大鼠胰岛细胞单层培养模型的建立和应用

目前用于体外胰岛功能研究的细胞模型系统有两大类,一是从正常动物胰腺组织分离的胰岛,二是由胰岛素瘤细胞克隆产生胰岛素的胰岛细胞系。在研究葡萄糖对胰岛分泌功能的影响时,使用从正常胰腺组织所分离的胰岛较为理想,但可获得的组织量过少,而从瘤组织克隆的细胞系虽可获得大量同源细胞成分,但该类细胞对刺激反应常弱化,不能如实地反应生物体的正常功能。有鉴于此,本实验采用正常大鼠胰岛细胞单层培养技术,获得了具有良好功能和形态的胰岛细胞,结果报告如下。

神经生长因子对胰淀素所致大鼠胰岛细胞功能障碍的保护作用

目的:评价神经生长因子(NGF)对高浓度胰淀素所致大鼠胰岛细胞活力和胰岛素分泌功能损伤的修复作用。方法:以不同浓度胰淀素(1、5、10μmol/L)孵育原代培养的大鼠胰岛β细胞,制备功能减退的细胞模型,再以不同浓度的NGF(50、100、200μg/L)孵育高浓度胰淀素(10μmol/L)作用过的胰岛细胞,分别设立空白对照组,比较各组细胞对四甲基偶氮唑盐(MTT)还原能力和胰岛素的分泌能力。结果:高浓度胰淀素(10μmol/L)作用后胰岛细胞对MTT还原能力以及基础糖(5mmol/L)和高糖状态(16.7mmol/L)下胰岛素分泌量的影响与对照组相比均明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),细胞模型制备成功。用不同浓度NGF孵育24h后,随着NGF剂量的增加,此受损胰岛细胞胰岛素分泌量(即24h胰岛素分泌量)、高糖(16.7mmol/L)刺激下胰岛素分泌量均明显增加,受损胰岛细胞对MTT还原能力亦逐步增强。结论:NGF可减轻高浓度胰淀素对胰岛细胞活力的抑制作用,并促进胰岛β细胞分泌功能的恢复。

MRP1/CD9在膀胱癌组织中的表达及意义

目的探讨M RP 1/CD 9在膀胱癌组织的表达及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测M RP 1/CD 9在膀胱癌组织和正常膀胱黏膜组织中的表达。结果正常膀胱组织中M RP 1/CD 9均为阳性。膀胱癌组织中M RP 1/CD 9表达降低,且与病理分期呈负相关,与临床分期无相关性。结论在膀胱癌组织中M RP 1/CD 9表达降低,可能与膀胱癌的发展有关。其降低程度可以作为评估膀胱癌恶性程度的一个重要指标。

尿毒症患者T淋巴细胞功能的变化

采用~3H-TdR掺入法测定了35例尿毒症患者的T淋巴细胞转化功能,与正常对照组比较,发现透析和未透析尿毒症患者的T淋巴细胞转化功能明显下降。尿毒症患者经慢性维持性血透治疗后,T淋巴细胞转化功能有一定提高。锌元素与T淋巴细胞转化功能存在相关关系。锌是影响T淋巴细胞转化的重要因素。为提高尿毒症患者的T淋巴细胞功能,要加强规律性血透治疗和补充锌元素。

人尿路变移上皮种子细胞的体外培养与鉴定

目的对人尿路变移上皮细胞进行原代和传代培养,探讨并建立细胞的培养体系,用于泌尿系统组织工程种子细胞的相关研究。方法采集人肾脏手术标本的肾盂、输尿管正常上皮组织利用组织块法,使用添加附加表皮生长因子(EGF)及牛垂体提取物(BPE)成分的角朊细胞无血清培养液(KSFM)进行细胞原代培养,用含EGF及BPE的KSFM进行传代培养。观察培养细胞的形态和增殖情况,经HE染色和免疫细胞化学SP法染色进行鉴定。结果培养制备的人尿路上皮细胞呈现典型的变移上皮细胞形态特征,原代培养9-12d时细胞汇合可达80%。免疫细胞化学染色显示细胞角蛋白(CKAE1/AE3)阳性。分离培养的为单一的人尿路变移上皮细胞,无成纤维细胞混杂。结论采用组织块法分离培养的人尿路变移上皮细胞在添加EGF及BPE的KSFM培养液中可维持良好的生物学特性,并具有一定的增殖传代能力。该培养体系所获得的细胞可用于人泌尿系统的基础研究及组织工程的进一步研究。

