CAG方案治疗中高危骨髓增生异常综合征的临床观察

目的:观察CAG方案(阿糖胞苷+阿柔比星+粒细胞集落刺激因子)治疗中高危骨髓增生异常综合征(MDS)的临床疗效及主要不良反应。方法:应用CAG方案治疗中高危MDS 17例。1个周期后评价疗效,有效者继续接受1个周期治疗,缓解后治疗采用CAG方案与常规化疗交替。结果:17例患者中,完全缓解(CR)6例,部分缓解(PR)5例,骨髓完全缓解(MCR)伴血液学进步(HI)5例,未缓解(NR)1例。有效率94.12%,完全缓解率35.30%。6例进展为急性髓系白血病(AML),中位总时间为10.5个月(6～16个月)。中位死亡时间17个月(10～22个月),1年总生存率88.24%,2年总生存率69.33%。主要的不良反应为骨髓抑制(15/17)。结论:CAG方案治疗中高危MDS安全有效,长期疗效仍需进一步观察。

CTLA-4Ig抑制再生障碍性贫血患者T淋巴细胞增殖及活化作用的体外研究

目的:研究细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4融合蛋白(CTLA-4Ig)诱导再生障碍性贫血(AA)患者骨髓T淋巴细胞免疫耐受的作用。方法:采用免疫荧光标记法、流式细胞术分析CTLA-4Ig阻断前后AA患者骨髓T淋巴细胞表型CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、CD4+CD25+和CD8+CD25+的变化。结果:再障试验组与对照组相比,重型再障(SAA)和非重型再障(NSAA)患者骨髓CD3+、CD25+比值、CD4+和CD8+细胞中CD25+细胞比值均明显减低(P<0.05),CTLA-4Ig对重型再障的抑制作用高于非重型再障,对CD4+细胞的抑制作用高于CD8+群体。结论:CTLA-4Ig能够抑制再生障碍性贫血患者骨髓局部的异常自身免疫反应,降低骨髓T淋巴细胞对丝裂原的异常反应。

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病患者CD4^+T细胞亚群转录因子表达的变化及其临床意义

本研究通过检测CD4+T细胞亚群特异性转录因子的mRNA(T-bet、GATA-3、Foxp3、RORγt)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓系白血病(AML)患者外周血中的表达变化,探讨3种疾病的细胞免疫状态及其作用机制。采用实时荧光定量方法检测AA组23例、MDS组42例、AML组17例和正常组16例外周血单个核细胞(PBMNC)中转录因子的T-bet、GATA-3、Foxp3、RORγt mRNA表达并进行对比分析。结果显示:与正常组比较,AA组患者T-bet、RORγt mRNA的表达均显著增高(P<0.01),GATA-3、Foxp3表达减低(P<0.01)。MDS组T-bet、GATA-3 mRNA表达无显著性变化,而Foxp3、RORγt表达均显著增高(P<0.05);MDS-RA组T-bet、RORγt表达均较正常组升高(P<0.01),GATA-3表达显著性减低(P<0.05),Foxp3较正常组无显著性差异;MDS-RAEB和AML组T-bet、RORγt表达均低于正常对照(P<0.05),而GATA-3、Foxp3 mRNA表达均高于正常对照组(P<0.01)。结论:AA、MDS不同阶段以及AML患者外周血中CD4+T细胞转录因子表达水平不同,提示细胞免疫状态有差异,在AA和MDS早期阶段,异常免疫介导的造血细胞过度凋亡在骨髓衰竭中可能起重要作用,而在MDS晚期阶段和在AML时,恶性克隆的大量积聚可能是其主要原因。

