丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2表达增加促进心肌衰老的作用

目的观察线粒体促凋亡蛋白Omi/HtrA2表达增加对心肌衰老的影响。方法构建心肌特异性过表达Omi/HtrA2小鼠模型,通过Western blotting法检测衰老标志物p53、p21、p16表达水平;分析Omi/HtrA2与衰老标志物表达的相关性;构建Omi/HtrA2稳转H9c2细胞系,通过Western blotting法检测Omi/HtrA2表达增加后衰老指标p53、p21、p16的改变;通过β-半乳糖苷酶(β-gal)染色比较β-半乳糖苷酶染色阳性衰老细胞的改变;通过Omi/HtrA2特异性抑制剂UCF101抑制Omi/HtrA2功能,检测抑制Omi/HtrA2活性后衰老标志物的表达水平及阳性衰老细胞变化。结果(1)与对照组相比,心肌特异性过表达Omi/HtrA2小鼠心肌组织中,Omi/HtrA2表达量显著增加(P<0.01);过表达Omi/HtrA2心肌组织衰老标志物p53、p21、p16增加(P<0.01);(2)在心肌组织中Omi/HtrA2表达量与衰老标志物p53、p21、p16呈正相关(P<0.05);(3)与H9c2细胞(control组)相比,Omi/HtrA2稳转H9c2细胞(Omi组)衰老标志物p53、p21、p16表达增加(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色结果显示,Omi组衰老细胞增加;与Omi组相比,Omi/HtrA2特异性抑制剂UCF101处理组(Omi+UCF101组)衰老标志物p53、p21、p16表达降低(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色阳性细胞减少。结论Omi/HtrA2的表达与衰老标志物呈正相关,表达增加的Omi/HtrA2促进心肌衰老。

不同浓度β1-肾上腺素受体自身抗体对心肌细胞存活影响的差异性

目的观察不同浓度的β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-adrenergic receptor autoantibodies,β1-AA)作用不同时间,对于心肌细胞产生的不同终末效应。方法分别使用10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6 mol/Lβ1-AA作用于乳鼠心肌细胞(neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs)和H9c2细胞检测细胞生存率(24、36、48 h),作用于H9c2细胞检测线粒体功能(ATP含量、线粒体膜电势)(48 h)。结果中、高浓度(10^-7、10^-6 mol/L)β1-AA刺激各个时间,NRCMs、H9c2细胞生存率明显降低;而低浓度(10^-10、10^-9、10^-8 mol/L)使得H9c2细胞轻微增生。高浓度(10^-6 mol/L)β1-AA刺激后,H9c2细胞中ATP含量降低,而中低浓度(10^-10、10^-9、10^-8、10^-7 mol/L)β1-AA使H9c2细胞中ATP含量增加。高浓度β1-AA(10^-6 mol/L)刺激后,H9c2细胞线粒体膜电势降低,低浓度(10^-10、10^-8 mol/L)β1-AA则使H9c2细胞线粒体膜电势增加。结论高浓度β1-AA刺激心肌细胞后表现为损伤作用,低浓度刺激表现为正性作用(即增强线粒体功能、促存活),与作用时间无明显相关,本研究为β1-AA阳性人群中心功能差异的现象提供了病理生理学依据。