02%)、曲霉属(12.94%、16.18%)、丝孢酵母属(5.76%、3.48%)等。Ⅰ组的细菌差异物种数比Ⅱ组大,真菌差异物种数比Ⅱ组小。结论:饲喂黔中金荞麦醇提物可显著影响断奶仔猪肠道菌群结构,表现为有益菌群丰富度提高,有害菌群丰富度降低。

基于VC＋＋的AES算法的实现

本文重点介绍了高级加密标准算法，在研究分析了AES解密／加密原理的基础上，用VC＋＋语言完整的实现了AES算法。

基于高通量测序分析黔中金荞麦内生菌及其根际土壤微生物多样性

为探究贵州药饲兼用牧草黔中金荞麦内生菌及其根际土壤微生物的群落组成与结构,本试验采用高通量测序技术对其测序并进行生物信息学分析。结果表明,内生细菌有效序列524889条,聚类注释得到OTUs 1675条;内生真菌有效序列569064条,注释得到OTUs 2076条。黔中金荞麦茎叶中内生细菌Chao 1指数、ACE指数、Simpson指数、Shannon指数均低于根部,而真菌的4个指数均高于根部。根际土壤微生物各指数均高于黔中金荞麦茎叶和根部,微生物种类最为复杂、数量最多。黔中金荞麦茎叶和根内生细菌群落以蓝藻菌门(Cyanobacteria)为优势菌门,相对丰度分别为75.23%和63.83%,根际土壤为变形菌门(Proteobacteria),相对丰度为36.12%;真菌门水平上,在茎叶、根及根际土中以子囊菌门(Ascomycota)和担子菌门(Basidiomycota)为优势菌门。在属水平上,茎叶与根内生细菌中变形菌门未知属(unidentified_Chloroplast)相对丰度最高,分别占所有菌属的75.23%和63.82%,根际土壤中为赫黄嗜盐囊菌属(Haliangium),占所有菌属的2.96%;茎叶内生真菌枝孢菌属(Cladosporium)相对丰度最高(16.10%),根中灰球菌属(Bovista)相对丰度最高(17.67%),根际土壤中镰孢菌属(Fusarium)相对丰度最高(21.09%)。综上,黔中金荞麦内生菌及土壤微生物群落多样性存在差异,为进一步对黔中金荞麦的资源保护和内生菌的开发利用提供了理论依据。

贵州金荞麦块根中表儿茶素含量的测定及分析

为了解贵阳地区不同生长年限的黔中金荞麦和贵州不同产地的野生金荞麦块根中表儿茶素含量,利用高效液相色谱法进行检测分析。结果:2年生黔中金荞麦的表儿茶素含量为349.48μg/g,达到《中华人民共和国药典》要求;贵州不同产地的野生金荞麦表儿茶素含量差异较大,丹寨县的野生金荞麦表儿茶素含量最高,达到590.89μg/g,可作为药用型金荞麦资源开发利用。

HPLC法同时测定和评价“黔中金荞麦”中4种成分含量

“黔中金荞麦”是贵州省农业科学院畜牧兽医研究所选育的优质牧草(品种登记号:2019581),为建立同时测定该药材中表儿茶素、原花青素B、芦丁和槲皮素的检测方法,考察其含量多样性,采用高效液相色谱法测定并分析其含量与野生金荞麦的差异。C柱(250×4.6 mm,5μm),乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱,进样量10μL,流速0.7 mL/min,检测波长254 nm,温度30℃;原花青素B、表儿茶素、芦丁和槲皮素分别在5~85(r^(2)=0.9998)、5~80(r^(2)=0.9998)、0.5~8(r^(2)=0.9996)、0.125~2.0μg/mL(r^(2)=0.9999)范围内呈现良好线性关系,加样回收率高;黔西和麦坪的“黔中金荞麦”4种成分总含量高达1189.70、1108.01μg/g,其中原花青素B、芦丁和槲皮素含量最高,丹寨野生金荞麦表儿茶素含量最高。结果表明,本法准确可靠,适合“黔中金荞麦”的内控质量监测,“黔中金荞麦”中活性物质含量高且质量稳定,优于野生金荞麦。

血盆草止血活性部位的化学成分研究

目的:分离鉴定血盆草止血活性部位的化学成分。方法:采用95%乙醇回流提取,对活性部位石油醚和三氯甲烷萃取部位采用反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、重结晶等方法进行分离纯化,通过理化性质、光谱数据结合参考文献鉴定化合物结构。结果:从血盆草95%乙醇提取物的石油醚和三氯甲烷萃取部位中共分离得到13个化合物,分别鉴定为:熊果醛(1)、β-谷甾醇(2)、(22E)-5α,8α-epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol(3)、棕榈酸(4)、20-taraxasten-3β-ol(5)、11,12-去氢熊果酸内酯(6)、eupatoric acid(7)、白桦脂酸(8)、吲哚-3-甲酸乙酯(9)、3,13-二羟基-乌苏烷-13,28-内酯(10)、乌苏酸(11)、齐墩果酸(12)、2α,3β-二羟基-乌苏酸(13)。结论:其中,化合物1、3~7、9、10、12为首次从该植物中分离得到。

计算机课教学的点滴体会

随着计算机应用的日益普及,计算机教学在技工学校教学中所占比重越来越大.在教学实践中我感到掌握计算机课的特点是搞好计算机课程教学的前提.这里,仅就技工学校计算机课程的学习,谈几点体会.