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病患者CD8^+T细胞亚群的变化及临床意义

本研究检测再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)和急性髓系白血病(AML)患者细胞毒T细胞亚群平衡及其活性的改变,探讨三种疾病造血异常的细胞免疫机制,为临床治疗选择提供实验室依据。采用流式细胞术检测AA组17例、MDS组35例(其中RA 19例,RAEB 16例)、AML组15例和正常对照组10例的细胞毒性T细胞(Tc1、Tc2)以及部分T细胞亚群比例并进行对比分析。结果表明:与正常对照组相比,AA组、MDS-RA组Tc1、Tc1/Tc2、CD8+HLA-DR+、CD3+CD8+CD28+、CD8+CD45RO+显著升高,Tc2无明显统计学差异,CD8+CD45RA+显著减低;MDS-RAEB组Tc1、CD3+CD8+CD28+、CD8+HLA-DR+比例显著减低,Tc、Tc1/Tc2无明显变化,CD8+CD45RA+减低但差异不明显,CD8+CD45RO+显著升高;AML组Tc1、CD3+CD8+CD28+、CD8+CD45RA+、CD8+CD45RO+、CD8+HLA-DR+,Tc1/Tc2显著减低,Tc2显著上升。结论:AA、MDS不同阶段、AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,Tc1/Tc2的平衡向Tc1偏移,且伴有T细胞亚群活性增加;而在MDS晚期和AML阶段,则向Tc2偏移,T细胞亚群活性减低。前者可能与骨髓造血衰竭密切相关,而后者可能是恶性克隆免疫逃逸的重要机制之一。

ITP患者脾细胞分泌IL-18及IL-18结合蛋白的研究

本研究旨在探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)脾脏单个核细胞培养后IL-18,IL-18结合蛋白(b ind ingprotein,BP),IFN-γ,IL-4等细胞因子的表达及其临床意义。常规无菌制备脾单个核细胞,置含PHA(phytohem agg lutinin)10μg/m l,10%胎牛血清的RPM I1640完全培养基中,于37℃、5%CO2条件下培养;分析ITP患者及正常对照者脾单个核细胞分泌细胞因子的差异。结果表明:脾单个核细胞培养48小时后,ITP患者IL-18和IFN-γ的含量较正常对照者明显升高;IL-18BP含量两组间差异无统计学意义(p=0.646);IL-4低于检测限。结论:IL-18、IL-18BP等细胞因子表达失衡在ITP的免疫紊乱和发生发展中起着一定的作用。

急性早幼粒细胞白血病治疗的研究

急性早幼粒细胞白血病（APL）的治疗经历了蒽环类药物为主的联合化疗,全反式维甲酸（AT-RA）和亚砷酸（As2O3）治疗3个阶段,由于早幼粒细胞白血病细胞上存在PML/RARα融合基因,ATRA和As2O3作用于PML/RARα融合基因诱导分化及凋亡,使APL在治疗上有很大的突破,甚至可以治愈。尽管如此,仍有约12%～30%的患者在早期诱导缓解失败、复发或死于相关并发症阻[1]，因此，如何进一步提高疗效，减少早期死亡，

抗人CD3单克隆抗体体外对再生障碍性贫血造血恢复的机制研究

目的:探讨抗人CD3单克隆抗体(CD3单抗)治疗再生障碍性贫血(再障)的机制。方法:建立再障患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中造血细胞液态及半固体培养体系,加入多种造血生长因子进行扩增,并加入CD3单抗药物干预,以ELISA法测定培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)3种细胞因子的含量,以流式细胞技术分析扩增前后的细胞表面标志,检测CD34+细胞的比例,并观察粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)、红系爆式集落(BFU-E)的形成能力,从而研究CD3单抗对再障BMMNC中造血干/祖细胞体外扩增的影响。结果:加CD3单抗组与未加CD3单抗组相比较:体外液态培养7d时,培养上清中TNF-α、IFN-γ、IL-2细胞因子水平明显降低,CD34+细胞的扩增倍数升高,体外半固体培养10d时CFU-GM、BFU-E的产率增加。结论:CD3单抗可明显抑制T细胞介导的异常免疫激活,改善再障患者骨髓中造血细胞的体外扩增效应。

CTLA-4 Ig对重型再生障碍性贫血患者骨髓白介素-10水平的影响——附40例分析

目的:研究细胞毒性T细胞相关抗原4(cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4,CT-LA-4)和人IgG1的重组融合蛋白CTLA-4Ig对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓白介素-10水平的影响。方法:将40例重型再障患者平均分为2组,抽取骨髓并分离骨髓单个核细胞,其中A组加入CTLA-4Ig,B组为对照组,另收集骨髓细胞学检查正常的20例外科手术患者的骨髓作为C组,3组均用ELISA方法检测骨髓单个核细胞培养上清液中的白介素-10水平。结果:A组患者骨髓白介素-10水平为(208±71)ng/L,B组与C组相应为(135±64)ng/L、(443±157)ng/L。患者骨髓白介素-10水平低于正常对照组,A组骨髓白介素-10水平高于B组(均为P(0.01)。结论:重型再障患者白介素-10的水平下降,应用CTLA-4Ig可提高白介素-10的水平。

