河南省猪瘟流行情况调查

[目的]为了弄清河南省猪瘟的流行病学规律,研究猪瘟强毒株感染情况,查实规模化猪场猪瘟免疫情况。[方法]使用ELISA方法和革兰氏染色方法对301份病猪的样本进行猪瘟强毒抗原及细菌感染情况的检测,分析猪瘟在河南省猪群的感染、流行范围情况及同细菌病的混合感染情况;对猪瘟阳性猪场采取综合防治措施并对采取措施后没有效果的猪场进行了蓝耳病和圆环病毒病的检测,确定混合感染情况。[结果]猪瘟在河南省流行广泛;猪瘟病毒的平均检出率为26.25%;细菌感染占猪瘟病毒总阳性样本的25.31%;蓝耳病和圆环病毒病与猪瘟有不同程度的混合感染;综合性防治措施实施后对大部分猪厂效果明显;但对混合感染的猪群效果不好。[结论]猪瘟与细菌、蓝耳病、圆环病毒病等混合感染是造成猪瘟难以根治的主要原因;综合防治措施的实施是净化猪瘟的重要手段。

鸡大肠杆菌计数方法研究

寻求一种简单、快捷的大肠杆菌计数方法。采用分光光度计测定经鉴定的大肠杆菌悬液的OD值,同时通过直接涂片计数法计算大肠杆菌数。细菌悬液经适当浓度稀释后OD值在0.1-1.0范围内,细菌悬液的OD值与活菌数之间成直线关系。利用OD值测定大肠杆菌数目是一种简单、快捷的细菌计数方法。

基于Taq Man探针的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的研究

通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF7为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线建立了PRRSV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL;用该方法对6份不同的组织样品进行重复性检测,结果显示具有良好的重复性和重现性。对阳性组织病料的检测表明该方法与常规RT-PCR阳性符合率为100%,但检测灵敏度高出常规RT-PCR 100倍。

多重PCR检测CSFV和PRRSV与PCV2

根据GenBank上猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的已发表序列,分别设计并合成了3对特异性扩增引物,建立CSFV、PRRSV和PCV2单项PCR检测方法,分别扩增出预期的466 bp、202 bp和706 bp片段。在优化单项PCR反应条件基础上,建立了CSFV-PRRSV-PCV2多重PCR检测方法,为预防和控制上述三种病毒性传染病提供了一种快速、敏感、特异的检测方法。

鸭病毒性肝炎间接血凝诊断抗原的制备

【研究目的】建立一种便于检测鸭病毒性肝炎抗体的方法。【研究方法】将纯化的鸭病毒性肝炎I型病毒(DHV-I)致敏双醛化红细胞,制备检测DHV抗体的间接血凝诊断抗原。【研究结果】使用该抗原对9种常见的禽传染病阳性血清、15只随机抽样的非免疫鸭血清进行检测,抗体均为阴性;检测被鸭病毒性肝炎I型病毒阻断后的阳性血清,抗体为阴性;用不同批次的诊断抗原检测同一血清样品结果显示一致;敏感性是琼脂扩散试验的32～64倍;对15只随机抽样的免疫鸭进行检测,阳性率达93%。【结论】该方法敏感性较高、特异性强、重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及鸭病毒性肝炎的流行病学调查。

鸡大肠杆菌自家苗制备过程中细菌计数方法研究

制备大肠杆菌自家苗时,为了达到理想的免疫效果,必须进行大肠杆菌菌数的测定。大肠杆菌悬浮液的吸光度值与其菌数间呈正相关。只需测定细菌悬液的吸光度值,对照标准曲线便可查出对应的细菌数目。该方法与传统的细菌计数方法相比具有简单、快捷的特点。

