重组反义c-myc腺病毒对人胃癌细胞的体内及体外分子治疗

目的研究重组反义ｃｍｙｃ腺病毒对胃癌细胞的体内外生物学作用．方法采用ＬａｃＺ基因Ｘｇａｌ染色、ＭＴＴ，ＤＮＡ梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪、ＰＣＲ分析、裸鼠致瘤性、裸鼠皮下移植瘤模型实验等方法，对反义ｃｍｙｃ重组腺病毒在人胃癌ＳＧＣ７９０１细胞系中的作用进行体内外研究．结果ＡｄＡＳｃｍｙｃ对ＳＧＣ７９０１细胞能产生明显的生长抑制作用，ＭＴＴ显示生长抑制率为４４１％．ＤＮＡ梯度降解试验、原位末端标记、流式细胞仪显示ＡｄＡＳｃｍｙｃ诱导了ＳＧＣ７９０１细胞凋亡．经ＡｄＡＳｃｍｙｃ处理的ＳＧＣ７９０１细胞裸鼠致瘤性消失．ＡｄＡＳｃｍｙｃ对裸鼠皮下移植瘤模型瘤内注射能有效降低肿瘤的生长速度，生长抑制率为６８９％．

腺病毒介导RA538及反义c-myc在不同细胞系中作用及其机制

目的 比较重组RA538,反义c-myc及LacZ腺病毒(adenovirus,AV)对不同靶细胞的转染效率、生物学特性并探讨其作用的分子机制。 方法 以人胃癌细胞(SGC7901)、食管癌细胞(EC109)及人胚肺二倍体细胞(2BS)系为靶细胞,采用LacZ基因转染X-gal染色、形态学观察、MTT,RT-PCR等方法,研究重组RA538,反义c-myc及LacZ AV对上述细胞的转染效率,生物学作用及其分子机制。 结果 AV-LacZ进行重组腺病毒转导效率检测显示其对SGC7901,2BS细胞具有很高的转导效率,对EC109细胞转导效率较低。AV-RA538及AV-ASc-myc对SGC7901细胞能产生明显的生长抑制效应并诱导凋亡,其生长抑制率分别为76.3％和44.1％。AV-RA538及AV-ASc-myc对SGC7901细胞内源性c-myc,bcl-2基因的表达具有抑制作用。AV-RA538及AV-ASc-myc对EC109细胞及2BS细胞无明显的生长抑制及凋亡诱导作用,AV-RA538对EC109及2BS细胞中内源性c-myc,bcl-2基因的表达无调节作用。 结论 AV载体转导效率很高,能实现目的基因在转导细胞中的高水平表达,但对不同靶细胞的转染效率存在差别。AV-RA538,AV-ASc-myc对SGC7901的生长抑制及凋亡诱导作用可能是通过AV的高效转导及抑制c-myc,bcl-2的表达而实现的。AV-RA538,AV-ASc-myc对食管癌。

重组RA538、反义c-myc腺病毒对正常细胞作用的研究

目的：了解重组RA538、反义c－myc腺病毒载体对正常细胞的影响。方法：采用形态学观察、MTT、RT－PCR等方法，对腺病毒介导RA538及反义c－myc基因对正常人胚肺成纤维细胞（2BS）的影响进行研究。结果：以Ad-LacZ进行重组腺病毒转导效率检测发现腺病毒2BS细胞具有很高的转导效率。AdRA538、Ad－ASc－myc对正常人胚肺2BS细胞无生长抑制及凋亡诱导作用，同时Ad-RS538对2BS内源性c－myc、bcl-2基因的表达也无影响。结论：腺病毒载体具有很高的转导效率，能实现目的基因在转导细胞中的高水平表达。Ad-RA538、Ad-ASc－myc对2BS细胞无明显的生长抑制及凋亡诱导作用，对2BS细胞内源性bcl-2、c－myc基因的表达无调节作用。

Gene therapy with antisense c-myc adenovirus for human gastric carcino-ma cell line in vitro and for implanted carcinoma in nude mice

