体外溶血对血钾测定的影响及校正

应用三波长分光光度法直接测定血浆血红蛋白 (FHb) ,以此作为溶血程度的判定指标 ,探讨溶血对血钾测定的影响。测定结果表明 :血浆FHb每增高 1g ,血钾值增高约 12 %。FHb与血钾增高值 ([K+ ]溶 - [K+ ]未)之间有较好的相关性 (R =0 938,P <0 0 1)。由此导出校正公式 :[K+ ]未=[K+ ]溶 - 0 513FHb +0 0 92 ,校正值平均相对误差 4 7% ;对 5例临床溶血标本进行校正 ,平均相对误差为 4 1%。

人类不同年龄组青、中、老龄红细胞的百分比值

本文报道新生儿组(20例)、青年组(20～29岁,30例)、中年组(40～49岁,26例)和老年组(60～71岁,16例)各组中的青、中、老龄红纽胞百分比。各年龄组分龄红纽胞百分比随着机体年龄增长而呈如下变化趋势:青、中龄红细胞明显下降,老龄红细胞显著上升。尤其老年组这种变化幅度更大。

不同细胞年龄的红细胞膜LP(A)含量与血浆含量的相关性

收集 96名门诊病人的肝素抗凝血标本 ,用抗低渗法将红细胞分为老、中、青三组 ,离心分离出不同细胞年龄的红细胞膜 ,测出膜上的LP(A)的含量。各组的LP(A)测定结果 (mg/ g膜蛋白 )为 :老龄组 70 2± 18 8、中龄组 60± 8 2、青龄组 34 0± 12 0。结果表明 :随细胞年龄的增加膜LP(A)含量有逐渐升高的趋势 ,老 -中、老 -青、中 -青组之间均有显著差异 (P <0 0 5) ,且膜LP(A)总含量 ( 54 53± 11 1)mg/ g膜蛋白与血浆中LP(A)含量 ( 190 2± 32 54)mg/L呈正相关 ,R =0 9617,P <0 0 1。膜LP(A)的沉积量取决于血浆中的LP(A)含量 。

用计算机拟合法制作ALT标准曲线

用赖氏法重复测丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）标准曲线１０次，计算机作线性回归和曲线拟合。直线回归结果：酶活性在不高于９７Ｕ的范围内，相关系数（Ｒ）＝０９９９，斜率（ｂ）＝２５５×１０－３，截距（ａ）＝００２８６；而达到２００Ｕ时，Ｒ＝０９８６，ｂ＝１９０×１０－３，ａ＝００６６，显著性检验两者之间差别为极显著。表明：９７Ｕ以下线性较好但不过原点，大于９７Ｕ之后开始明显偏离该线性。拟合后得一非线性曲线方程：吸光度＝０９５９Ｕ／（２４７５２＋Ｕ）（Ｒ＝０９９５）。转换为实用标准曲线方程为：Ｕ＝２４７５２吸光度／（０９５９－吸光度）。高值病理标本测定用该标准曲线可不必稀释而得到准确的结果。

肝病患者ALT、γ-GT、ChE组合试验分析

血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、γ－谷氨酰转移酶（γ－ＧＴ）、胆碱酯酶（ＣｈＥ）三酶组合试验对１０３例肝病（分为肝炎、肝硬化、肝癌三组）患者的测定结果表明：组合试验对肝病的检出有较高的阳性率，肝炎组阳性率达８１３％，肝癌组阳性率达９１７％，肝硬化组阳性率达９６３％。在全部１０３例肝病中，组合试验的阳性率达８６４％，明显高于单一测定ＡＬＴ的５６３％，单一测定γ－ＧＴ的６４１％，单一测定ＣｈＥ的３５９％（均Ｐ＜００１）。故ＡＬＴ、γ－ＧＴ、ＣｈＥ三酶组合试验在肝疾病的筛检中有一定价值。

多组分高效液相色谱数据的计算机程序处理

与岛津液相、气相色谱仪联用的C-R3A数据处理装置有较强的数据处理功能。通过设置ID表和某些参数,必要时使用时间程序(TIME-PROG),对仅有一个或数个目标峰的色谱分析结果,一般都能很方便地完成峰的鉴定和定量处理,但是当涉及到血浆游离氨基酸分析这类多达二十种左右目标峰的情况时。