河南地区猪圆环病毒Ⅱ型抗体血清学调查

应用酶联免疫吸附试验(ELISA),测定了河南省1886份血清样本,对不同地区、年龄和品种猪的血清学数据进行了综合分析。结果为36个猪场中34个PCV-2血清抗体呈阳性；对不同年龄的猪群,1年龄PCV-2血清抗体阳性率为52.75％,2年龄为45.84％,3年龄39.03％,4年龄为1.67％,5年龄为0；土杂猪PCV-2血清抗体阳性率52.54％,与长白猪51.31％差别不大,但明显高于大约克和杜洛克；以上结果表明PCV-2在猪群中的感染非常普遍,不同年龄及不同品种猪对PCV-2的易感性不同。PCV-2的感染可明显降低猪群对疫苗的免疫应答。

小白鼠乳腺上皮细胞的体外培养

本试验对小白鼠乳腺上皮细胞的原代培养方法进行了探索。胶原酶消化法和组织块种植法均可用于培养小白鼠原代乳腺细胞。胶原酶消化法容易得到均匀的乳腺细胞 ,且上皮细胞所占比例也比较高。组织块种植法不容易丢失、损伤上皮细胞 ,然而上皮细胞长出较晚 ,且占比例较低。结果表明 ,可结合组织块转移。

副猪嗜血杆菌间接血凝诊断液的研究

将分离纯化的副猪嗜血杆菌5型超声裂解后,和致敏双醛处理的健康绵羊红细胞,制成副猪嗜血杆菌5型间接血凝诊断液,用于检测血清中的抗副猪嗜血杆菌抗体的效价。实验表明该法操作简便,特异性强,不与其他传染病阳性血清发生交叉凝集。

《动物细胞培养技术》课程实践教学探讨

《动物细胞培养技术》课程的实验教学目的在于使学生熟悉和掌握有关动物细胞培养的基本技术，并为其今后的就业创造条件。本文结合多年的教学实践经验提出了几点教学建议。

猪圆环病毒II型ORF2基因克隆及其在E.coli中的融合表达

[目的]研究猪圆环病毒2型ORF2的基因克隆及其在E.coli中的融合表达。[方法]参照猪圆环病毒2型ORF2序列设计引物,应用PCR技术扩增出猪Ⅱ型圆环病毒河南株ORF2的部分基因。将其同IL-2的全基因一起连接PBV220载体并转化到E.coliJM109。阳性菌用温度诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析。[结果]结果表明,ORF2基因同IL-2的全基因在E.coli中得到了高效表达,表达的融合蛋白分子量为44 kD,可以被猪PCV2阳性血清特异性识别。[结论]该研究为PCV2的检测和疫苗的研制以及综合防制奠定了基础。

生物药品分装车间内各种灭菌措施效果观察

为保证生物药品分装车间的无菌环境,特对车间内常用的3种灭菌措施的灭菌效果进行检测评估。采用平板暴露法采样,检测经过不同时间的甲醛消毒和紫外线灭菌的效果,以及开启层流罩后不同时间内层流罩下的尘埃粒子数。结果在严格按照操作要求的前提下,现行分装间灭菌措施可以达到灭菌的效果。

鸭肝炎病毒河南株的免疫保护试验研究

为探讨河南省部分地区鸭肝炎病免疫失败的原因,对分离到的鸭肝炎野毒株(LY株)在雏鸭、鸭胚及鸡胚上进行免疫保护试验、交叉中和试验。结果表明DH-Ⅰ型血清对该LY株的免疫保护指数较低,明显低于LY株血清的保护指数,表明该疫区部分鸭肝炎野毒株的抗原性已发生改变;交叉中和试验对该结果进行了进一步的验证;另采用LY株和DHV-I病毒疫苗联合制备鸭肝炎高免蛋黄抗体用于临床免疫防治可使临床保护率达到90%以上。

