表达人二肽基肽酶4(hDPP4)转基因小鼠的主要生物学特性指标测定

目的分析表达人二肽基肽酶4(hDPP4)的转基因小鼠的生物学特性指标,为将其应用于中东呼吸综合征的相关研究提供基础数据。方法本实验室构建了表达hDPP4的转基因小鼠C57BL/6J-TgN(UBC-hDPP4-GFP)CLARS,简称Tg^(hDPP4)。对不同性别(每组5只)的Tg^(hDPP4)小鼠的10项血液生化指标、18项血液生理指标、4~16周龄生长发育指标和8项脏器指数进行测定,并与不同性别(每组5只)的野生型C57BL/6J小鼠进行比较,用统计学方法进行分析。结果与野生型C57BL/6J小鼠相比,Tg^(hDPP4)F_(3)雄鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均降低,血糖和血尿氨素均升高;与野生型C57BL/6J小鼠相比,Tg^(hDPP4)F_(3)雌鼠的丙氨酸转氨酶和碱性磷酸酶均升高;Tg^(hDPP4)F_(3)雄鼠的体质量自5周龄开始均高于野生型雄鼠。结论hDPP4的转入对Tg^(hDPP4)小鼠的血糖、血尿氨素、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶等部分血液生化指标和体质量均产生影响。

啮齿类动物模型在三种人类高致病性冠状病毒传染病中的研究与应用进展

严重急性呼吸综合征(Severe Acute respiratory syndrome,SARS)、中东呼吸综合征(Middle East respiratory syndrome,MERS)和COVID-19都具有较高的致死率,且都缺乏安全有效的疫苗和抗病毒药物,对人类的生命安全构成威胁,会引发严重的公共卫生事件。SARS-CoV、MERS-CoV以及SARS-CoV-2同属冠状病毒属,虽然SARS和MERS无新发病例或新发病例少,但仍可为COVID-19研究提供参考。啮齿类动物是最常见的实验动物,也最常用于人类疾病模型构建。本文将就啮齿类动物模型在SARS、MERS和COVID中的具体应用进行综述,以期助力科研工作者合理选择动物模型提供理论支持。

趋化因子和小胶质细胞在阿尔茨海默病神经炎症中的作用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种以痴呆为主要症状的慢性进行性神经退行性疾病,主要神经病理学特征包括老年斑、神经原纤维缠结、神经炎症和神经元丢失。AD中的β-淀粉样蛋白沉积和错误折叠的Tau蛋白诱导小胶质细胞的激活,引起细胞因子、趋化因子的分泌,共同形成神经炎症反应影响AD的发展。本文总结了小胶质细胞激活和趋化因子释放在AD神经炎症中发挥的作用,为AD的治疗提供新的思路。

胶原三股螺旋重复蛋白1基因真核表达载体的构建及其与microRNA-30b关系初探

目的 构建pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,初步探讨胶原三股螺旋重复蛋白1基因(CTHRC1)与microRNA(简写为miR)-30b的关系。方法 设计特异性引物,通过PCR扩增合成含有CTHRC1 CDS+3′UTR区的序列,并克隆至pIRES2-EGFP真核表达载体,得到pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体。采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切电泳和测序法进行鉴定;通过脂质体转染法转染Huh7及HepG2细胞评价转染效率;将miR-30b mimic、control、pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒和pIRES2-EGFP质粒转染至293T细胞中,分别采用Western Blot和实时荧光定量PCR法检测转染48 h后CTHRC1蛋白的表达水平及miR-30b的表达水平,初步探讨CTHRC1基因与miR-30b的关系。两组间比较采用独立样本t检验。结果 采用NheⅠ/XhoⅠ双酶切pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体,得到5300 bp和1100 bp两条片段,与预期结果一致,测序结果也显示序列与GeneBank公布序列完全一致,表明pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体构建成功。2 μg和4 μg的pCTHRC1-IRES2-EGFP质粒转染Huh7及HepG2细胞,转染效率分别可达90%、89%和85%、83%。在293T细胞中,miR-30b组CTHRC1表达下降(P<0.05)。而过表达CTHRC1组中miR-30b的表达下降(P<0.05)。结论 成功构建了pCTHRC1-IRES2-EGFP真核表达载体;在293T细胞中,CTHRC1基因表达与miR-30b的表达水平相反。

乙肝病毒X基因突变的人肝癌细胞稳转株的构建及其生物学行为变化

目的构建稳定表达乙肝病毒X基因(HBx)突变(C1653T、T1753C)的HepG2、Huh7细胞株,探讨突变点对肝癌细胞生物学行为的影响。方法以含HBx的pLVX-HBx-IRES-tdTomato质粒为模板,点突变合成pLVXHBxC1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒。双酶切和Sanger测序的方法鉴定重组质粒的准确性。空白HepG2、Huh7细胞为对照组,pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVX-HBxC1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒液感染HepG2、Huh7细胞,0.6μg/mL嘌呤霉素筛选单克隆细胞进行扩大培养。免疫染色和Western blot法检测X蛋白(HBX)的表达鉴定稳转株的构建;CCK-8法测定细胞的增殖能力;Western blot法检测细胞中EMT相关信号分子的表达情况。两组间进行独立样本t检验。结果双酶切和Sanger测序结果显示重组慢病毒质粒酶切后片段大小正确,点突变位置及碱基替换正确,成功构建pLVX-HBx-IRES-tdTomato、pLVXHBxC1653T-IRES-tdTomato、pLVX-HBxT1753C-IRES-tdTomato慢病毒质粒。免疫染色及Western Blot结果显示转染HBx及突变型的HepG2、Huh7细胞均有HBX表达,空白对照组均无HBX表达,成功获得稳定表达HBx、HBxC1653T和HBxT1753C的HepG2、Huh7细胞稳转株。增殖实验表明HBx及突变型均较对照组明显促进肝癌细胞的增殖(P<0.01),而HBxC1653T突变较HBx进一步促进肝癌细胞的增殖(P<0.05)。同时HBxC1653T突变明显上调N-cadherin的表达、下调E-cadherin的表达,促进了上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)的发生。结论成功获得稳定表达HBx、HBxC1653T和HBxT1753C的人肝癌细胞HepG2、Huh7细胞稳转株;HBxC1653T突变可导致肝癌细胞的增殖能力增强及EMT发生。