散发性乳腺癌患者血浆BRCA1基因启动子异常甲基化的检测

目的:探讨散发性乳腺癌组织及外周血浆中BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其在散发性乳腺癌诊断中的价值。方法:用甲基化特异PCR方法对散发性乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及相应血浆进行BRCA1异常甲基化检测。结果:93例散发性乳腺癌组织中,BRCA1基因启动子异常甲基化率为29%(27/93),相应血浆中BRCA1的甲基化检出率为24.7%(23/93),而癌旁组织、正常对照血浆未检出甲基化,只检出未甲基化的BRCA1。血浆中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.05);BRCA1异常甲基化与髓样癌和粘液腺癌的组织分型显著相关(P<0.05),也与肿瘤淋巴结转移显著相关(P<0.005);但与散发性乳腺癌患者年龄(绝经与否)及肿瘤分级无显著的相关性(P>0.05)。结论:血浆BRCA1基因异常甲基化改变的检测在散发性乳腺癌的特异诊断、组织分型和淋巴结恶性转移等方面有一定的应用价值。

精子发生障碍患者Y染色体微缺失分子诊断

目的:通过建立的Y染色体微缺失筛查方法了解生精障碍与Y染色体微缺失的关系。方法:同时采用多重PCR-凝胶电泳技术和多重PCR-液态芯片技术对原发性无精症、少精症患者和精液常规正常男性对照进行Y染色体微缺失筛查。结果:42例无精症、少精症患者中,6例有AZF区域STS位点或基因的缺失,总缺失率为14.3%,AZFc/DAZ区发生微缺失的频率较高,AZFa区发生微缺失的频率较低。结论:本研究建立的Y染色体微缺失多重PCR-MASA检测系统具有相对高通量、简便、快速、特异性强、敏感性高等特点;染色体微缺失是导致男性精子发生障碍的重要原因之一,AZF的候选基因在精子发生过程中可能起重要作用。

RAR-β_2基因启动子异常甲基化与散发性乳腺癌的关系

目的探讨RAR-β2基因(retinoic acid receptor β2 gene)在散发性乳腺癌中启动子异常甲基化状况,进而探讨在散发性乳腺癌早期诊断中的检测价值。方法用甲基化特异性PCR(MSP)法和实时荧光定量PCR法对62例散发性乳腺癌病人的癌组织,15例增生的乳腺组织,10例正常乳腺组织进行RAR-β2基因的异常甲基化的检测。结果散发性乳腺癌癌组织中50%(31/62)发生了RAR-β2基因甲基化,增生的乳腺组织标本中20%(3/15)发生了RAR-β2基因启动子甲基化,正常的乳腺组织中均未检测到RAR-β2基因的甲基化。散发性乳腺癌癌组织中甲基化率与年龄、绝经与否无相关性,与淋巴结转移和临床分期有相关性(P<0.05);散发性乳腺癌与增生的乳腺组织和正常的乳腺组织间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RAR基因甲基化可能参与了乳腺癌的发生发展过程,与乳腺癌的病理分期和预后评估等方面有关。

BRCA1基因启动子异常甲基化与散发性乳腺癌的关系

目的探讨散发性乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其与散发性乳腺癌关系。方法用甲基化特异PCR(MSP)法对散发性乳腺癌病人癌组织、癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织进行BRCA1异常甲基化检测。结果在58例散发性乳腺癌中有17例癌组织检出了BRCA1基因启动子异常甲基化,甲基化频率为29.3%(17/58),相应的癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织均只检出未甲基化的BRCA1。在组织分型中,浸润性导管癌与浸润性小叶癌无显著差异(P>0.05),二者各自与髓样癌+黏液腺癌有显著差异(P<0.05)。有淋巴结转移的BRCA1基因启动子甲基化率高于无淋巴结转移组(P<0.005)。BRCA1甲基化与散发性乳腺癌的肿瘤分级及病人绝经与否均无显著差异(P>0.05)。结论在散发性乳腺癌中,BRCA1基因启动子具有很高的甲基化率,并与散发性乳腺癌的组织分型、恶性转移等方面有一定的关系。