用链球菌自制荧光抗体检测猪链球菌的研究

为达到利用荧光抗体建立一种诊断猪链球菌病的有效方法的目的。先提取兔抗猪链球菌IgG ,用FITC标记并进一步用G5 0过滤 ,制备出兔抗猪链球菌荧光抗体。同时利用吸收试验、特异性抑制试验对自制的荧光抗体进行了检验。结果表明利用自制荧光抗体进行链球菌病的诊断可在 2～ 3h内对链球菌作出诊断 ,比直接镜检更具有特异性和敏感性。试验中发现人工感染小白鼠 2 0h后 ,小鼠荧光抗体染色均呈阳性 ,其中以血液及肺脏中荧光强度最强 ;链球菌荧光抗体染色与葡萄球菌有一定的交叉 。

3种细胞对猪繁殖与呼吸综合征病毒的敏感性

为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断及进一步研究提供参考,采用组织半数感染(TCID_(50))法和免疫荧光检测技术(IFA)研究Mac-145、PAM和CRL-2843-CD163细胞对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的敏感性。结果表明:在Mac-145、PAM及CRL-2843-CD163细胞中,Mac-145细胞被HN07-1病毒感染最早,病毒增殖最快,荧光信号最强,TCID_(50)最大;PAM细胞其次;CRL-2843-CD163细胞最低。HN07-1病毒均能在Mac-145、PAM和CRL-2843-CD163细胞中增殖,且其对HN07-1病毒的敏感性依次为Mac-145>PAM>CRL-2843-CD163。

副猪嗜血杆菌间接血凝诊断液的制备

【目的】建立一种便于检测副猪嗜血杆菌抗体的方法。【方法】将分离纯化的副猪嗜血杆菌5型超声裂解后,致敏双醛处理的健康绵羊红细胞,制成副猪嗜血杆菌5型间接血凝诊断液,检测该诊断液的活力及特异性。【结果】该诊断液特异性强,仅与副猪嗜血杆菌5型阳性血清发生凝集反应。活力也比较高,达到1:512以上,可以用其进行副猪嗜血杆菌疫苗免疫后抗体检测。【结论】该间接血凝诊断液成功制备为广大兽医化验人员提供一种简单、快速、经济的检测副猪嗜血杆菌抗体的方法。

鸡痘病原分离鉴定及油乳剂灭活苗研制

从发病鸡病变组织采集病料 ,通过鸡胚接种和细胞培养分离病毒 ,经电镜观察、包涵体检查和理化特性检查证明分离病毒为鸡痘病毒 ;用分离毒株研制出鸡痘油乳剂灭活苗 ,配合鸡痘鹌鹑化弱毒苗使用 ,用于鸡痘的预防 ,经临床应用效果良好。

河南猪群猪瘟的感染及防治研究

【目的】为了找出河南省猪瘟的流行病学规律,研究猪瘟强毒株感染情况,查实规模化猪场猪瘟免疫情况。【方法】使用ELISA方法和革兰氏染色方法对301份病猪的样本进行猪瘟强毒抗原及细菌感染情况的检测,分析了猪瘟在河南省猪群的感染、流行范围情况及同细菌病的混合感染情况;对猪瘟阳性猪场采取综合防治措施并对采取措施后没有效果的猪场进行了蓝耳病和圆环病毒病的检测,确定混合感染情况。【结果】猪瘟在河南省流行广泛;猪瘟病毒的平均检出率为26.25%;细菌感染占猪瘟病毒总阳性样本的25.31%;蓝耳病和圆环病毒病与猪瘟有不同程度的混合感染;综合性防治措施实施后对大部分猪厂效果明显;但对混合感染的猪群效果不好;【结论】猪瘟与细菌、蓝耳病、圆环病毒病等混合感染是造成猪瘟难以根治的主要原因;综合防治措施的实施是净化猪瘟的重要手段。

鸭病毒性肝炎病原分离与鉴定

从郑州地区疑似鸭病毒性肝炎的病例中分离到l株病毒 ,该病毒可使 7日龄健康鸭 10 0 %发病 ,90 %死亡 ,死亡鸭具有鸭病毒性肝炎的典型病变 。