结缔组织生长因子在病理性瘢痕中的表达

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在病理性瘢痕形成中的作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测10例瘢痕疙瘩(瘢痕疙瘩组)和10例增生性瘢痕(增生性瘢痕组)中的CTGF mRNA的表达,并以8例正常皮肤(正常皮肤组)作为对照。结果病理性瘢痕中CTGF mRNA表达均明显高于正常皮肤组(P<0.05),而瘢痕疙瘩组又高于增生瘢痕组(P<0.05)。结论CTGF在病理性瘢痕的形成过程中起到重要作用。

A型肉毒素治疗面部皱纹38例

目的观察A型肉毒素(BTXA)治疗面部皱纹的疗效。方法对38例额纹、眉间纹、鱼尾纹患者利用BTXA根据部位不同,分别采用不同剂量,定点均匀注射。结果38例患者经治疗后37例效果显著(97.37%),1例有效(2.63%),无一例出现并发症。结论BTXA在面部除皱中有确切的疗效,且痛苦小、见效快、副作用少。

成人脂肪间充质干细胞的定向成骨诱导

背景:脂肪分离可获得大量的间充质干细胞并成功向骨、软骨、脂肪、心肌等多个方向诱导分化。目的:建立成人脂肪间充质干细胞体外分离培养、成骨分化方法,并探讨脂肪间充质干细胞作为骨组织工程的种子细胞的前景。方法:通过胶原酶消化法从成人脂肪中分离间充质干细胞,进行体外培养,流式细胞仪检测细胞表面标记物,CCK8检测细胞活性,成骨诱导液诱导干细胞向骨细胞分化,BCIP/NBT比色法染色检测碱性磷酸酶,茜素红染色检测钙结节形成,RT-PCR检测碱性磷酸酶,骨桥蛋白表达变化。结果与结论:利用脂肪抽吸液成功培养出脂肪间充质干细胞,且能稳定传代,增殖能力旺盛;流式细胞仪检测证实有特定的间充质干细胞表面标记物表达;成骨诱导脂肪间充质干细胞后呈典型的成骨细胞形态;碱性磷酸酶染色阳性,茜素红染色后可见钙结节形成,成骨诱导培养0,3,7,14,21,28 d,RT-PCR定量检测结果证实碱性磷酸酶、骨桥蛋白阳性表达。说明用酶消化法可以从人脂肪中分离得到脂肪间充质干细胞;脂肪间充质干细胞可向骨细胞诱导分化,阳性表达骨桥蛋白,碱性磷酸酶,是一种优良的骨组织工程的种子细胞。

SDF-1-CXCR4/CXCR7信号对脂肪干细胞促血管新生能力的影响

目的研究SDF-1对ADSCs体外促血管新生能力的影响,并探讨CXCR4、CXCR7在其中的作用。方法体外培养ADSCs,检测其CXCR4、CXCR7的表达;SDF-1刺激ADSCs,并分别加入CXCR4、CXCR7封闭抗体,检测ADSCs-CM中VEGF、HGF、β-FGF含量,及其对h UVECs微血管形成的影响。结果成功培养ADSCs;ADSCs体外培养传代过程中CXCR4、CXCR7表达持续下降;SDF-1刺激上调CXCR4、CXCR7表达,并提高ADSCs对血管活性因子的分泌,及促进h UVEC微血管的形成;封闭CXCR4、CXCR7均可显著抑制SDF-1的促进作用。结论体外环境下,SDF-1可上调ADSCs中CXCR4、CXCR7表达,并通过SDF-1-CXCR4/CXCR7两条通路提高ADSCs的促血管新生能力。

L-精氨酸对随意皮瓣存活的影响

目的 探讨L -精氨酸 (L -arg)对随意皮瓣存活的影响及其作用机制。方法 选择雄性SD大鼠 34只 ,随机分组 :对照组 12只 ,实验组 2 2只。在鼠背部设计制备单蒂型随意皮瓣 (含肉膜层 ) ,长宽为 70mm× 15mm ,原位回植。实验组术后立即腹腔注射L -arg(1g/kg)加 2ml/kg生理盐水 ,对照组术后立即腹腔内注射 2ml/kg生理盐水 ;术后 2 4h取皮瓣组织检测一氧化氮 (NO)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)的含量 ,术后 7天测量两组皮瓣存活长度。结果 实验组术后 2 4hNO及SOD含量均高于对照组 (P <0 .0 1) ,而MDA含量低于对照组 (P <0 .0 1) ;实验组皮瓣存活长度也明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论 L -arg对随意皮瓣存活有促进作用。其作用机制可能是增加外源性L -arg的量 ,促进了机体组织中NO的生成 ,进而使组织中SOD增多 ,并降低了机体组织中的MDA ,改善皮瓣血供 ,减轻组织缺血 ,促进了创面愈合 ,增加了皮瓣存活率。