音乐辅以语言唤醒策略对颅脑迁延性昏迷患者的应用效果

目的探究音乐辅以语言唤醒策略疗法对颅脑迁延性昏迷患者的作用效果。方法本研究以互联网数据收集为媒介,将2016年7月-2019年6月在西安交通大学第一和第二附属医院收治的136例颅脑迁延性昏迷患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组(n=68)和观察组(n=68),对照组运用传统的促醒方法,观察组在传统促醒方法基础上实施音乐辅以语言唤醒策略疗法。比较两组患者在干预前后的格拉斯哥昏迷评分(GCS)、脑功能障碍评分(DRS)、脑电图评价(CEEG)、昏迷恢复量表(CRS-R)评分的差异。结果观察组干预后CEEG评价及GCS评分高于对照组,DRS评分低于对照组,意识恢复总有效率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论音乐辅以语言唤醒策略疗法能改善颅脑迁延性昏迷患者的神经功能,促进其意识苏醒,具有临床推广价值。

黔中金荞麦的选育及在畜禽养殖中的应用研究进展

文章概述了黔中金荞麦的选育、品种特点、栽培技术、加工贮藏、营养价值、化学成分、生物信息学分析以及在畜牧养殖中的应用情况,以期为该牧草品种的深入研究和推广利用提供参考。

杠板归对猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR表达量的影响

为探索杠板归对猪源耐氟苯尼考大肠杆菌耐药基因floR表达量的变化,采用二倍稀释法测定杠板归59.92%乙醇提取物对大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),同时测定提取物处理后氟苯尼考的MIC,利用荧光定量PCR法建立标准曲线检测耐药基因floR的表达量。结果发现,杠板归提取物对5株大肠杆菌的MIC介于2.48~9.64 g/L之间,氟苯尼考对亚抑菌浓度药物处理后的大肠杆菌MIC值可下降至76.76%,floR基因荧光定量PCR反应的线性回归方程为C_(T)=-3.02×lg拷贝数+28.77,r^(2)=0.9992,杠板归提取物对5株耐药菌floR基因表达量分别下降13.02%、10.00%、15.21%、10.25%和8.84%。试验结果表明提取物具有较好的耐药消除作用,对floR基因表达量有明显抑制作用,提示在中药提取物中寻找耐药性大肠杆菌floR基因抑制剂有一定前景。

牛源化脓隐秘杆菌溶血素的重组表达及其间接ELISA检测方法的建立

为了建立检测牛源化脓隐秘杆菌抗体的间接ELISA检测方法,试验对分离的牛源化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)基因序列进行分析,截去信号肽与跨膜区域后进行碱基优化,合成PLO基因片段,连接至原核表达载体pET-30a中,转化至Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态后诱导表达并纯化,以纯化后的重组蛋白作为抗原包被96孔板,建立牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体间接ELISA检测方法,确定检测方法的临界值、特异性、敏感性、重复性,并用建立的方法对临床血清样本进行检测。结果表明:成功构建了重组原核表达质粒pET30a-PLO,实现了重组蛋白在Arctic Express(DE3)大肠杆菌感受态中的表达,并建立了用于检测牛源化脓隐秘杆菌PLO抗体的间接ELISA检测方法。该检测方法的临界值为0.354,与常见牛细菌阳性血清无交叉反应,阳性血清稀释至320倍检测仍高于临界值;批内、批间检测变异系数均小于5%;对10份已知阳性血清进行检测,阳性检出率为100%,80份临床牛血清的阳性检出率为21.25%(17/80)。说明该方法具有良好的特异性、敏感性、重复性,可用于牛源化脓隐秘杆菌感染的快速检测与流行病学调查。

血盆草的亲缘关系与化学成分的简述

血盆草,作为一种止血药广泛应用于民间,属于民间药。在民间以全草入药,治疗范围广,疗效确切,是贵州苗族、侗族等少数民族的常用的止血植物药。文章旨在通过查阅相关文献,弄清血盆草植物的亲缘关系,即种类归属,总述该植物现在为止对主要化学成分的研究,以便更好地开展对血盆草的化学成分和有效物质基础以及其他的相关研究,为血盆草的资源开发和利用提供理论基础。

大口径钢管桥施工的探讨与实践

为了确保钢制DN310 0管桥工程的质量与安全 ,分析论证了贝雷桁架悬臂顶推法、搭设满堂红支架法、大型吊车抬吊法、金属桅杆吊装法等管桥施工方案。通过经济技术比较认为 ,金属桅杆吊装法与大型吊车抬吊法结合起来施工是最佳方案。

贵州民间草药血盆草止血活性药效初步研究

目的:探讨贵州民间草药血盆草的止血药效及活性部位。方法:采用中药造模的方法建立小鼠出血模型,醇提物灌胃给药7天后用剪尾法和毛细玻管法测定出血、凝血时间,并统计小鼠血小板数,评价血盆草醇提物的止血作用;采用经典的系统溶剂法(极性由小到大:石油醚-氯仿-乙酸乙酯-正丁醇)萃取血盆草的95%乙醇提取物,经中药造模方法建立小鼠出血模型,灌胃给药7天后,取眼眶血离心后取血浆检测小鼠血浆的TT、PT、APTT及Fib浓度,综合分析全面评价,确定血盆草的止血药效活性部位。结果:模型用药组的出血时间、凝血时间均缩短,血小板数升高;凝血四项检测中,与空白组比较,模型组小鼠的TT、PT、APTT均缩短,Fib浓度降低,具极显著性差异(P<0.01);与模型组比较,各组出血性小鼠的TT、PT、APTT均缩短,Fib浓度升高,石油醚和氯仿组具极显著性差异(P<0.01)。结论:血盆草有较好的止血药效,其活性部位为石油醚和氯仿部位;检测方法简便、可靠。