逆转录病毒介导的牛生长激素基因转染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞

目的:以牛生长激素(bGH)为模型,建立逆转录病毒载体转移系统,体外转染鼠成纤维细胞株NIH3T3和人胚肺成纤维细胞2BS,以获得bGH表达。方法:将PCR扩增的bGH基因片段插入逆转录病毒载体pSXLG-MDR相应酶切位点,获得的重组逆转录病毒质粒。应用脂质体方法转染重组质粒进入包装细胞PA317,筛选长春新碱抗性克隆株,收集上清液感染NIH3T3细胞和人胚肺成纤维细胞2BS,筛选携带bGH基因的成纤维细胞的克隆株3T3/bGH和2BS/bGH。结果:RT-PCR分析表明基因转染组的3T3/bGH细胞和2BS/bGH细胞在相当于680bp处有一清晰的条带,而空质粒对照组无相应条带出现。RIA分析表明转染基因细胞的培养液及胞浆蛋白有bGH蛋白表达,而作为对照的3T3/mdr细胞和NIH/3T3细胞均无此蛋白表达。结论:应用逆转录病毒IRBS载体系统转染bGH基因进入成纤维细胞,该系统易筛选,转染效率较高。

胰岛素基因在HepG-2细胞系中的调节表达

用脂质体介导法将质粒p(GIRE),BP-11×Furin转染至HepG-2细胞。培养该细胞,以不同浓度的葡萄糖或胰岛素加入培养基。结果显示,葡萄糖和胰岛素均能浓度依赖地分别刺激和抑制胰岛素基因的表达。

变异胰岛素基因在HepG2细胞系中的表达

目的了解变异的胰岛素基因(insulin/furin)在HepG2细胞系中表达及活性胰岛素的产生情况。方法构建含有insulin/furin的表达质粒p(G1RE)3BP-11×furin并转染HepG2细胞,RT-PCR和放射免疫分析法从mRNA和蛋白质水平观察转染后HepG2细胞中insulin/furin的表达和胰岛素的产生情况。结果HindⅢ和EcoR V双酶切验证质粒p(G1RE)3BP-11×furin,切下260bp和4700bp两个片段,回收260bp片段测序证实为insulin/furin;RT-PCR检测转染后的HepG2细胞有insulin/furin的表达,DNA测序证实为insulin/furin;培养基中可检测到胰岛素。结论含insulin/furin的真核表达质粒p(G1RE)3BP-11×furin转染HepG2细胞,insulin/furin成功地在HepG2细胞中表达,并产生有生物活性的胰岛素。

葡萄糖、胰岛素调节（G1RE）3BP-1启动子活性的体外研究

目的探讨葡萄糖、胰岛素对（G1RE）3BP-1启动子活性的影响及意义。方法采用脂质体转染法将含有（G1RE）3BP-1启动子的真核表达质粒p（G1RE）3BP-1Luc转染至人肝癌细胞系-HepG-2细胞中,6 h后分别加入不同浓度的葡萄糖、胰岛素,孵育48 h后,分别检测其报告基因荧虫素酶的活性。结果荧虫素酶的活性随着培养基中葡萄糖的浓度增高而增加,随着培养基中胰岛素浓度的增多而减少。结论（G1RE）3BP-1启动子在肝细胞中受葡萄糖的正调控、受胰岛素的负调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行。

静脉滴注吉他霉素致小儿急性肝炎一例

急性肝炎引是由于感染肝炎病毒而引起的肝脏疾病,病程不超过6个月。在我国,最常见的急性肝炎是急性乙型肝炎,表现为现低热、全身疲乏无力、食欲减退,伴有恶心、呕吐、厌油腻、肝区不适及尿黄等。笔者静脉滴注吉他霉素致小儿急性肝炎1例，现报告如下。

腹型过敏性紫癜6例误诊分析

过敏性紫癜为一种常见的血管变态反应性疾病,因机体对某些致敏物质发生变态反应,导致毛细血管脆性及通透性增加,血液外渗,产生皮肤紫癜、黏膜及某些器官出血.可同时出现皮肤水肿、荨麻疹等其他过敏表现.本病在临床诊断中并不难,但有些特殊情况,早期确有误诊.为了总结经验,吸取教训,现将2000～2012年过敏性紫癜误诊分析如下.

阿奇霉素治疗小儿支气管肺炎150例疗效观察

支气管肺炎为小儿最常见的肺炎，在我国以细菌性肺炎常见，近几年支原体肺炎也逐渐增多。从2001年1月～2003年10月，在我院儿科应用阿奇霉素治疗支气管肺炎150例，疗效显著，现报道如下。

卡维地洛治疗40例慢性充血性心力衰竭患者的疗效观察

目的:探讨卡维地洛治疗慢性充血性心力衰竭的临床疗效。方法:将40例适合的患者分成治疗组和对照组,治疗组在常规治疗的基础上加用卡维地洛,对照组采用常规治疗,比较其治疗效果。结果:治疗组较对照组的总疗效有显著性差异。结论:卡维地洛是临床上治疗慢性充血性心力衰竭的一种比较好的药品。

