省属医学院校医学分子生物学实验课教学改革初探

医学分子生物学课程涉及的很多内容都比较抽象,实验课正是把抽象的东西形象化,帮助医学生理解这些晦涩难明的原理与理论,锻炼学生自己的动手能力,提高学生的学习兴趣.通过对实验课教学内容,实验教材及教学方式等的改革,获得了很好的教学效果.对提高省属医学高校本科应用型人才的培养质量,有着非常重要的意义.

ERK信号通路通过CXCR-4作用于乳腺癌细胞的侵袭转移研究

目的:ERK信号通路与肿瘤的侵袭转移密切相关,本研究拟阻断ERK通路,检测乳腺癌细胞CXCR-4表达变化,分析ERK信号通路对乳腺癌细胞CXCR-4表达的影响,探讨乳腺癌转移的分子机制。方法:以培养的人乳腺癌MDA-MB-435细胞为研究对象,加入ERK特异性阻断剂PD98059为实验组,加入等量生理盐水为对照组,作用于人乳腺癌MDA-MB-435细胞24 h后,采用Western blotting法检测ERK通路重要因子ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达;采用流式细胞术检测细胞表面CXCR-4表达;采用Transwell侵袭实验观察空白对照组、CXCR-4配体SDF-1α组、ERK通路阻断组和SDF-1α+ERK阻断组细胞的侵袭转移情况。结果 :ERK通路被有效阻断后,CXCR-4表达量明显下调;在趋化因子受体CXCR-4的配体SDF-1α的作用下,细胞侵袭能力提高,而在ERK通路阻断后,细胞侵袭能力明显降低且SDF-1α不能逆转这种降低效应反而具有协同作用。结论:在人乳腺癌MDA-MB-435细胞中,ERK信号通路可能通过上调CXCR-4的表达参与乳腺癌细胞的侵袭和转移。

TDZD-8对乙醛激活肝星状细胞中Wnt通路的作用研究

目的检测乙醛激活肝星状细胞中GSK-3β抑制剂TDZD-8对Wnt信号通路的作用。方法体外培养大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),经乙醛刺激细胞活化后,分空白对照组和阻断组,阻断组加入TDZD-8(终浓度20μm/L)作用12h,MTT法检测细胞增殖;提取蛋白Western blotting检测Wnt途径下游产物β-catenin的表达状况及磷酸化水平变化。结果 MTT检测结果发现TDZD-8阻断GSK-3β之后乙醛刺激的肝星状细胞增殖高于对照组(P<0.05);Western blotting检测结果显示使用TDZD-8激活Wnt途径后,Wnt途径下游产物β-catenin表达无明显变化,但p-β-catenin水平下降。结论在乙醛激活的肝星状细胞中,TDZD-8能有效激活Wnt信号通路从而刺激肝星状细胞转分化为肌成纤维细胞。

stathmin蛋白促进人SMMC-7721肝癌细胞增殖侵袭能力

目的构建微管解离蛋白stathmin过表达的人SMMC-7721肝癌细胞株,并探讨stathmin过表达对肝癌细胞增殖侵袭的影响。方法采用脂质体将Flag-pcDNA3.1-stathmin重组质粒和Flag-pcDNA3.1空质粒分别转染人SMMC-7221肝癌细胞,抗生素加压筛选,构建稳定表达stathmin的SMMC-7721细胞(实验组),以稳转空质粒的细胞为对照组,Western blot对建系细胞进行鉴定。采用CCK-8和软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡和细胞周期;体外细胞运动侵袭实验(Transwell)测定细胞的运动、侵袭能力。结果实验组中stathmin的表达0.76±0.12较对照组0.16±0.05明显增加(P<0.05),成功构建了过表达stathmin的人SMMC-7721肝癌细胞株;CCK-8和软琼脂克隆形成实验显示,实验组的细胞增殖较对照组明显增加(A4500.60±0.05 vs.0.29±0.03,P<0.01);实验组细胞凋亡降低[(5.80±0.33)%vs.(11.57±1.09)%,P<0.05],细胞周期阻滞在G2/M期;Transwell实验结果证实,与对照组比较,实验组细胞运动和侵袭能力均显著加强[运动实验透膜细胞数:(54.03±7.21)个vs.(130.45±14.13)个;侵袭实验透膜细胞数:(17.75±2.52)个vs.(57.76±8.50)个],差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 stathmin的过表达能促进人SMMC-7721肝癌细胞的增殖侵袭能力。

Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株的增殖及转分化的影响

目的观察Notch通路对乙醛激活大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法 HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理,加入Notch途径特异性阻断剂DAPT和TGF-β/ALK5途径特异性阻断剂SB-431542,分为空白组、单阻断组及双阻断组;MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维黏连素(FN)的表达;RT-PCR检测Notch途径节点分子RBP-JK、Hes1及效应蛋白Smad3表达量;Western印迹检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果 MTT检测发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激后TIMP I和FN的表达明显上调(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05);RT-PCR检测Hes1乙醛刺激后上调明显(P<0.05),阻断组RBP-JK、Hes1及Smad3明显下调(P<0.05),双阻断组Hes1及Smad3下调更明显(P<0.05);Western印迹检测结果显示乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05),阻断组明显下调(P<0.05),双阻断组下调更明显(P<0.05)。结论 Notch通路明显影响乙醛对肝星状细胞的增殖及转分化为肌成纤维细胞。

检验专业医学分子生物学教学改革与实践

为适应新形式下对检验专业本科生素质教育的需要,全面提高教学质量,努力培养高素质的专业人才,对检验专业的医学分子生物学必修课进行了改革探索。通过结合学科和专业特点,在教学内容、教学方法和开放实验教学等方面进行了合理调整和优化改革,研究结果显示,改革后的课程教学体系有利于学生对理论知识的理解和应用,并能提高学生的自主学习能力、动手能力、创新能力和科学思维能力。

“医学分子生物学”教学中PBL模式的应用

目的:探索PBL教学模式在医学分子生物学中的应用效果。方法:教学结束通过闭卷考试和问卷调查的方法评估PBL模式的效果。结果:闭卷考试结果显示PBL组学生得分明显提高,尤其是注重应用的题型。教师和学生的自评均表明PBL教学能促进学生更好地掌握知识点、提高主观能动性、团队合作等。结论:PBL教学在医学分子生物学教学中具有重要作用,可广泛推广。

乙醛对大鼠肝星状细胞株HSC-T6激活、增殖及转分化的影响

目的:观察乙醛对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)激活、增殖并转分化为肌成纤维细胞的影响。方法:HSC-T6细胞常规培养及乙醛处理;VG染色法形态学及MTT法检测细胞增殖;ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白(TIMPⅠ)、纤维粘连素(FN)的表达;Western blotting检测细胞内效应蛋白α-SMA的表达。结果:VG染色乙醛刺激明显促进HSC贴壁及重叠、明显促进HSC增殖和显著增加胶原纤维蛋白的表达;MTT检测结果发现乙醛刺激明显增强HSC活性(P<0.05);ELISA结果表明乙醛刺激组较对照组TIMPⅠ和FN的表达明显上调(P<0.05);Western blotting检测结果显示,乙醛刺激明显促进α-SMA表达(P<0.05)。结论:乙醛刺激可明显激活HSC-T6细胞株,并促进其增殖及转分化为肌成纤维细胞。

医学分子生物学考试模式改革

考试是促使学生对课程全面系统再学习的一个好方法,是检查学生掌握本学科知识的重要手段,也是教学过程的重要组成部分。分子生物学是医学院校各专业一门重要的基础课程。通过多元化考试模式的不断完善,有助于教师及时发现判定教学工作的成效,采取有针对性的改进措施改进教学方法,保证教学质量。

不同浓度Van Gieson染色液对细胞染色的研究

目的不同浓度VG氏染色液对细胞培养后的染色效果的研究,寻求理想的配置浓度。方法大鼠肝星状细胞(HSC-T6)培养,细胞爬片,经乙醛刺激细胞活化后,通过HE、VG氏染色,观察胶原纤维和肌源性成分的染色效果。结果 VG染液:A液(1%酸性品红水溶液)、B液(苦味酸饱和水溶液),临用前分别按A:B=2:1、1:1、1:2三种配方中肌性纤维和胶原纤维都染成不同程度的品红色。A:B=1:9配方中肌性纤维染成黄色,胶原纤维染成红色。A:B=5:95、1:99配方中两者都染成黄色。结论 A:B=1:9此种染色两种成分明显,效果最佳,其余比例染色效果呈单一色,无鉴别作用。

