利用PCR技术检测草莓镶脉病毒

采用特异引物的PCR扩增方法 ,对 30个草莓品种进行了草莓镶脉病毒的检测 ,同时用指示植物小叶嫁接法对被检植株进行了病毒检测 ,两种方法结果一致。回收、克隆PCR扩增出的特异DNA片段 ,获得了携有草莓镶脉病毒CP基因片段的载体。测序结果表明 ,得到的特异DNA片段同美国草莓镶脉病毒的株系ATCC 4 5 0 5 8CP基因片段相比 ,同源性为 90 .94 %。

柴胡ISSR-PCR反应体系的建立与优化

目的建立适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系；筛选适宜引物，并确定最佳退火温度。方法CTAB法提取叶片DNA，通过单因子实验分别找出合适的ISSR-PCR反应条件，利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果适于柴胡ISSR分析的PCR反应体系为25μl总体积中含有1×Taq酶缓冲液，2．0mmol／L MgCl2，各0．15mmol／L的dNTPs，0．3μmol／L引物，1．5U Taq酶（上海生工），20ng模板DNA，2％去离子甲酰胺。在100条引物中筛选出30条扩增条带清晰且条带数目较多的引物，最佳退火温度为49．9～63．6℃（因引物不同而异）。结论建立了柴胡ISSR—PCR反应体系，筛选出30条引物并确定了最佳退火温度，为应用ISSR技术鉴定柴胡种质资源、分子标记辅助选择育种及其遗传多样性研究奠定了基础。

浅析品管圈对胃肠减压患者鼻胃管脱管率的影响

目的研究开展QCC(品管圈)活动对避免胃肠减压患者鼻胃管产生脱管问题的影响。方法选取我科开展QCC前后的500例胃肠减压患者为本次研究的对象,开展活动前后各选择250例研究对象,研究QCC对避免胃肠减压患者鼻胃管发生脱管情况产生的影响性。结果在开展QCC前,胃肠减压患者鼻胃管发生脱管率为2.40%;开展QCC后,胃肠减压患者鼻胃管发生脱管率为0.40%(P<0.05)。结论开展QCC活动,可有效降低胃肠减压患者胃管的滑脱率。

我国中药材新品种选育进展与建议

本文总结近十年来中药材新品种选育和推广、新品种认证体系建设等方面取得的新成绩,在此基础上提出亟待加强的几方面工作:加快完成人工栽培200种中药材品种选育的全覆盖;尽快完成中药材新品种全国认证体系建立;建立全国或省级中药材新品种区试体系,探索生物技术在中药材育种领域的应用;开展品质性状遗传规律研究等。本文是近年第一次对我国中药材新品种选育现状的全面总结。

我国中药农业现状分析与发展趋势思考

本文探讨了中药农业的范畴,概略性说明了中药农业的现状,较为详尽地分析了中药农业面临的问题及其产生原因,重点阐述了中药农业发展的15个趋势。旨在抛砖引玉,希望大家更多关注、关心中药农业的发展。

白木香3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(AsHMGS)基因的克隆与表达分析

以白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg)茎cDNA为模板,采用反转录PCR及RACE技术分离得到HMGS基因cDNA全长。序列分析表明该基因序列全长1 831 bp,共编码465个氨基酸,推导的蛋白质分子量为51.4 kD,理论等电点6.25,命名为AsHMGS。推导的AsHMGS蛋白质序列具有植物HMGS酶的典型结构,并预测出HMGS酶的活性中心。系统进化树分析表明,AsHMGS蛋白与拟南芥、琴叶拟南芥、芥菜的相应蛋白相似度最高,其次为人参、喜树和野茶树。荧光定量PCR结果显示,茉莉酸甲酯能诱导白木香AsHMGS的表达。

中药材新品种选育研究现状、特点及策略探讨

从地方品种挖掘利用和育成品种、育种方法、新品种认证体系、重点项目等方面分析了中药材新品种选育研究的现状,结合中药材的特点讨论了一些中药材新品种选育方法的策略,如选育对象选择、目标性状定位、选育方法确定、选育过程注意事项等。指出要从中药材新品种评价技术规范、中药材新品种认证制度、中药材新品种区试体系等方面入手构建中药材新品种选育认证体系,促进中药材新品种选育研究工作快速发展。最后指出中药材新品种选育是推进中药材规范化生产的核心环节之一,需要得到国家长期、持续、稳定的支持。