不同年龄阶段人脱细胞真皮的制备及性状分析

目的 制备不同年龄阶段的人脱细胞真皮（ADM）,并进行体外生物学性状分析,探讨年龄差异对ADM孔隙率、细胞毒性、体外降解性的影响.方法 利用氢氧化钠消蚀＋冻融法制备ADM,对比青年人与老年人皮肤制备的ADM孔隙率、细胞毒性、体外降解性等的差异.结果 成功获得ADM,2组ADM细胞毒性低、体外降解性能良好,老年组ADM孔隙率较青年组更理想.结论 氢氧化钠消蚀＋冻融法制备的ADM性状优良,老年ADM较青年人更为理想.

人脂肪间充质干细胞膜片的生物学性状研究

目的：以人脂肪间充质干细胞（human adipose －derived stem cells，hADSCs）为种子细胞，体外构建hADSCs 膜片，分析细胞膜片的生物学特点，为进一步进行动物实验奠定基础。方法胶原酶消化法分离纯化hADSCs，观察其增殖、生长特性和组织学形态；体外构建 hADSCs 膜片，膜片成熟后倒置显微镜、苏木精－伊红染色对膜片进行形态学检测。结果hADSCs 为长梭形，形态均一，增殖活跃。体外培养28天后获得半透明膜状细胞膜片，有弹性，倒置显微镜下观察细胞复层生长，细胞间紧密连接。苏木精－伊红染色证实脂肪干细胞膜片是一种由多层细胞和细胞外基质组成的聚集体。结论hADSCs 可体外成功构建细胞膜片，细胞数量及活性较高。

菱形皮瓣在扩张软组织修复缺损中的应用

目的探讨菱形皮瓣的设计在扩张皮瓣中间松弛部分充分利用的意义。方法扩张后的软组织在设计旋转皮瓣修复缺损时如果中间松弛部分不能充分利用,在旋转皮瓣上再次设计菱形皮瓣来充分利用扩张后的软组织。结果本组9例,在旋转皮瓣上再次设计菱形皮瓣,皮瓣全部存活,个别病例菱形皮瓣尖部早先轻度淤血。结论该设计较充分、合理地利用了扩张后的软组织,最大可能地修复了缺损,只要设计合理,是安全和值得推广的。

处女膜破裂修补术的临床体会

目的选择合适的手术时机、手术方式及麻醉方法，提高处女膜修复手术的成功率，减少术中痛苦。方法采用复方利多卡因软膏表面麻醉配合1％利多卡因局部肿胀麻醉。23例于性生活前2～3天手术，采用直接缝合法；35例于月经期后3～7天手术，采用瓦合法修复。结果58例患者术中均未诉疼痛，术后随访，55例结果满意，成功率94．83％。结论采用复方利多卡因软膏表面麻醉配合1％利多卡因局部肿胀麻醉，针对不同情况分别采用直接缝合法和瓦合法修复处女膜对减轻术中痛苦提高手术成功率是有效的。

HSP47 si RNA重组质粒对裸鼠瘢痕疙瘩模型的体内干预研究

目的利用RNA干扰(RNAi)技术通过热休克蛋白47(HSP47)siRNA重组质粒和脂质体的混合液对裸鼠瘢痕疙瘩模型的体内干预,分析HSP47基因在瘢痕疙瘩生成中的意义。方法构建裸鼠瘢痕疙瘩动物模型,第16天实验组(n=8)在瘢痕疙瘩内注射HSP47 siRNA重组质粒、脂质体混合液0.25 ml,对照组(n=8)裸鼠瘢痕疙瘩内注射PBS液0.25 ml。所有动物原笼饲养,7天回收标本,分别作mRNA水平、胶原蛋白水平检测及免疫组化染色。结果实验组体内干预后,HSP47的基因表达水平均较对照组明显下降(P<0.01),胶原的表达水平明显低于对照组(P<0.01)。结论HSP47基因能促进瘢痕疙瘩生成,其可能成为抑制瘢痕疙瘩的新靶点。

普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的疗效观察及护理

目的：总结口服盐酸普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的方法、疗效及护理经验。方法21例血管瘤婴幼儿口服盐酸普萘洛尔，密切观察患儿的精神、呼吸、心率、血压、腹泻及瘤体的颜色、张力、表面温度，针对不良反应给予对症处理。结果21例婴幼儿血管瘤都得到了有效控制，心率改变、血压改变、腹泻等不良反应得到及时处理。结论口服小剂量盐酸普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤疗效明显，不良反应轻。用药期间剂量的掌握，瘤体及药物不良反应的观察，耐心细致的护理对患儿的康复至关重要。