PBL教学模式下超微结构病理学考核方法初探

目的:探讨PBL教学模式下超微结构病理学考核方法的改革。方法:以泸州医学院2011级本科检验专业学生为研究对象,分为PBL(Problem-based learning)教学组和SBL(Subject-based learning)教学组。从问卷调查、综述撰写、期末传统的考试成绩三方面综合评价两种教学效果与质量。结果:问卷调查结果显示,PBL教学增加学习兴趣、学习积极性、课堂气氛活跃度等,同时也增加了学习压力;综述考核显示,PBL教学组优于SBL教学组。而期末考试成绩两组无明显区别。结论:若需尽可能全面评估PBL教学模式的教学效果和质量,势必进行考核方法改革。

稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点突变的肝癌细胞株的建立

目的:建立稳定表达stathmin Ser25磷酸化位点点突变(stathmin S25A)的肝癌细胞株。方法:采用PCR定点突变的方法构建stathmin S25A的重组质粒,并用酶切和测序技术鉴定突变结果;采用脂质体转染的方法,筛选建立stathmin野生型(wt)和突变型(S25A)的肝癌细胞HCCLM6,用Western blotting进行鉴定。结果:定点突变构建stathmin S25A的重组质粒,测序证实stathmin 25位丝氨酸突变为丙氨酸。将stathmin wt和S25A转染HCCLM6,筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Westernblotting检测发现stathmin pS25在stathmin S25A细胞中的表达较stathmin wt和对照组细胞明显下降(P<0.05)。结论:建立了稳定表达stathmin S25A的肝癌细胞株,为研究stathmin位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供实验模型。

CCK-8对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤保护相关蛋白质的实验分析

目的探讨八肽胆囊收缩素(CCK-8)对糖尿病大鼠胰岛细胞损伤的保护作用。方法检测CCK-8对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病大鼠模型的刺激前后血糖和血清胰岛素的水平,采用双向电泳并结合生物信息学方法,观察刺激前后胰腺组织蛋白质表达的差异。结果初步确定了CCK-8刺激引起胰岛细胞JIP1、RBBP7、PP2AB、PDX1、BCLX5种蛋白质的表达明显增强,这些蛋白在促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、刺激胰岛素基因表达等方面发挥重要作用。结论CCK-8可能通过刺激特异蛋白质的表达,对糖尿病大鼠受损胰岛细胞起到一定的保护和恢复作用。

原癌基因蛋白18第38位丝氨酸点突变肝癌细胞系的建立

目的构建人原癌基因蛋白18(oncoproteins 18,Op18)丝氨酸(serine,Ser)38磷酸化位点点突变(S38A)的肝癌细胞系。方法通过重叠延伸聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法定点诱变Op18 S38A,测序鉴定突变结果。采用脂质体转染和抗生素筛选,建立Op18野生型(wild types,wt)和Op18S38A的肝癌细胞株HCCLM6;并用Western blot进行鉴定。结果定点突变构建Op18 S38A的重组质粒经测序证实Op18第38位核苷酸突变由丝氨酸变为丙氨酸。将Op18 wt和Op18 S38A转染肝癌细胞株HCCLM6,抗生素压力筛选建立稳定表达的肝癌细胞株,Western blot结果显示Op18第38位丝氨酸磷酸化(pS38)在Op18 S38A细胞中的表达较Op18 wt和对照组细胞明显下降(P<0.05)。结论建立了稳定表达Op18 S38A的肝癌细胞株,为研究Op18位点磷酸化在肝癌发病中的分子机制提供细胞模型。

从分子生物学角度看高校教学秘书工作

将分子生物学的学科特征与高校教学秘书岗位相结合,从特征、筹备、方法、思路、素质等方面定向阐述分子生物学与教学管理工作之间的共通关系,为教学秘书提供简单易解、科学高效的工作策略。