急性髓系白血病TFPI-2基因表达及启动子甲基化的研究

本研究检测了组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其甲基化状态,探讨其与AML发生、发展及危险度分层的关系。分离33例初治、19例完全缓解、12例复发/难治AML患者及15例单纯缺铁性贫血患者(对照组)骨髓单个核细胞,采用实时定量PCR(RT-PCR)检测TFPI-2 mRNA在其中的表达水平,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测启动子CpG岛甲基化状态。结果表明,初治组、完全缓解组及复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平均低于对照组(P<0.05),复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平明显低于初治组(P=0.006),与完全缓解组相比,初治组TFPI-2 mRNA表达水平也显著降低(P=0.030);64例AML患者TFPI-2基因启动子甲基化频率为64.63%(42/64),其中初治组、完全缓解组和复发/难治组患者中TFPI-2基因启动子甲基化频率分别为66.67%(22/33)、52.63%(10/19)和83.33%(10/12)(P>0.05);甲基化AML患者与非甲基化AML患者骨髓单个核细胞中TFPI-2 mRNA的相对表达量分别为0.165(0.005-2.099)和0.597(0.011-2.787)(P<0.05),在对照组骨髓单个核细胞中未检测到TFPI-2基因启动子的甲基化;初治组经2个疗程化疗后,完全缓解组(CR)骨髓单个核细胞TFPI-2 mRNA表达量显著高于未完全缓解组(PR+NR)(P=0.031)。结论:在AML中TFPI-2基因表达下调或沉默与启动子甲基化有关,TFPI-2基因表达水平及启动子甲基化状态可以作为AML分层及病情进展的指标。

ABCA3和Pgp在急性白血病中的表达及其临床意义

目的:检测三磷酸腺苷结合盒转运体A3(ABCA3)及P-糖蛋白(P-gp)基因在急性白血病(AL)细胞中的表达水平,并分析2种基因表达的临床意义。方法:应用RT-PCR方法检测42例初治、21例复发/难治成人AL患者及10例正常对照者骨髓单个核细胞ABCA3和P-gpmRNA表达水平。结果:初治AL组ABCA3、P-gp的表达水平均高于正常对照组(均P<0.01);复发难治AL组2种基因的表达水平均明显高于初治组(均P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)组ABCA3、P-gp的表达水平均高于急性髓细胞白血病(AML)组(均P<0.05)。AL患者ABCA3、P-gp表达水平呈正相关(r=0.599,P<0.01)。初治AL患者中获完全缓解组AB-CA3、P-gp的表达水平均低于未完全缓解组(均P<0.05)。结论:ABCA3、P-gp与AL患者的多药耐药及治疗预后密切相关,且2种基因的表达水平呈正相关。

皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤一例报告并文献复习

目的:报道1例皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤,探讨此类少见的皮肤T细胞淋巴瘤的临床和病理组织学特征以及治疗预后。方法:分析1例皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤患者的临床资料并通过复习文献,总结该病的临床病理、免疫表型、治疗及预后特点。结果:患者临床表现为发热、皮疹,皮肤活检病理示,真皮及皮下组织内大量核深染、形状不规则单个核细胞。免疫组化示,CD45RO弥漫阳性,CD3阳性,CD4阴性,CD8阳性,CD30部分阳性,TIA-1阳性,CD20阴性。CHOP方案化疗后一度好转,但很快复发,死于严重感染和多脏器功能衰竭。结论:皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤是一种少见的皮肤T细胞淋巴瘤,预后差,免疫表型和T细胞受体基因重排检测在该病的诊断、治疗及预后等方面起着关键的作用。

抗CD40L单抗4F1体外诱导再生障碍性贫血患者T细胞免疫沉默和促进造血恢复的研究

目前认为，原发性再生障碍性贫血（再障）的主要发病机制为T细胞介导的骨髓特异性自身免疫反应。根据免疫学基本原理，共刺激信号是抗原特异性T细胞活化过程中的必要条件。虽然对再障共刺激信号系统的改变认识仍非常有限，但已有证据表明，患者的共刺激信号系统存在异常。CD40／CD40L是共刺激信号系统中一个重要的调节分子对。我们通过观察抗CD40L单抗4FI对再障患者骨髓T淋巴细胞表型及集落形成的影响，研究其对再障T淋巴细胞异常免疫反应的抑制和造血恢复的促进作用。

