沉默CDKL1基因通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性蛋白样激酶1(CDKL1)基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和转移的影响,并阐明其可能的作用机制。方法:选择乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用小干扰RNA技术(siRNA)沉默CDKL1基因表达。采用1μmol·L^(-1)磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)抑制剂BpV或10μmol·L^(-1)蛋白激酶B(Akt)激动剂SC79进行干预。取对数生长期MCF-7细胞,分为空白对照组(MCF-7细胞不作任何处理)、转染对照(siRNA-NC)组(MCF-7细胞转染siRNA-NC质粒)、siRNA-CDKL1组(MCF-7细胞转染siRNA-CDKL1质粒)、siRNA-CDKL1+PTEN抑制剂BpV(siRNA-CDKL1+BpV)组(转染siRNA-CDKL1的MCF-7细胞,再采用1μmol·L^(-1)PTEN抑制剂BpV处理2h)和siRNA-CDKL1+Akt激动剂SC79(siRNA-CDKL1+SC79)组(转染siRNA CDKL1的MCF-7细胞,再采用10μmol·L^(-1)Akt激动剂SC79处理2 h)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性,EdU法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中EdU阳性细胞率,细胞划痕愈合实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组乳腺癌MCF-7细胞的迁移和侵袭细胞数,Western blotting法检测各组乳腺癌MCF-7细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、PTEN、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白表达水平。结果:与siRNANC组比较,siRNA-CDKL1组乳腺癌MCF-7细胞中CDKL1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.01),EdU阳性细胞率降低(P<0.01),乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭细胞数降低(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.01),PTEN蛋白表达水平升高(P<0.01)。与siRNA-CDKL1组比较,siRNA-CDKL1+BpV组和siRNACDKL1+SC79组乳腺癌MCF-7细胞增殖活性升高(P<0.01),EdU阳性细胞率升高(P<0.01),迁移和侵袭细胞数增加(P<0.01),细胞中MMP-2、MMP-9、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平升高(P<0.01),PTEN蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:CDKL1基因的沉默可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和转移能力,其作用机制可能与调控PTEN/Akt/mTOR信号通路有关。

PTEN靶点检测在高miR-182-5p表达乳腺癌中的临床应用

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)靶点检测在高miR-182-5p表达乳腺癌患者中的临床应用。方法:前瞻性选取齐齐哈尔医学院附属第三医院接受手术治疗的106例乳腺癌患者为病例组,并纳入同期进行健康体检的97例健康人群为对照组。所有入组人员均接受PTEN靶点检测以及miR-182-5p检测,分析两组一般资料、PTEN以及miR-182-5p的表达水平,并对病例组患者进行为期1年的随访,统计两组患者的生存率。根据miR-182-5p表达水平分为低表达组和高表达组,分析两组患者一般资料以及PTEN水平。结果:病例组miR-182-5p表达水平高于对照组,PTEN水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),高表达组病理分期较低表达组差,PTEN较低表达组低;对病例组患者进行为期1年的随访,共计纳入86例患者。其中miR-182-5p高表达组患者生存率(65.22%)低于低表达组(83.78%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-182-5p和PTEN在乳腺癌患者中呈异常表达,PTEN可以对miR-182-5p的表达进行抑制。