鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质的研制及其在能力验证中的应用

针对目前沙门氏菌标准物质种类缺乏、研制水平有待提高的问题,选取非典型沙门氏菌NIM JZ048作为目标菌,产气肠杆菌CICC 10293作为干扰菌,研制鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质。结果表明,该标准物质的沙门氏菌定量标准值为(1.8±0.4)×10^(3) CFU/g,菌落总数定量标准值为(5.5±0.9)×10^(3) CFU/g,定性标准值为沙门氏菌阳性。均匀性和稳定性良好,可以在-20℃下稳定保存6个月。此外,将该标准物质作为考核样品用于21家食品承检机构的沙门氏菌定性检测能力验证,其中15家结果合格,其余6家机构因非典型沙门氏菌漏检,结果不合格。制备的鸡肉中非典型沙门氏菌标准物质可以有效用于食品承检机构的沙门氏菌检测能力评价。

生物安全柜防护性能评价用标准物质研制

生物安全柜的防护性能不仅影响实验结果的准确性和可靠性,而且也关系到实验人员的人身安全,因此其防护性能需要及时评价与校准。枯草芽孢杆菌作为国内外生物安全柜标准中规定的性能评价用指示菌,其芽孢标准物质的研制十分必要。通过将不同浓度的枯草芽孢杆菌芽孢添加到保护剂中,经冻干制备成干粉状标准物质,并研究标准物质的均匀性和稳定性。结果表明制备的枯草芽孢杆菌芽孢计数系列标准物质均匀性良好,在4℃下可以稳定保存24个月,3种不同浓度的标准物质标准值分别为(5.4±1.3)×10^(8)CFU/mL、(5.2±1.3)×10^(6)CFU/mL和(5.3±1.4)×10^(4)CFU/mL,可分别用于生物安全柜人员、产品和交叉污染保护性能评价。

基于平板计数的类球红细菌测量方法研究

类球红细菌是产辅酶Q10的主要微生物之一,定量检测类球红细菌活菌数对优化类球红细菌的发酵条件具有重要意义。通过对接种方式、接种量、培养基种类以及培养温度进行比较研究,对类球红细菌的平板计数法进行优化,并对优化后的平板计数法进行协同实验验证和不确定度分析。平板计数法最终优化结果为:接种方式为涂布法,接种量为50μL,培养基为营养琼脂,培养温度为32℃;该方法重复性和再现性均较好,室内重复性相对标准偏差为6.0%,室间相对标准偏差为16.4%。所优化方法的相对扩展不确定度为9.2%(k=2),适用于类球红细菌定量测量。

乳制品中微生物标准物质研究现状与趋势

乳制品中微生物标准物质是发展微生物计量技术,建立微生物检测标准,完善乳及乳制品质量监管体系的重要工具,具有广阔的需求及应用前景。介绍了乳制品中微生物标准物质的主要特性,保持微生物活性的主要制备技术,以及特性量值、标称特性的测量技术;此外,对乳制品中微生物标准物质发展和应用现状进行了综述,并在分析该领域研究面临的主要问题的基础上,对标准物质需求与趋势进行了展望,旨在为后续微生物标准物质研究提供一定的参考与借鉴。

转基因水稻TT51—1标准物质的研制

将筛选后的转基因水稻qT51—1和非转基因水稻明恢63种子分别冷冻研磨成粉末，采用重量法配置了5个不同水平的标准物质。经检验该标准物质的均匀性良好，可在4℃保存条件下存储1年。标准物质采用重量法的质量分数作为标准值，数字PCR测定拷贝数分数作为参考值，通过转基因水稻与非转基因水稻种子粉末提取效率比值校准的数字PCR定值结果与重量法质量分数定值结果之间具有等效一致性，该标准物质可用于转基因水稻TT51—1的定量PCR检测及其特异性检测方法的评价。