医学检验专业医学分子生物学理论教学情况调查与分析

就医学检验专业医学分子生物学理论教学情况进行了问卷调查,结合调查结果,总结教学效果并分析存在的问题,提出进一步提高教学质量的方法与对策。

乙醇诱导肝星状细胞凋亡模型的建立

目的:探讨乙醇诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡模型的作用及其与凋亡相关基因caspase-3、p53、bax和bcl-2表达的关系。方法:用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、60和80 m L/L)的乙醇对HSC的杀伤作用。采用40 mL/L乙醇作用6 h诱导HSC细胞凋亡。通过流式细胞术分析乙醇诱导对凋亡的影响,并用实时定量PCR检测乙醇诱导对凋亡相关基因caspase-3、p53、bax和bcl-2表达的影响。结果:随着乙醇浓度的增加,对HSC的杀伤能力逐渐增加。40 m L/L乙醇使HSC发生显著的细胞凋亡变化。流式细胞术检测发现乙醇诱导可使HSC早期+晚期凋亡明显增加(8.76%±0.43%vs 11.51%±0.54%),差异具有统计学意义(t=2.11,P<0.05);促凋亡基因caspas-3、bax和p53的mRNA表达水平上调,抑制凋亡基因bcl-2的mRNA表达水平下调。结论 :低浓度乙醇可诱导HSC凋亡增加,其凋亡发生与凋亡相关基因caspase-3、p53、bax和bcl-2表达改变相关。

交互式多媒体教学模式在生物化学与分子生物学实验教学中的现状与应用

交互式多媒体教学模式是在交互理论、三元交互法和互动假说三大理论基础上,结合多媒体这一计算机网络平台技术发展而来,并在21世纪初在全球逐步推广。生物化学与分子生物学实验作为医学院校的一门重要的基础实验操作课程,规范正确的基本操作和统一标准的实验步骤都非常关键。该文分析了医学院校生物化学与分子生物学实验课程的开设现状,进一步对照传统教学模式,分析了交互式多媒体教学模式在生物化学与分子生物学实验课程的现状和应用,最后提出了完善这种崭新模式的相应策略。

红景天苷对人乳腺癌MDA-MB-435细胞功能的作用

目的:通过检测红景天苷对人乳腺癌MDA-MB-435细胞的增殖、凋亡、周期及运动侵袭的影响,探讨红景天苷抗人乳腺癌的作用。方法:体外培养MDA-MB-435细胞,CCK-8法筛查红景天苷对细胞的半数有效抑制浓度(IC50)。以不加红景天苷组为对照组,以IC50浓度的红景天苷组为实验组,在光镜下观察其形态改变,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Transwell小室模型观察细胞运动和侵袭能力的改变。结果:红景天苷对人乳腺癌MDA-MB-435细胞的IC50为4 mg/m L;光镜下见红景天苷组细胞呈现坏死和凋亡形态;CCK-8法显示红景天苷组在作用24 h、48 h和72 h三个时间点均能抑制细胞的生长增殖,抑制率均高于对照组,且具有显著的时间-效应依赖性(P<0.05);流式细胞术显示红景天苷组早期凋亡率为(3.31±0.21)%、晚期凋亡和坏死率为(28.80±2.15)%,高于对照组(1.26±0.13)%和(5.56±0.78)%,差异均具有统计学意义(P<0.05);细胞周期检测发现红景天苷组细胞较对照组在G0/G1期的比例增加,停滞在S期的比例减少,G2/M期的比例减少;运动实验结果显示,红景天苷作用72 h后,红景天苷组每个视野跨膜细胞数为(39.60±3.37)个,远低于对照组(142.20±12.99)个,差异具有统计学意义(P<0.01);侵袭实验结果示红景天苷组每个视野跨膜细胞数为(4.20±1.55)个,也低于对照组(13.00±3.09)个,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:4 mg/m L红景天苷作用人乳腺癌MDA-MB-435细胞,可抑制生长增殖、诱导细胞凋亡和坏死发生、阻滞细胞周期、有效抑制肿瘤细胞的运动和侵袭。