蝉拟青霉多糖对环磷酰胺处理大鼠生长及外周血的影响

目的:研究蝉拟青霉多糖对正常及环磷酰胺所致免疫抑制大鼠生长及其外周血生化指标的影响。方法:大鼠随机分为4组,各只大鼠连续皮下注射相应药物21 d,处死大鼠后称脾脏和胸腺湿重,并计算湿重指数,常规方法测定大鼠外周血白细胞(WBC)数、血红蛋白(Hb)含量、电解质水平及蛋白含量,在全自动生化分析仪上分别以双试剂终点法、速率法测定酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)的活力。结果:蝉拟青霉多糖能使大鼠体重、胸腺湿重指数、外周血WBC数、Hb含量、总蛋白和球蛋白水平等显著提高,并能阻遏由环磷酰胺所致的抑制作用。结论:蝉拟青霉多糖能改善并调节大鼠营养状况和造血功能,从而增强机体的免疫功能。

宫颈癌中MRP、GST-π的表达及意义

目的:检测多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance-associated protein,MRP)、胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase-π,GST-π)在宫颈癌(cervical cancer,CC)中的表达,探讨其在宫颈癌多药耐药(multi-drug resistance,MDR)形成中的作用和相互关系。方法:运用荧光定量PCR(flurescence quantitative-PCR,FQ-PCR)检测47例宫颈癌组织及12例正常宫颈组织中耐药基因MRP、GST-πmRNA的表达情况,并分析其与临床病理参数之间的关系。结果:MRP、GST-π在宫颈癌中的表达分别为0.51±0.28、0.44±0.24,正常宫颈组织中的表达分别为0.20±0.11、0.18±0.10,耐药基因在宫颈癌中的表达高于正常宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。MRP、GST-π表达与病人的淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。MRP与GST-π之间的表达具有统计学意义。结论:MRP、GST-π基因高表达可能在宫颈癌原发性耐药中起重要作用,检测MRP、GST-π基因的表达情况对预测宫颈癌的化疗效果、协助临床选择化疗方案可能有一定意义。

Survivin及其剪接变体△EX3在胃肠道肿瘤患者外周血中的表达

目的检测胃肠道肿瘤患者外周血Survivin及其剪接变体△EX3 mRNA的表达水平,探讨其在胃肠道肿瘤的发生、发展及预后判断中的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法检测40例胃肠道肿瘤患者和20例健康体检人员外周血Survivin及其剪接变体△EX3 mRNA的表达情况。结果 40例肿瘤患者检测到35例Sur-vivin mRNA表达、29例Survivin-△EX3 mRNA表达,20例健康体检人员检出1例Survivin mRNA表达,未检出Survivin-△EX3 mRNA表达,两者差异有统计学意义;Survivin mRNA在胃肠道肿瘤患者外周血表达的阳性率与临床病理特征无相关性,但其相对表达水平与淋巴结转移及临床病理分期密切相关。Survivin-△EX3 mRNA在胃肠道肿瘤患者外周血表达的阳性率和相对表达水平与分化程度、淋巴结转移及临床病理分期均密切相关。结论外周血中Survivin mRNA、Survivin-△EX3 mRNA的阳性表达与胃肠道肿瘤关系密切;胃肠道肿瘤患者外周血Survivin mRNA、Survivin-△EX3 mRNA的表达及肿瘤分化程度、淋巴结转移和临床病理分期有一定关系。

雷帕霉素对低氧下人HL-60细胞增殖和凋亡的影响

本研究拟通过小分子化合物氯化钴(CoCl_2)模拟的低氧环境,探讨雷帕霉素(RPM)对该低氧下人急性髓细胞白血病HL-60细胞的生物学行为的影响。低氧模拟组、低氧雷帕霉素处理组、常氧雷帕霉素处理组HL-60细胞分别采用CoCl_2、CoCl_2/RPM、RPM进行处理,对照组为常氧下常规培养的HL_60细胞,处理及培养24 h、48 h、72 h后收集细胞,采用倒置相差显微镜观察细胞生长状况,常规瑞氏染色后光学显微镜下观察细胞形态;MTT比色法检测各组细胞的活性和增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果表明,与对照组细胞形态规则,胞核呈圆形或椭圆形相比,低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组细胞密度降低,生长明显受抑,细胞胞核呈不规则形或杆状,染色质粗糙,伴扭曲折叠等变化。各组间不同时间细胞增殖抑制率差异显著(P<0.05),低氧模拟组和低氧雷帕霉素处理组增殖抑制率随着处理时间延长而增大,且低氧雷帕霉素处理组的增殖抑制率大于低氧模拟组。与常氧下的对照组及雷帕霉素处理组比较,低氧的模拟组和雷帕霉素处理组诱导细胞发生较明显的凋亡,且后期72 h低氧雷帕霉素处理组凋亡率显著高于模拟低氧处理组。以上结果表明,模拟低氧环境下,HL_60细胞生长明显受抑制,且诱导细胞凋亡;雷帕霉素可增强对低氧对细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。