再生障碍性贫血造血干细胞的研究现状

再生障碍性贫血（再障）的病因和发病机制复杂，但主要的病理生理学改变为造血干细胞（HSC）和造血祖细胞（HPC）的损伤，表现为干／祖细胞数量和质量的异常。我们主要针对原发性获得性再障的干细胞损伤及其机制综述如下。

咖啡酸片促进初治急性白血病化疗中血细胞恢复的临床观察

化学疗法是急性白血病综合治疗中重要的方法之一，骨髓抑制往往是化疗的主要限制性不良反应，化疗后患者极易出现全血细胞减少，引起全身各系统的损害，不但影响了化疗的顺利实施，而且降低了疗效，我们尝试用中西医结合方法来预防和治疗化疗后外周血细胞下降。

AA、MDS和AML患者CD4^+T细胞亚群的变化及其临床意义

目的探讨CD4+T细胞亚群(Th1、Th2、Th17及Treg细胞)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)患者免疫发病机制中的作用,为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞术检测AA组25例,MDS组48例[其中难治性贫血(MDS-RA)22例,难治性贫血伴原始细胞增多(MDS-RAEB)26例],AML组12例和正常对照组8例的外周血单个核细胞Th1、Th2、Th17及Treg细胞比例并对比分析,评价各组的细胞免疫状态。结果与正常对照组相比,AA组Th1、Th17细胞及Th1/Th2升高,而Th2和Treg细胞比例减低(P<0.05);MDS组Th1、Th2细胞、Th1/Th2与正常对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),而Th17和Treg细胞比例升高(P<0.05);MDS-RA组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2均升高(P<0.05),Th2细胞比例减低(P<0.05),而Treg细胞比例差异无统计学意义(P>0.05);MDS-RAEB组和AML组Th1、Th17细胞比例和Th1/Th2减低(P<0.05),Th2和Treg细胞比例升高(P<0.05)。结论 AA、MDS不同阶段与AML患者的细胞免疫状态不同,在AA和MDS早期阶段,免疫因素介导的凋亡过度是骨髓衰竭的主要原因;而在MDS晚期和AML阶段,异常克隆细胞的大量积聚可能是其主要原因。

FLAG方案治疗难治复发性急性白血病的临床观察

目的:观察应用FLAG方案治疗难治复发性急性白血病的临床疗效及主要毒副反应。方法:应用FLAG方案治疗难治复发性急性白血病患者36例,其中,急性髓细胞白血病(AML)患者20例,急性淋巴细胞白血病(ALL)患者16例。氟达拉滨(Flu)50mg/d,静脉滴入,持续30min,d1～d5;阿糖胞苷(Ara-C)2g/d,Flu后4h,静脉滴入,d1～d5;粒细胞集落刺激因子(G-CSF)300μg/d,皮下注射,d0～d5。1个周期后评价疗效,有效者间隔3周后继续原方案治疗1个周期。结果:AML组CR6例(30.00%),PR10例(50.00%),NR4例(20.00%),OR率(CR+PR)80.00%,持续CR(CCR)中位时间为6个月(2～12个月)。ALL组CR5例(31.25%),PR7例(43.75%),NR4例(25.00%),OR率75.00%,CCR中位时间为4个月(2～10个月)。两组CR率差异无统计学意义,P>0.05。主要的毒副反应为骨髓抑制、发热和感染。结论:FLAG方案治疗难治复发性急性白血病安全有效,长期疗效仍需进一步观察。

再生障碍性贫血患者血清中IL-18及IL-18BP的表达水平及其临床意义

目的探讨白介素18（IL-18）及IL-18结合蛋白（IL-18BP）在再生障碍性贫血（AA）患者血清中的表达及其临床意义。方法采用ELISA法检测29例AA患者和22名正常人血清IL-18和IL-18BP水平；实时定量RT—PCR方法检测IL-18及IL-18BP的mRNA表达。结果AA患者血清IL-18水平为（365．5±160．6）pg／ml，较正常对照组[（175．9±92．8）pg／ml]明显升高（P〈0．01）；重型AA患者的IL-18水平[（441．3±116．9）pg／ml]较慢性AA患者的IL-18水平[（326．4±167．0）pg／ml]升高更为明显（P〈0．05）；AA患者血清IL-18BP[（1788．6±523．8）pg／ml]较正常对照组[（1083．6±489．6）pg／ml]明显升高（P〈0．05），IL-18／IL-18BP比值在AA患者明显升高。RT—PCR结果证实AA患者IL-18和IL-18BP较正常对照组均明显升高，IL-18／IL-18BP比值明显升高。结论IL-18及IL-18BP在AA患者的免疫紊乱和发生、发展中起着一定的作用，重塑IL-18／IL-18BP平衡可能是AA治疗一个新的策略和方向。