食源性细菌检测方法研究进展

据世界卫生组织（WHO）统计,每年全球死于食源性和水源性微生物疾病的人数总共约有220万人,因此WHO将食品安全定为本世纪优先解决的重大问题之一[1]。我国卫生与计划生育委员会（卫计委）每年都会在官方网站通报全国食物中毒事件,以2013年为例,卫计委通过突发公共卫生事件网络直报系统共收到全国食物中毒类突发公共卫生事件报告152起,中毒5 559人,死亡109人,

粘质沙雷氏菌测量方法研究

粘质沙雷氏菌是生物防护评价的指示菌。对粘质沙雷氏菌营养琼脂平板涂布法进行了方法验证和协同实验验证以及不确定度分析。结果显示,该方法重复性和复现性均较好,室内重复性相对标准偏差为8.93%,室间相对标准偏差为14.95%。经统计分析,营养琼脂平板涂布法相对扩展不确定度为12.60%(k=2),适用于粘质沙雷氏菌定量测量。

枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢测量方法研究

枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢是生物防护和灭菌效果评价的重要指示微生物,其量值准确可以保证评价的有效性和可比性。对枯草芽孢杆菌涂布平板法进行了方法验证和协同实验验证以及不确定度分析。结果显示,当平板上的菌落数在30~300 CFU之间时,该方法重复性和再现性均较好,室内重复性相对标准偏差为10.0%,室间相对标准偏差为14.1%。经统计分析,胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板涂布法相对扩展不确定度为12.0%(k=2),适用于枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢定量测量,对于人员防护装备防护性能评价、消毒剂检测及灭菌质量控制具有重要意义。

转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究

以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果,并结合提取时间和提取成本的比较,以期找到性价比最佳的提取方法。结果表明,试剂盒A和试剂盒B提取的基因组DNA完整性最好、纯度和提取效率最高,综合提取效果、耗时及成本等因素考虑,试剂盒B的性价比最佳。本研究为转基因水稻种子的检测和研究奠定了基础。

转基因植物Real-time PCR方法检出限和定量限的研究

目前Real-timePCR(Rt-PCR)方法在转基因植物定量检测中应用最为广泛。有关该方法的检出限和定量限的计算并没有达成统一。本文采用统计模型对三种转基因植物进行实时荧光定量PCR方法检出限和定量限的研究。实验结果表明:转基因玉米NK603检出限5拷贝,定量限14拷贝;转基因棉花Mon15985检出限5拷贝,定量限12拷贝;转基因油菜Oxy235检出限4拷贝,定量限9拷贝。是利用统计学方法对转基因植物荧光定量PCR方法检出限和定量限研究的一个积极尝试,可用于其他转基因植物检测中检出限和定量限的确定。

中国乙肝病毒核酸检测试剂盒现状

我国是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)的高发区,应用核酸扩增技术对HBV核酸生物标志物进行定量检测是HBV诊断和治疗监测中的重要方法。然而,目前我国市场上的商业化HBV核酸检测的试剂盒很多,有必要对不同厂商生产的乙肝病毒核酸检测试剂盒进行评价和分析。本文对乙肝病毒核酸检测方法、乙肝病毒核酸检测试剂盒现状和比较分析等方面作一介绍,以供试剂盒使用者和研发者参考。

基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展

数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术.该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应,通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数.DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量DNA拷贝数的关键因素.本文综述了数字PCR的发展历史、数字PCR与实时荧光定量PCR的区别,以及数字PCR在临床诊断、转基因成分定量、单细胞基因表达、环境微生物检测和下一代测序等方面的最新进展,并展望了该技术的应用前景.

转基因定量检测用质粒分子标准物质研究进展

近10年来,应用于转基因植物产品定量检测的质粒分子标准物质凭借其易于富集,快捷高效等优点,成为各国检测机构的研究热点。对国内外转基因植物核酸定量检测用的质粒分子标准物质研究进展进行总结和评述,并且对该类标准物质在研制过程中的问题进行分析,同时展望了该类标准物质的发展与应用。

