手工克隆生产猪胚胎关键技术的改进研究

手工克隆(handmade cloning,HMC)是在传统克隆技术的基础上发展出的一种体细胞核移植技术,作为纯手工操作技术,每一步骤的操作细节都影响着HMC的效率及重构胚胎发育能力。本试验针对HMC生产克隆猪胚胎的3个关键步骤:透明带消化、手工切割去核与无透明带重构胚的体外培养展开研究。结果显示,猪卵母细胞透明带以3.3 mg/mL链酶蛋白酶适度消化(10~15 s),在切割去核时卵母细胞死亡率显著低于透明带的过度(高于15 s)消化,死亡率分别为(3.22±1.08)%和(31.45±2.10)%;当透明带消化时间不足(少于10 s),不能被切割去核的猪卵母细胞显著升高,不可切割率分别为(18.25±4.22)%和(0.57±0.40)%。另外,"铡刀式"操作更适用于手工切割去核,其操作要点对成功获得无核半卵及其胞质含量非常重要。HMC无透明带重构胚体外培养时,孔深约250μm、孔径约300μm的微孔技术(well of wells,WOWs)有利于克隆胚胎发育。本研究优化了HMC操作的关键步骤,为提高生产克隆猪胚胎效率奠定了基础。

基于Fluent的青海高原燃气锅炉燃烧特性数值研究

青海地处高原,海拔高,氧气含量低,特殊的环境导致锅炉燃烧不充分且资源浪费。选取WNS7.0-1.0/95/70-QT燃气热水锅炉为研究对象,在实地采集数据的基础上,对其结构进行简化后绘出锅炉内胆的3D模型图并建立数学模型。通过改变锅炉燃气的进口速度、空气进口速度,氧气含量,模拟分析过量空气系数为1.0,1.1,1.2,1.3,1.4,1.5时的膛内温度场及二氧化碳的分布云图,得出青海高原地区比较适合的燃烧工况。理论分析的最佳燃烧条件在高原锅炉的生产设计以及实际运行过程中起到指导作用。

高浓度葡萄糖对猪卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育的影响

试验旨在探究高浓度葡萄糖对猪卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育能力的影响。取体外分离处于生发泡期的猪卵丘卵母细胞复合体(COCs),分为3个处理组。分别用含葡萄糖浓度为5.6 mmol/L(C组)、10 mmol/L(G-1组)、15 mmol/L(G-2组)的培养液,进行体外成熟(IVM)处理,42 h后观察,并统计卵丘细胞扩散情况和第一极体排出率;对体外成熟42 h后的卵母细胞孤雌激活,统计2-细胞、4-细胞和第7天囊胚发育。结果发现,G-1组和G-2组卵丘细胞扩散度显著低于C组(P<0.05);G-1组和G-2组的MII期卵母细胞死亡率和存活率与C组相比无显著差异(P>0.05),但G-1组极体率显著降低(P<0.05),G-2组极体率极显著低于C组(P<0.01)。孤雌激活后,与C组相比,G-1组和G-2组的2-细胞分裂率显著降低(P<0.05),4-细胞分裂率以及囊胚发育率均极显著降低(P<0.01),但G-1、G-2组囊胚细胞数量与C组相比无显著性差异(P>0.05)。进一步线粒体染色发现,G-1组和G-2组的线粒体与C组相比分布不均。与C组相比,荧光结果显示G-1组和G-2组不仅活性氧(ROS)水平极显著升高(P<0.01),而且G-1组与G-2组谷胱甘肽(GSH)含量显著降低(P<0.05),虽然G-1组丙二醛(MDA)无显著性差异(P>0.05),但G-2组丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05)。研究结果表明,葡萄糖浓度高会影响猪卵母细胞线粒体分布,氧化应激水平升高,成熟效率降低,损害早期胚胎的发育潜能。

利用便携式运输箱实现猪卵母细胞体外成熟

试验旨在探究猪卵母细胞和孤雌激活胚胎在运输箱内培养对卵母细胞体外成熟效率及后续胚胎发育潜能的影响。首先测定了运输箱的保温效果。结果显示,无论是否外界电源,置于该运输箱恒温浴内的1.5 mL、0.5 mL离心管和0.25 mL的麦管均可保持温度恒定。其次,将在常规培养箱体外培养的卵丘卵母细胞(COCs)设为对照组(A),分别将COCs置于1.5 mL的离心管(B)、0.5 mL的离心管(C)和0.25 mL的麦管(D)在运输箱中进行培养。体外培养44 h后,观察不同成熟条件下COCs卵丘细胞扩散情况并统计卵母细胞成熟率。结果表明,尽管在0.5 mL离心管中成熟的COCs卵丘细胞扩散情况相对较差,但无论在何种条件下(A,B,C和D),卵母细胞死亡率、成熟率均无显著差异。另外,分别从4组中挑选含有第一极体(PB1)的卵母细胞进行孤雌激活,并再次于对应的4种条件下(A-A′,B-B′,C-C′,D-D′)进行体外培养。胚胎体外发育的结果显示,4组胚胎在4-细胞时期分裂率无显著差异。温度恒定的运输箱条件能满足COCs完成体外成熟,且能支持胚胎完成至少初始的两次卵裂。