RNAi技术阻抑CTGF对瘢痕疙瘩形成影响的体外研究

目的 用RNA干扰（RNAi）技术探讨结缔组织生长因子（CTGF）对瘢痕疙瘩中胶原代谢的影响.方法 采用RNAi技术,将针对人CTGF基因设计合成的3对特异性小干扰RNA（siRNA）-CTGF分别转染体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFB）,通过逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测转染后瘢痕疙瘩组织中CTGF表达量的变化及胶原含量的变化,并与对照组比较.结果 第3对（C3）siRNA-CTGF转染人KFB后CTGF的基因表达及胶原蛋白表达水平显著受抑,其抑制率分别为86.8%及65.6%.结论 质粒siRNA-CTGF转染人KFB后有效沉默CTGF的表达进而使胶原合成降低,CTGF对瘢痕疙瘩形成过程中胶原蛋白的合成有促进作用.

特异性siRNA的筛选及CTGF—shRNA质粒的构建

目的构建结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）重组质粒，研究其在人皮肤瘢痕成纤维细胞中对CTGF基因表达的沉默效果，为探讨病理性瘢痕的基因治疗奠定基础。方法设计针对人CTGF基因特异性的3条siRNAoligo，通RT—PCR及Westernblot检测其在瘢痕成纤维细胞中的干扰效果，从中筛选出一条最佳片段。根据所筛选出的最佳片段序列设计并构建CTGF—shR—NA质粒，通过单酶切和测序鉴定该质粒。结果3条siRNAoligo中c3序列干扰效果最佳。酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功。结论成功构建CTGF—shRNA质粒，为进一步探索CTGF对人皮肤病理性瘢痕形成的作用奠定了基础。

新型猪胶原基真皮支架细胞毒性及亲和性的实验研究

目的通过对一种新型的猪胶原基真皮支架（PCDM）的细胞毒性和与成纤维细胞（FB）的亲和性进行评价,为这种新型生物材料的安全应用及工艺改良提供依据。方法用MTT法检测真皮支架不同浓度的浸提液对细胞增殖的影响情况,按医用生物材料细胞毒性分级标准进行评级;用MTT法测定种植24 h后FB在PCDM乳头层面的黏附情况,并与空白培养板对照,确定细胞在支架上的黏附率;在PCDM乳头层面种植人FB,于接种后1、7、14天通过苏木精-伊红染色、扫描电镜观察FB在PCDM上的生长情况。结果PCDM细胞毒性评级为0～1级,可认为无细胞毒性;FB在PCDM上的黏附数目相当于在培养板上的50%;FB在真皮支架乳头层表面增殖良好,但无法长入支架内部。结论猪胶原基真皮支架是一种无毒的天然异种真皮替代物,细胞亲和性较好,但需要改良生产工艺,以提高细胞黏附率和细胞相容性。

人皮肤瘢痕成纤维细胞原代培养及其生长曲线的研究

目的 建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,探索细胞的生长规律,为皮肤瘢痕体外研究提供平台.方法 采用组织块贴壁法原代培养瘢痕成纤维细胞,波形蛋白免疫细胞化学法鉴定成纤维细胞,CCK-8测定细胞生长曲线.结果 人皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,细胞形态为长梭形,波形蛋白表达阳性,16～18天可传第1代,以后每7～8天可传1代,传代后5～6天时为活跃期,第7天进入停滞期.结论 培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞在传代后第5～6天最适于于体外实验研究.

异体脱细胞真皮在软组织缺损修复中的应用

目的：评估应用异体脱细胞真皮（allo-ADM）修复体表软组织缺损的临床效果。方法：12例面部凹陷畸形，用allo-ADM填充修复；23例功能部位瘢痕挛缩畸形和5例胸部瘢痕疙瘩合并溃疡，松解、切除瘢痕后用allo—ADM与自体刃厚皮复合移植修复。结果：12例面部凹陷畸形填充术后Ⅰ期愈合，随访6个月～1年，除2例因填充量不足而再次手术外，均未见明显排异、吸收等并发症，局部柔软，外形良好。28例复合皮移植术后，除1例因感染致部分坏死（40％）外，其余成活率在90％以上；随访1年，外观与功能均近似自体中厚或全厚皮移植效果。结论：allo-ADM是填充、修复体表软组织缺损较理想的材料，亦为瘢痕疙瘩的治疗提供了新的方法。