血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂治疗高血压病疗效观察

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂对高血压病的临床疗效。方法 200例适合的患者分成治疗组和对照组,治疗组采用血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂治疗,对照组采用其他降压药治疗,比较其治疗效果。结果治疗组较对照组总疗效有显著性差异。结论血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂是临床上治疗高血压病一种较好的药品。

phIFN-α-2B穿梭质粒在卡介苗中的表达

目的建立一种新型、具有分泌hIFN-α-2B功能的卡介苗(BCG),为膀胱癌的治疗提供更合理的方法。方法利用基因工程技术构建出穿梭质粒phIFN-α-2B,转导至BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG,采用PCR、测序方法进行鉴定,ELISA方法对其表达情况进行检测。结果穿梭质粒phIFN-α-2B所插入的序列完全正确,可以转导入BCG内形成重组hIFN-α-2B-BCG。细菌外hIFN-α-2B浓度可达997.2pg/ml。结论利用基因工程技术构建了phIFN-α-2B穿梭质粒并转导入BCG内,构建出rBCG-hIFN-α-2B。重组BCG可将hIFN-α-2B分泌性表达到细菌外,为其应用于膀胱肿瘤的治疗提供了实验依据。

膀胱移行上皮癌发生发展的分子病理学研究

研究４９例复发性膀胱移行上皮癌的临床病理资料，将膀胱移行上皮癌分成两大类。Ⅰ类癌始于非典型增生，经早期乳头状非浸润癌发展成典型的Ⅰ、Ⅱ级乳头状移行上皮癌，该类癌多以固有膜上浸润为主。Ⅱ类癌始于结构不良，经原位癌发展成浸润癌。为了解两类癌的发生发展实质，从中选出七种病变经免疫组化ＡＢＣ法检测，ｒａｓＰ２１、Ｐ５３、Ｒｂ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦＲ的基因表达产物。结果表明：在Ⅰ类癌发生的早期以ｒａｓＰ２１和Ｒｂ表达，ＥＧＦＲ和Ｃ－ｅｒｂＢ－２弱表达为主。在Ⅱ类癌发生发展过程中以Ｐ５３突变、Ｒｂ转阴Ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＥＧＦＲ过表达为主。结果表明癌基因的激活多造成细胞的增生为主，而抑癌基因的丢失、突变、灭活或重排等多引起细胞的突出间变，两者的协同则造成肿瘤的浸润和转移。

人正常尿路移行上皮细胞无血清培养

目的建立一种比较简便的人正常尿路上皮细胞无血清培养方法。方法标本组织块用冷消化法分离出尿路上皮细胞，培养于无血清生长培养基。观察传代细胞形态及生长情况，并用ＴＧＦβ１抑制细胞增殖试验检验细胞在有血清或无血清培养基中对ＴＧＦβ１的反应。结果培养的总成功率为７３％，细胞具有典型的移行上皮细胞形态学特征，细胞能在２４小时后增殖进入对数生长期，传代９～１１次后开始衰退。另外，无血清培养体系比含血清培养体系更能反映出ＴＧＦβ１对细胞抑制作用。结论此培养体系具有简单、短期内可扩增出大量纯净上皮细胞、应用范围广和培养成功率高的特点。

pYL-绿色荧光蛋白质粒在卡介苗中的表达

我们将绿色荧光蛋白（GFP）报告基因利用pYL—GFP质粒转导到卡介苗（BCG）内形成重组BCG-GFP，通过其在BCG内部表达绿色荧光蛋白作为标记蛋白，探讨BCG的作用过程和机制提供一种新的方法。

c-Ha-ras癌基因反义RNA抑制膀胱癌细胞生长及粘附的研究

目的 研究降低c Ha ras癌基因表达对膀胱癌细胞生长和粘附的影响。方法 将反义c Ha ras基因导入膀胱癌细胞系TBC 1细胞株 ,筛选阳性细胞克隆。Southern杂交鉴定外源基因整合情况 ,荧光分光光度法检测c Ha ras表达 ,绘制生长曲线 ,体外检测细胞粘附率。结果 筛选出细胞克隆TBC neo和TBC antiras ,放射自显影显示只有TBC antiras有外源性c Ha ras杂交带 ,亲本细胞TBC 1和对照细胞TBC neo只有内源性杂交带 ,与TBC 1(39.7± 6 .2 ,32 .8% )和TBC neo(43.2±5 .7,35 .7% )相比TBC antiras细胞的c Ha ras蛋白水平 (2 5 .6± 4.2 )及粘附率 (16 .4% )明显降低 (P<0 .0 5 )。生长曲线显示TBC antiras生长受到抑制。结论 降低c Ha ras癌基因表达抑制膀胱癌细胞生长和粘附 ,针对ras癌基因或癌蛋白的药物可为膀胱癌的临床治疗提供新途径。