利用巢式PCR对海南槟榔(Areca catechu L.)黄化病的初步检测

通过对海南槟榔黄化病病原的研究,初步确定其病原物,对开展后续研究及防治策略提供依据。利用巢式PCR方法,对在海南3个市县采集的28个黄化病植株的不同组织进行了植原体检测,结果表明:在2个市县9个槟榔黄化病病株叶片中检测到了植原体,而在根和茎中没有发现植原体。将扩增片段克隆后测序得到1249bp的完整植原体序列。利用MEGA3软件构建了系统发育进化树,同源性聚类发现其属于翠菊黄花组B亚组。初步判断发生在海南的槟榔黄化病是由于植原体引起。

桔梗种子质量分级标准研究

目的:确定桔梗种子的质量分级标准。方法:对不同产地53个批次的桔梗种子样本进行分选,测定净度、含水量、千粒重、发芽率、生活力等指标,通过SPSS软件对以上数据进行逐步聚类分析,确定桔梗种子质量分级标准。结果:桔梗种子被分为3个等级,其中一级和二级种子为合格的种子。结论:建立了桔梗种子的分级质量标准,为桔梗种子选育提供参考依据。

植物SSR引物开发策略简述

SSR是一种优秀的分子遗传标记,已经广泛应用到遗传多样性检测、遗传种质鉴定、遗传连锁图谱构建、基因定位与标记辅助育种等多个领域。但SSR标记应用的前提是根据物种已知DNA序列设计特异引物,才能进行PCR扩增。对于大多数物种而言,目前获得的基因组DNA及表达的cDNA序列还非常有限或者根本没有。由此人们不断的设计出各种方法以开发出尽可能多的SSR引物,本文简要地介绍了基于序列数据设计和发展SSR引物的方法,这对于全基因组序列已经测序的或者已经拥有丰富DNA数据的物种是非常快捷的策略。对于那些遗传背景复杂或知之甚少或基因组数据有限的物种,本文也系统的介绍了传统的文库法、富集法等开发SSR引物的策略。进一步的本文结合本实验室的研究经验,对FIASCO磁珠富集法和ISSR-抑制PCR法进行了比较。

柴胡种子质量分级标准

为了建立柴胡种子质量分级标准,以便控制其质量,规范其供需市场。采用柴胡种子检验方法,测定不同来源的柴胡种子的发芽率、千粒重、净度、含水量和生活力等指标;根据K类中心聚类分析原理,使用SPSS17.0统计分析软件对数据进行了分析。最终确定了以发芽率和千粒重2项指标为主要标准,净度和含水量为参考标准的4项指标3个等级的柴胡种子质量分级标准。除去发芽率低于50%的不合格种子,25份试样中Ⅰ级有8个,Ⅱ级有11个,Ⅲ级有6个。此标准可为柴胡种子品质检验提供参考。

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。

柴胡种子检验规程研究

对柴胡种子扦样、真实性、净度、含水量、重量、发芽率、生活力及健康度8项指标的研究,确定了各指标的标准检验方法,供建立柴胡种子检验规程参考。

北柴胡不定根培养及茉莉酸甲酯处理对柴胡皂苷含量的影响

目的:建立北柴胡不定根培养体系,明确茉莉酸甲酯(MeJA)处理对北柴胡不定根中柴胡皂苷含量积累的影响。方法:利用固体和液体相结合的组织培养技术培养北柴胡不定根;分别以不同浓度的MeJA处理不定根不同时间,利用HPLC测定处理后不定根中柴胡皂苷含量的积累变化。结果:培养了北柴胡不定根;MeJA处理对北柴胡不定根中柴胡皂苷含量的积累有明显促进作用,当MeJA浓度为200μmol/L时,柴胡皂苷含量最高,为0.45%;以200μmol/L MeJA处理北柴胡不定根26 d时,柴胡皂苷含量最高,为0.51%。结论:北柴胡不定根培养结合MeJA诱导,可做为柴胡皂苷次生代谢合成途径及其积累规律研究的有效技术体系。