B细胞非霍奇金淋巴瘤患者肥大细胞及IL-9表达水平及其意义

目的研究肥大细胞（MC）及IL-9在B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）中的临床意义。方法采用Western blot法检测CDll7在B-NHL患者肿瘤组织中的表达水平，应用免疫组织化学染色观察MC在B-NHL患者肿瘤局部的浸润情况。通过计算MC与B-NHL患者肿瘤标志物间的相关系数来判断MC在预后中的意义。通过ELISA方法检测B-NHL患者外周血中IL-9水平。应用流式细胞仪检测小鼠骨髓衍化的MC（BMMC）的纯度，并应用RT-PCR检测IL-9对小鼠MC相关基因表达的影响。结果B-NHL患者肿瘤组织CDll7表达明显高于对照组（0．0551士O．0064对0．0192士0．0072，P〈0．01），局部浸润的MC明显增多，且与患者预后不良相关；B-NHL患者血清中IL-9水平明显高于健康对照组；体外实验证实IL-9可以诱导小鼠BMMC的分化及相关基因的表达，包括CDll7、Fcerla、Mcptl和Mcpt5。结论IL-9可增强MC介导的免疫反应，在促进肿瘤的生长中可能起重要作用。IL-9有可能成为B-NHL的免疫治疗的作用靶点。

MDS、AA和AL患者骨髓细胞周期及增殖特征的研究

目的检测骨髓增生异常综合征(MDS)、再生障碍性贫血(AA)和急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的细胞周期分布及CD34、Ki67抗原的表达。方法选取2009年6月至2010年6月在山东大学附属省立医院就诊的住院及门诊患者68例,MDS组30例,其中难治性贫血(RA)组18例,难治性贫血伴原始细胞增多(RAEB)组12例;AA组22例,其中急性重型再障组7例,慢性非重型再障组15例;AL组16例,其中急性髓系白血病(AML)组12例,急性淋巴细胞白血病(ALL)组4例。另外选取正常对照组18例(均为非血液病患者)。应用流式细胞仪(FCM),通过碘化丙啶细胞核染色及免疫荧光双标法,对其BMMNC的细胞周期分布及CD34、Ki67的表达进行检测。结果与正常对照组相比,MDS和AL组BMMNCs中细胞周期G0/G1期、造血干/祖细胞CD34+细胞、Ki67+细胞、CD34+Ki67+细胞、CD34+细胞中Ki67+细胞和Ki67+细胞中CD34+细胞比例均显著升高(P<0.05),而细胞周期S和S+G2/M期细胞比例均显著降低(P<0.05);AL组细胞周期G2/M期细胞比例亦显著降低(P<0.05)。RAEB组与RA组以及AL组与RAEB组相比,RAEB组和AL组的G0/G1期、CD34+、Ki67+、CD34+Ki67+、CD34+细胞中Ki67+和Ki67+细胞中CD34+细胞比例均显著升高(P<0.05),而S、S+G2/M期细胞比例均显著降低(P<0.05)。与正常对照组相比,AA组BMMNC中G0/G1、S、G2/M和S+G2/M期细胞比例的差异均无统计学意义(P>0.05),而其CD34+、CD34+Ki67+、CD34+细胞中Ki67+和Ki67+细胞中CD34+细胞比例均显著降低(P<0.05)。与AA组相比,RA组的G0/G1期、CD34+、Ki67+、CD34+Ki67+、CD34+细胞中Ki67+和Ki67+细胞中CD34+细胞比例均显著升高(P<0.05),而S和S+G2/M期细胞比例均显著降低(P<0.05)。结论本研究表明,AA不同于MDS与AL,MDS和AL具有相似的发病机制,并且BMMNC的细胞周期分布及增殖特性的差异可作为RA与AA的诊断和鉴别诊断指标。