辣椒CaBBX2基因的克隆与表达分析

为探究BBX转录因子在辣椒抵御疫霉菌侵染过程中的功能,本研究以辣椒品种007EA为材料,对辣椒BBX转录因子CaBBX2基因进行克隆和表达分析,并对其编码蛋白进行亚细胞定位和生物信息学分析。聚合酶链式反应(PCR)扩增和测序结果表明,CaBBX2的编码区序列长为639 bp,编码212个氨基酸。蛋白理化分析结果显示,CaBBX2蛋白分子量为23.5 kDa,理论等电点(pI)值为6.17,总平均亲水系数为-0.559,表明CaBBX2为亲水性蛋白。蛋白质结构预测及蛋白序列比对结果显示,CaBBX2含有2个B-box保守结构域。进化树分析结果显示,CaBBX2蛋白属于Ⅳ亚组的BBX蛋白,与拟南芥AtBBX18和AtBBX19蛋白亲缘关系最近。启动子分析结果显示,CaBBX2启动子序列中含有与胁迫、激素和光响应有关的顺式作用元件。亚细胞定位结果显示,CaBBX2同时定位于细胞质和细胞核。组织特异性表达发现,CaBBX2基因在辣椒不同组织中均有表达,其中在叶中的表达量最高,在果皮中的表达量最低。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CaBBX2在疫霉菌接种及茉莉酸甲酯(MeJA)处理后表达量的变化,发现接种疫病后CaBBX2的表达量明显上升,MeJA处理后CaBBX2表达量呈现明显下降趋势。上述结果表明CaBBX2可能参与激素调控响应辣椒疫病胁迫的应答过程,可为辣椒抗病分子育种提供重要的候选基因。