温郁金弯孢霉叶枯病病原菌(Curvularia clavata)生物学特性研究

本文对温郁金叶枯病病原菌(Curvulariaclavata)生物学特性进行了研究,以期为温郁金叶病害的综合防治提供依据。结果表明,温郁金弯孢霉叶枯病病原菌生长的最适培养基是CA培养基,最适温度是30℃,最适pH值为7。不同碳源对弯孢霉菌丝生长影响差别不大,适宜碳源为葡萄糖,乳糖和D-山梨醇。不同氮源对弯孢霉菌丝生长有差异,适宜氮源为牛肉浸膏和酵母浸膏,弯孢霉菌在硫酸铵中生长缓慢。

不同培养基、外源激素和真菌诱导子对北柴胡毛状根生长及柴胡皂苷含量的影响

目的：分析培养基、外源激素和真菌诱导子对北柴胡毛状根生长和柴胡皂苷含量的影响,筛选出柴胡皂苷产量高的培养条件。方法：设置3种培养基（B5、改良White和WPM）、3种外源激素（IBA、IAA和NAA）、真菌诱导子为黑曲霉诱导子,每组处理设计2~4个浓度梯度,25℃、110 r/min暗培养,3个月后收获称重,测定根产量,HPLC方法检测毛状根柴胡皂苷含量。结果：在添加0.5 mg/L IBA的B5培养基中,毛状根和柴胡皂苷产量最高,分别为2.4 g和9.05mg。结论：筛选出北柴胡毛状根最适培养条件,为北柴胡毛状根大规模培养利用提供了参考依据。

不同因子对药用植物毛状根产量和次生代谢产物积累影响的研究进展

以根为药用部位的药材占中药材种类的30%左右。毛状根培养体系是药用植物生产次生代谢产物的新途径、新方法。影响毛状根生长及其次生代谢物形成的因素有很多,如:物理因素、化学因素、前体物的添加、诱导子等。通过优化毛状根培养条件及培养基配比,可提高毛状根和次生代谢产物产量。本文就药用植物毛状根诱导形成及大规模生产中的根产量和次生代谢产物积累的影响因素与作用机理做一综述,为相关研究和应用提供参考。

北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建

目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因,构建其过量表达载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序获得5'和3'端部分cDNA序列的基础上,利用LD-PCR方法获得全长cDNA,根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物,利用高保真酶,以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框,扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接,转化大肠杆菌DH5α;重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序,采用NCBI在线Blastx、DNAman和MEGA4软件对序列进行生物信息学分析,随后将pT1-P450的酶切产物插入双元载体pCAMBIA-SUPER 1300,菌液PCR和酶切验证重组质粒p1300-P450。结果:扩增到了北柴胡细胞色素P450酶基因BcCYP87E,构建了这一基因的过量表达载体。结论:细胞色素P450酶基因的克隆和转基因载体的构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。

磁珠富集法开发北柴胡多态性简单序列重复标记

目的:利用磁珠富集法分离北柴胡微卫星序列,以开发北柴胡微卫星引物,获得有多态性的简单序列重复(SSR)标记。方法:用生物素标记的混合探针(AC)15、(AG)15、(MAB)12和两端连接已知序列人工接头的北柴胡基因组DNA酶切片段混和后与磁珠杂交,构建微卫星序列富集的小片段插入文库;利用接头引物分别与生物素探针引物Biotin-(AC)15、Biotin-(AG)15、Biontin-(MAB)12形成3个组合,用PCR方法对文库进行初步筛选;对可能的阳性克隆子进行测序复筛,选取微卫星侧翼序列足够长的序列设计引物,用荧光标记的基因分型技术以栽培柴胡种质为材料分析其多态性。结果:开发了5对多态性SSR标记,它们在5份柴胡栽培种质中共扩增出30.70个多态性等位基因,平均每条引物可以扩增出6.14个多态性等位基因;观察等位基因数最多13个,最少3个;有效等位基因数最多11.4个,最少1.6个。同时分析了4对EST-SSR引物,比较了2种SSR标记扩增结果。结论:磁珠富集法是开发柴胡多态性SSR标记的有效方法。

狭叶柴胡新品种中红柴1号种子发芽特性研究

以狭叶柴胡新品种中红柴1号为试验材料,通过设置3种发芽条件：不同温度、不同浓度赤霉素、不同温度水浸种不同时间,筛选中红柴1号种子适宜的发芽条件。试验结果表明：相对其他温度,15~25℃变温条件下种子发芽率最高;不同浓度赤霉素对种子发芽率无显著影响;40℃温水浸种8h可显著提高种子发芽率。