人脂肪干细胞膜片修复裸鼠颅骨缺损的研究

目的探讨利用人脂肪干细胞（human adipose—derived stem cells，hADSCs）体外构建基于细胞膜片技术的可注射组织工程骨并修复裸鼠颅骨缺损的可能性。方法取成年人脂肪提取脂肪干细胞，体外扩增培养，第3代细胞高密度接种于培养皿内，并用含50mg／L2一磷酸抗坏血酸的成骨诱导培养基诱导形成细胞膜片。制造裸鼠颅骨单侧直径4mm极限缺损，用细胞膜片注射修复作为实验组，仅注射PBS处理组作为对照组（n=4），术后12周分别通过影像学、大体形态观察、组织学方法检测颅骨缺损的修复效果。结果hADSCs体外在50mg／L2-磷酸抗坏血酸成骨诱导培养基诱导培养下可形成质地较韧细胞膜片。12周Micro—CT见实验组缺损处大量骨质生成，修复百分比为（32．73±5．43）％；对照组几乎无新骨生成，修复百分比为（3．97±1．01）％；两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。大体形态观察见实验组有半透明骨痂修复缺损，对照组主要为纤维组织修复，骨质硬度明显低于实验组。H—E染色见实验组有较多成熟骨，对照组为纤维结缔组织。结论hADSCs可体外诱导成基于细胞膜片的组织工程骨并可用于修复裸鼠颅骨缺损。

皮肤软组织扩张术后并发症的预防及护理

目的探讨皮肤软组织扩张术的护理要点，预防及减少术后并发症。方法选取临床46例皮肤软组织扩张器植入患者，加强手术前后的护理，观察并发症的发生情况。结果46例皮肤软组织扩张器植入患者中发生腔内血肿3例，扩张器外露1例，扩张器破裂1例，其余均愈合良好。结论积极的护理可以减少皮肤软组织扩张术后并发症的发生，提高治疗效果。

慢病毒介导E-cadherin过表达对人脂肪干细胞成表皮分化的影响

目的探讨E-cadherin对人脂肪干细胞（hADSCs）成表皮分化的影响。方法利用胶原酶消化法从成人脂肪组织中分离培养hADSCs。携带增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的慢病毒载体（Lv-EGFP）介导E-cadherin基因以10、25、50和100的感染复数（MOI）作用72h转染hADSCs，荧光显微镜下观察荧光强度并统计转染效率。Lv-EGFP-E-cadherin过表达组慢病毒和Lv-EGFP对照组慢病毒分别转染hADSCs，未转染的hAD-SCs为空白组；4天后RT-PCR检测E-cadheimmRNA的表达。将各组hADSCs经成表皮诱导14天后，RT-PCR检测表皮细胞标志物CK18、ZO-1mRNA的表达情况。结果3代以后hADSCs呈均一长梭形，增殖活跃。MOI=10、25、50、100时，EGFP阳性率分别为51．9％±2．68％、95．1％±3．82％、95．6％±2．56％、96．9％±2．25％，选择MOI=25为最佳转染滴度进行后续实验。与对照组及空白组相比，转染Lv-EGFP-E-cadherin过表达慢病毒可显著增强hADSCs中E-cadherinmRNA的表达（P〈0．05），E-cadherin过表达后可显著增高细胞中CK18、ZO-1mRNA的表达（P〈0．05），促进成表皮分化。结论E-cadherin过表达可在一定程度上促进hADSCs向表皮细胞诱导分化。

小剂量普萘洛尔治疗特殊部位婴幼儿血管瘤的疗效观察

目的：观察小剂量普萘洛尔治疗特殊部位婴幼儿血管瘤的临床疗效及不良反应。方法30例特殊部位婴幼儿血管瘤，入院检查排除治疗禁忌，予以口服小剂量（2 mg· kg-1· d－1）普萘洛尔，每日8：00、20：00服药，第1天喂1／2剂量，第2天喂2／3剂量，第3天喂正常剂量，持续心电监护及指脉氧监测，观察记录瘤体大小、颜色、张力等变化并拍照存档，以评估疗效。每2周复查血常规、空腹血糖、肝肾功能，并记录不良反应。结果口服小剂量普萘洛尔72 h内，所有瘤体的颜色、张力均有不同程度减轻。随访3～12个月，疗效评价为痊愈19例（63．3％），显效5例，有效6例，显效率80．0％，有效率100％。主要不良反应为心率变缓12例，未行特殊处理；短期腹泻6例，对症治疗后痊愈。无血糖异常等不良反应。结论小剂量普萘洛尔治疗血管瘤，疗效显著且不良反应轻，为特殊部位婴幼儿血管瘤的有效疗法。