金黄色葡萄球菌标准物质的研制

将金黄色葡萄球菌添加到复合保护剂中,经冻干制备成干粉状标准物质,通过比较冻干前后活菌数来验证保护剂保护效果,并研究标准物质的均匀性和稳定性。结果表明复合保护剂的保护率达到51.74%,可以在冻干过程中有效保护菌体,制备的金黄色葡萄球菌标准物质均匀性良好,可以稳定保存半年。该标准物质可用于食品检测实验室质量控制和食品中金黄色葡萄球菌检测结果的评价。

大肠杆菌定量检测用标准物质的研制

采用平板计数法考察复合保护剂对大肠杆菌标准物质冻干粉的保护效率以及均匀性、稳定性。结果显示：复合保护剂对大肠杆菌保护率达到53．19％，可以在冻干过程中有效保护菌体。将大肠杆菌与冻干保护剂混合后，经冷冻干燥制备成干粉状标准物质，形态好、复水速度快、均匀性良好，可以稳定保存半年。该标准物质可用于食品检测实验室质量控制和食品中大肠杆菌检测结果的评价。

数字PCR方法准确测量质粒DNA拷贝浓度

中国计量科学研究院(NIM)利用数字PCR技术针对国际比对样品质粒DNA,通过设计2对特异性的引物和探针、优化PCR扩增体系、排除PCR mastermix中的DNA污染,成功建立了定量该质粒DNA的数字PCR方法。比较了采用单重PCR和双重PCR方法定量结果之间的差异,最终实现了对比对样品的定量和不确定度评定。对线性质粒样品的测量结果及其扩展不确定度(k=2)为(8.06±0.55)×10~3 copies/nag,该结果在比对参考值不确定度范围内,且与参考值非常接近。

数字PCR和下一代测序方法用于KRAS基因突变检测中的可比性研究

针对KRAS基因中的2个常见突变G12R和G12S,建立了基于数字聚合酶链反应(PCR)和下一代测序(NGS)技术的特异性检测方法。利用含有目标突变的细胞系配制成不同突变比例的样本,考察了所建立的数字PCR和NGS方法的分析灵敏度和2种方法测量结果的可比性。结果发现对突变比例≥0.83%的样品,NGS和数字PCR的测定结果无显著差异(p>0.05)。突变比例<0.83%的样品,2种方法的测定结果差异显著(p<0.05),而数字PCR方法的测定结果与配制值无显著差异。这表明2种方法在检测高丰度突变时测量结果可比,而数字PCR方法在测定低丰度突变时准确性更高。

转基因大豆Mon89788基体标准物质协同实验研究

对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究。研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认，标准物质的多家实验室协同实验，以及测最的不确定度评估。多家测定分析结果表明，转基因大豆Mon897883种不同外源基因／内源基因含量水平的标准物质参考值和扩展不确定度分别为0．35％±0．17％，0．61％±0．14％，3．17％±1．70％（k=2）。基体为大豆粉的该标准物质可用于转基因大豆含量的定量检测。

转基因水稻克螟稻标准物质的初制备

建立了转基因水稻克螟稻基体标准物质的初制备体系。按照0．5％、1％、2％、5％的质量比分别加入阳性粉末和阴性粉末，配制成4个水平的基体标准物质。实验结果表明，所选的阳性粉末和阴性粉末的水分分别为3．288％和4．039％，粒径均小于200斗m。从标识“金粉”的检测结果也可以看出，4个水平的基体标准物质均具有较好的均匀性。克螟稻基体标准物质的前期制备符合转基因基体标准物质的要求，可为后期进一步考察其稳定性和定值等参数提供基础。

转基因水稻华恢1号检测用质粒标准分子研制

质粒标准分子作为阳性标准品已广泛用于转基因作物及产品的核酸定量检测。但是目前多数质粒标准分子只用于研究,未能成为国家级标准物质。因此,按照国家一级标准物质技术规范,研制了用于检测转基因水稻华恢1号的质粒标准分子,内容包括质粒分子的构建、纯度分析、特异性检测、可替代性研究、均匀性检验、稳定性考察、定值与不确定度评估。结果表明,该质粒分子标准物质半年内稳定,可替代基因组作为华恢1号定量的阳性标准。