大豆异黄酮通过抑制Wnt/Ca2+信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注引起的钙超载

目的 探讨大豆异黄酮(SI)减轻脑缺血再灌注(I/R)引起钙超载的作用机制。方法 将48只SD大鼠采用随机数法分为4组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(I/R组)、病毒空载组(NC组)、Frizzled-2敲低组(Knock down组),12只/组。采用线栓法堵塞大脑中动脉2 h,再灌注24 h构建I/R模型。采用Western blot验证病毒敲低效率并检测Wnt/Ca2+信号通路相关蛋白Wnt5a、Frizzled-2和P-CaMKⅡ的变化。采用钙含量显色法检测各组缺血半暗带(IP)区钙离子浓度变化,HE检测各组IP区组织结构变化。另将72只SD大鼠采用随机数法分为3组:Sham组、I/R组、大豆异黄酮预处理组(SI组),24只/组。采用多普勒血流仪检测局部脑血流变化,TTC染色检测脑梗死体积,HE和尼氏染色检测IP区组织变化、免疫荧光检测ROS、Ca2+和细胞凋亡水平、流式检测细胞钙离子浓度,试剂盒检测血清MDA和SOD水平,Western blotting和免疫组化检测IP区Wnt5a、Frizzled-2和P-CaMKⅡ蛋白表达。结果 与I/R组比较,Knock down组钙离子浓度(P<0.001)、Wnt5a(P<0.05)、Frizzled-2(P<0.05)和P-CaMKⅡ(P<0.001)表达水平均降低;与I/R组比较,SI组钙离子浓度(P<0.05)、ROS和MDA水平(P<0.001)、细胞凋亡程度(P<0.001)、脑梗死体积(P<0.001)、Wnt5a、Frizzled-2和P-CaMKⅡ表达水平(P<0.05)均降低,SOD水平升高(P<0.001)。结论大豆异黄酮可能通过抑制Wnt/Ca2+信号通路减轻大鼠脑缺血再灌注引起的钙超载。

氧糖剥夺再灌注对神经元Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)通路的影响

目的:探讨氧糖剥夺再灌注(OGD/Rep)后神经元细胞内Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)通路的变化。方法:采用OGD/Rep模型构建神经元细胞局部缺血/再灌注损伤,分正常组、再灌注(0、3、6、9、12、24 h)组。免疫荧光鉴定皮层神经元细胞,CCK-8法确定神经元细胞OGD时间,Western blotting检测非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路中Wnt5a、FZD2、IP3-R和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ蛋白的变化,免疫荧光和酶标仪检测细胞内Ca^(2+)和活性氧(ROS)的含量。结果:MAP-2免疫荧光鉴定原代皮层神经元细胞纯度较高。与正常组比较,神经元细胞OGD 3 h后细胞存活率为55.46%;与正常组比较,OGD/Rep后非经典Wnt/Ca^(2+)信号通路相关蛋白Wnt5a(3、6、9、12、24 h)、FZD2(3、6、9 h)、IP3-R(6、9、12、24 h)和p-CaMKⅡ/CaMKⅡ(6 h)的相对表达量上调(P<0.05~P<0.01);与正常组比较,OGD/Rep后神经细胞内Ca^(2+)和ROS的表达量均升高(P<0.01)。结论:神经元细胞OGD/Rep能激活Wnt5a/FZD2/Ca^(2+)信号通路。

大豆异黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探究大豆异黄酮(SI)对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后的保护作用及机制。方法30只生理状况相同的雄性SD大鼠按照随机数表法分为假手术组(Sham组)、模型组(CIRI组)、大豆异黄酮组(SI组),每组各10只组。除假手术组外其他组采用大鼠大脑中动脉栓塞法(MCAO)建立大鼠脑CIRI模型,SI组造模前进行SI灌胃(120 mg/kg,1次/d,连续21 d)。再灌注24 h后进行神经学功能评分、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、HE染色、微板法检测钙离子(Ca^(2+))浓度,检测超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平。结果造模第二天,CIRI组和Sham组相比大鼠神经功能学评分、脑梗死率、脑组织Ca^(2+)浓度和MDA均有明显升高,SOD活力降低,差异有统计学意义(P<0.05)。SI组与CIRI组相比大鼠神经功能学评分、大鼠脑梗死率、Ca^(2+)浓度、MDA均有明显降低,SOD活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HE结果显示,Sham组未见脑组织缺血改变,大鼠脑神经细胞排列正常,形态完整,核仁和胞质结构清晰。CIRI组细胞间隙增大组织疏松,排列紊乱,细胞核发生明显固缩,深染。SI组同CIRI组相比,细胞核发生固缩的细胞明显减少,细胞间隙减小。结论SI可能通过抑制氧化应激损伤和降低Ca^(2+)超载对大鼠脑CIRI起保护作用。