一种新的全酶法测定1,5-脱水葡萄糖醇

目的建立一种测定血清中1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)的方法,辅助诊断糖尿病.方法经葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)偶联系统使血清中葡萄糖彻底转化为不与呋喃糖氧化酶(PROD)反应的6-磷酸葡萄糖酸内酯,以PROD氧化1,5-AG,生成1,5-脱水果糖和H2O2,后者用Trinders反应进行比色测定.结果该方法在550 μmol/L以内线性良好.高值(455.5 μmol/L)、中值(215.8 μmol/L)和低值(15.1 μmol/L)批内变异系数(CV)分别为0.61%、0.84%和1.70%,批间CV分别为1.12%、2.00%和2.70%.平均回收率为101.6%.本法与微柱法相关性良好(r=0.999 8).用本法对100名健康者测定1,5-AG水平为(161.9±40.2) μmol/L,呈正态分布.参考值范围((-x)±1.96s)为83.1～240.7 μmol/L,无性别、年龄差异.结论该法简便、快速、灵敏、准确和稳定,可用于糖尿病的及时诊断与监控,适合于各类实验室常规应用.

肝细胞癌中耐药基因的表达及意义

目的通过对肝细胞癌(HCC)中3种耐药基因MDR1、MRP、GST-π的检测,探讨肝细胞癌中耐药基因的表达特点及临床意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测3种耐药基因在51例肝细胞癌组织和10例正常肝组织中的表达。结果 (1)MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中的表达分别为0.55±0.27、0.62±0.29、0.64±0.31,正常肝组织中的表达分别为0.23±0.10、0.25±0.07、0.26±0.12,耐药基因在肝细胞癌中的表达高于正常肝组织,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)耐药基因的表达与肿瘤Edmondson分级呈正相关(P<0.05);(3)MRP与GST-π的表达相关。结论肝细胞癌中存在有原发性耐药的现象,且多种机制并存。MDR1、MRP、GST-π在肝细胞癌中有较高的表达。联合检测对制定科学有效的治疗方案有一定价值。

散发性乳腺癌中BRCAl基因甲基化状况及其与蛋白表达的关系

目的探讨散发性乳腺癌中BRCA l基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中BRCA l基因异常的表遗传学作用。方法用甲基特异性聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学(SP)法研究乳腺癌组织、癌旁正常组织中BRCA l基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况。结果在52例散发性乳腺癌中,BRCA l甲基化率为29%,BRCA l蛋白表达下降率为33%;15例BRCA l发生甲基化的癌组织标本中BRCA l的表达下降率为87%,而37例BRCA l未发生甲基化的癌组织中BRCA l蛋白表达下降率11%。在肿瘤分级中,T3分级患者的肿瘤组织中BRCA l甲基化率(45%)及表达下降率(60%)均分别高于T1+T2分级患者肿瘤组织的BRCA l甲基化率(19%)和表达下降率(16%);有淋巴结转移患者的肿瘤组织中BRCA l甲基化率(46%)及蛋白表达下降率(50%)均分别高于无淋巴结转移的甲基化率(14%)和表达下降率(18%)。结论BRCA l基因表遗传学改变是其蛋白表达下降乃至失活的重要原因,并且与散发性乳腺癌的恶性进程和淋巴结转移密切相关。

宫颈癌中耐药基因的表达及其临床意义

目的探讨多药耐药基因LRP、GST-π在宫颈癌中的表达特点及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测LRP、GST-π基因在10例正常组织和52例宫颈癌组织中的mRNA表达情况。结果在宫颈癌组织中LRP、GST-π的阳性率表达分别为67.3%和59.6%。10例正常组织中LRP不表达,GST-π表达1例。宫颈癌组织中LRP、GST-π的表达高于正常组织(P<0.05)。两者的表达均与患者的淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期无关(P>0.05)。LRP、GST-π之间的表达无相关性。结论 LRP、GST-π在宫颈癌中较高的阳性率表达可能共同参与宫颈癌对顺铂的固有耐药机制,为协助临床选择化疗方案可能具有一定的指导意义。