脂联素通过AMPK/mTOR/4EBP1通路对子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的影响

背景与目的:脂联素(adiponectin,APN)被认为是一种强有力的抑制肿瘤细胞生长的抗癌因子,但APN调节细胞转移的作用机制尚不清楚。探讨在子宫内膜癌HEC-1B细胞中,APN能否通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/磷酸化真核启动因子4E结合蛋白1(4E binding protein 1,4EBP1)通路抑制细胞迁移及侵袭。方法:实验设计为4组:①APN组:20μg/mL APN作用于细胞30 min;②抑制剂组:10μmol/L复合物C(AMPK抑制剂)作用于细胞30 min;③APN+抑制剂组:10μmol/L复合物C预处理细胞30 min后,加入20μg/mL APN作用30 min;④对照组:仅加入无血清DMEM培养基。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术检测4组细胞中B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metallopeptidase 9,MMP-9)的mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测4组细胞中Bcl-2、MMP-9及AMPK信号通路中AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平;Transwell及划痕实验检测4组HEC-1B细胞的迁移能力。结果:Bcl-2和MMP-9 mRNA的表达水平在APN组中分别为0.64±0.08和0.68±0.02,均明显低于APN+抑制剂组(分别为0.98±0.11和0.96±0.08;P=0.02和0.03)。APN组中,HEC-1B细胞Bcl-2、MMP-9蛋白水平分别与对照组、抑制剂组、APN+抑制剂组比较,差异均有统计学意义(P=0.00)。APN组中,HEC-1B细胞AMPK、mTOR、4EBP1蛋白水平分别为1.49±0.02、0.48±0.00、0.19±0.00。与对照组比较,蛋白水平明显升高(P=0.00)。APN组穿膜细胞数为(78.72±10.74)个,APN+抑制剂组为(131.45±9.11)个,对照组为(131.91±12.29)个,APN组与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.00),APN+抑制剂组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.12)。APN组中,HEC-1B细胞迁移率为(19.27±1.14)%,与其余3组比较,4组组间差异均有统计学意义(P=0.00),其余3组组间差异无统计学意义(F=2.78,P=0.39)。结论:APN可经AMPK/mTOR/4EBP1信号通路发挥抑制子宫内膜癌细胞迁移及侵袭的效应,达到抗肿瘤作用。

基于转录组测序分析骨髓间充质干细胞对子宫内膜癌细胞的影响

目的探索骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)对子宫内膜癌Ishikawa细胞转录水平的影响。方法用Lenti‑EGFP慢病毒感染Ishikawa细胞,分别将表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的Ishikawa细胞单独培养、与BMSCs接触共培养;通过流式细胞术分离Ishikawa细胞,并进行转录组测序分析筛选差异表达的mRNA和miRNA,通过miRWalk预测差异miRNA靶基因,对两者的交集基因进行GO、KEGG、蛋白网络互作分析;采用qRT‑PCR和Western blot验证测序结果的准确性。结果标记EGFP的Ishikawa细胞与BMSCs共培养后,分离出的Ishikawa‑EGFP阳性细胞占33.6%,阴性细胞占10.5%。测序后共筛选出5928个差异表达mRNA和111个差异表达miRNA。蛋白网络互作分析显示交集基因表达的蛋白之间相互作用,核心节点包括CDKN1A、JAK1、COL1A1、VCAN等。miRNA‑mRNA网络图显示CDKN1A与hsa‑let‑7e‑5p存在潜在靶向关系。GO分析和KEGG分析结果显示,其交集基因参与细胞外基质结构、细胞黏附分子结合等,并主要富集在PI3K‑Akt、黏着斑、MAPK、EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等信号通路。qRT‑PCR和Western blot结果显示,共培养后Ishikawa‑EGFP细胞中CDKN1A表达上调,hsa‑let‑7e‑5p表达下调。结论BMSCs可能通过细胞间的相互作用调节肿瘤局部微环境并促进子宫内膜癌的发生发展。