mTOR/p70s6k参与巨核细胞多倍体化调控

目的:研究巨核细胞多倍体细胞周期调控的机制。方法:Western blot分析多倍体细胞模型中mTOR/p70s6k通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析S6K1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系。结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化,发生在G1期进入S期,S6K1的第421位苏氨酸/第424位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期。结论:mTOR/S6K1通路参与巨核细胞多倍体细胞周期的调控。

CD40信号对干燥综合征患者唾液腺上皮细胞ICAM-1蛋白及基因表达的影响

通过研究干燥综合征(Sjgren's syndrome,SS)患者与健康对照组唾液腺上皮细胞CD40、ICAM-1/CD54蛋白及基因表达水平的差异,揭示SS患者唾液腺上皮细胞异常免疫活化的发病机制。通过贴壁法用无血清培养基培养唾液腺上皮细胞,传三代后在IFN-γ及抗-CD40单抗分别孵育24h后收集细胞,采用流式细胞术、RT-PCR技术和免疫组化技术分析SS患者和健康对照组唾液腺上皮细胞CD40及ICAM-1的表达。流式细胞术、RT-PCR结果显示,在静止状态下,SS患者和健康对照组的唾液腺上皮细胞表达CD40及ICAM-1,经过IFN-γ及抗CD40单抗刺激后,CD40及ICAM-1的表达显著增强(P<0.01)。免疫组化结果显示,健康对照唾液腺基本不表达或低表达CD40和ICAM-1分子,而SS患者的唾液腺高表达CD40和ICAM-1分子。此外,经过IFN-γ及抗CD40单抗刺激后,SS组唾液腺上皮细胞的CD40及ICAM-1表达均显著高于对照组(P<0.01),提示SS唾液腺上皮细胞CD40及ICAM-1的高表达可能与其发病机制密切相关。

mTOR/4E-BP1参与诺考达唑诱导的Dami细胞多倍体化调控

目的:多倍性是物种形成的重要机制,决定一些重要器官细胞产生的数量和功能,而且与某些病理过程(如恶性肿瘤)的发生有密切关系。我们通过建立相对同步化的多倍体细胞模型,已经证实mTOR/S6K1参与多倍体细胞周期的调控。本课题主要研究mTOR下游的另一个重要信号分子4E-BP1是否也参与细胞的倍体化调控。方法:诺考达唑诱导Dami细胞建立相对同步化的多倍体细胞模型,Western-blot分析多倍体细胞模型中mTOR/4E-BP1通路信号分子表达和磷酸化修饰位点的变化,流式细胞仪双荧光分析4E-BP1不同结构域磷酸化位点修饰与细胞周期各时相的关系。结果:诺考达唑诱导的Dami细胞可作为相对同步化的多倍体细胞周期模型,在二倍体和多倍体细胞周期中,mTOR表达增加及第2448位丝氨酸位点磷酸化发生在G1期进入S期,4E-BP1的第37,46位苏氨酸和第65位丝氨酸位点磷酸化发生在G2/M期。结论:mTOR/4E-BP1通路参与多倍体细胞周期的调控。