Objective:To study the effects of recombinant antisense c-myc adenovirus (rAS-c-myc-Ad) on SGG 7901 human gastric carcinoma cell line in for and in nude mice. Methods:The effects of rAS-c-myc-Ad and LacZ-Ad on SGG 7901 gastric carcinoma cells were observed with X-galstaining, MTT, DNA gradient degradation test, TUNEL, flow cytometry, PCR and western blot. The therapeutic effects of rAS-c-myc-Ad on the implanted ax 7901 cells in nude mice were also ob served.Results: rAS-c-myc-Ad significantly inhibited the growth of SGG 7901 cells and induced their apoptosis. After the treatment of rAS-c-myc-Ad, the prolifetion rate of the cells was decreased by 44’ l% in de and SGC 7901 cells failed to form caxcinoma ther they were implanted into nude mice. Injection of rAS-c-myc-Ad into the carcinoma subcutaneously implanted to the nude mice significantly inhibited the growth of the implanted carcinoma with an inhibition rate of 68. 9%. Conclusion: rAS-c- myc- Ad significantly inhibits the growth of SGG 7901 human gastric carcinoma cells in vitro and in nude

反义c-myc重组腺病毒对人肝细胞癌细胞的实验性治疗

目的 研究携带反义c myc的重组腺病毒 (Ad Asmyc)对人肝细胞癌细胞体外、体内的治疗作用及其机制。方法 用Ad Asmyc感染人肝细胞癌细胞系BEL 740 2和QSG 770 1,绘制细胞生长曲线 ,进行克隆形成实验 ,研究Ad Asmyc在体外的抗瘤作用 ,在瘤内注射Ad Asmyc,观察裸鼠皮下移植瘤的生长情况。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及Westernblot检测相关基因表达 ,应用流式细胞术、梯形DNA、DNA原位末端标记研究细胞周期及细胞凋亡情况。结果 感染Ad Asmyc后 ,BEL 740 2及QSG 770 1细胞内c myc基因表达降低 ,肿瘤细胞的生长受到明显抑制 ,而且出现了G1期阻滞及凋亡 ,体内注射Ad Asmyc后裸鼠皮下移植瘤的生长也得到明显抑制。结论 Ad Asmyc在体外及体内可使肝细胞癌出现细胞生长抑制 ,发生凋亡 ,具有明显的抗癌作用 ,是有应用前景的抗癌药物。

腺病毒介导的分化基因RA-538诱导肝癌细胞增殖抑制和凋亡的研究

目的 研究携带分化基因RA 53 8的重组腺病毒 (Ad RA53 8)对人肝癌细胞的抑制作用及机制。方法 Ad RA53 8感染人肝癌细胞系BEL 740 2和QSG 770 1 ,绘制生长曲线 ,克隆形成实验评价Ad RA53 8对肝癌细胞增殖的抑制作用 ,应用流式细胞术、DNA原位末端标记、梯形DNA研究细胞周期及细胞凋亡情况 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)和免疫印迹法 (Westernblot)检测相关基因的表达。结果 感染Ad RA53 8后 ,RA53 8在肝癌细胞内获得了表达 ,并且降低了c myc的表达。肿瘤细胞的增殖受到明显抑制 ,感染Ad RA53 85d后 ,BEL 740 2的活细胞数为(1 0 .0± 3 .7)× 1 0 4,对照组为 (1 72 .7± 1 1 .9)× 1 0 4(P <0 .0 0 1 ) ;QSG 770 1感染Ad RA53 83d后的活细胞数为 (2 3 .0± 4.3 )× 1 0 4,对照组为 (91 .7± 7.2 )× 1 0 4(P <0 .0 0 1 ) ;感染Ad RA53 8后BEL 740 2和QSG 770 1形成的克隆数分别为 1 3± 4和 1 5± 2 ,明显少于对照组的 1 88± 9和 1 75± 9(P <0 .0 0 1 ) ,而且还出现了细胞周期的阻滞和凋亡。结论 Ad RA53 8对肝癌细胞具有明显的抑制作用 。