鞘内注射驱动蛋白17反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10和NR2B蛋白表达的影响

目的 探讨鞘内重复注射驱动蛋白17（Kinesin superfamily 17,KIF17）反义寡核苷酸对骨癌痛小鼠脊髓水平mLin10（mammalian orthologue of the caenorhabditis elegans LIN-10,mLin10）和NR2B（the 2Bsubunits of N-methyl-D-aspartate Receptor,NR2B）蛋白表达的影响.方法 56只雄性C3H/HeJ小鼠,4～6周龄,体质量20～25 g,随机数字表法分为假手术组（S组,n=20）和骨癌痛组（T组,n=36）.T组小鼠右侧股骨骨髓腔内注射约含2×105个NCTC2472纤维肉瘤细胞的最小必须培养基（α-MEM）20μl制备骨癌痛模型,S组小鼠注射不含肿瘤细胞的α-MEM 20μl.各组于接种前（base）、接种后第4,7,10,14天行痛行为学测试并在相应时间点取24只小鼠用western blot法测定脊髓KIF17、mLin10和NR2B蛋白含量.再将T组剩余24只小鼠随机分为T1,T2,T3组,每组8只.接种后第14天起,连续6d同一时间行鞘内穿刺给药,S组和T1组注射5μl生理盐水,T2组和T3组分别注射KIF17正义、反义寡核苷酸5μg/5μl.连续给药,第2～6天行痛行为学测试,第6天再次测定脊髓相关蛋白含量.结果 接种后7～14d,与S组和基础值相比,T组小鼠自发抬足次数增多,机械缩足阈值降低（P＜0.05）,与基础值[（0.65±0.15）、（1.06±0.06）、（1.01±0.14）]相比,T组小鼠脊髓水平KIF17、mLin 10和NR2B蛋白表达[14 d：（1.13±0.06）、（2.17±0.37）、（1.85±0.32）]增多（P＜0.05）;给药期间,与T1和T2组相比,T3组小鼠自发抬足次数减少,机械缩足阈值升高（P＜0.05）,给药后脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达[（0.88±0.08）、（0.96±0.11）、（1.03±0.08）]减少（P＜0.05）.结论 重复鞘内注射KIF17反义寡核苷酸能明显改善骨癌痛小鼠的痛行为,并抑制了脊髓水平KIF17、mLin10和NR2B蛋白表达上调.

Akt1基因敲除对坐骨神经结扎小鼠痛行为的影响

目的 探讨Akt1基因敲除对坐骨神经结扎小鼠痛行为学的影响.方法 C57BL/6雄性小鼠随机分为Akt1基因敲除组（KO组,n=12）和野生组（WT组,n=12）.在小鼠右侧制作坐骨神经慢性挤压（chronic constriction injury,CCI）模型,测试术前1d和术后1d、3d、5d、7d、10d、14d、17d、21 d的机械缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）.结果 KO组和WT组小鼠的两侧PWMT基础值[右侧：（0.89±0.15）g,（0.87±0.15）g；左侧：（0.97 ±0.19）g,（1.05±0,14）g,P＞0.05]和PWTL[右侧：（7.64±0.71）s,（7.56±0.68）s；左侧：（7.67±0.6）s,（7.64±0.64）s,P＞0.05]差异无统计学意义.术后各测试时间点KO组/WT组小鼠右侧的PWMT和PWTL与其基础值相比均明显减低（P＜0.05）,KO组左侧PWMT和PWTL与WT组小鼠相比差异无统计学意义（P＞0.05）,但是KO组右侧PWMT和PWTL较WT组明显降低（P＜0.05）.结论 Akt1基因敲除后会加重小鼠坐骨神经结扎所诱发的神经病理性疼痛.

脊髓多巴胺D2受体在大鼠神经病理性痛中的作用

目的评价脊髓多巴胺D：受体在大鼠神经病理性痛中的作用。方法健康雄性SD大鼠30只，6—8周龄，体重180—200g，采用随机数字表法，将其分为5组（／2=6）：正常对照组（c组）、假手术组（s组）、神经病理性痛组（NP组）、生理盐水组（N组）和多巴胺D，受体激动剂喹吡罗组（Q组）。采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立大鼠神经病理性痛模型。于术后7d时，N组经30s鞘内注射生理盐水10μl，Q组经30s鞘内注射多巴胺D：受体激动剂喹吡罗10μg（溶于10μl生理盐水中）。于术前1d、术后3和7d、给药后30min、1、2、4、8和16h（T。）时，测定机械缩足反应阈（MWT）和热缩足潜伏期（TwL）。结果C组和S组各时点MWT和TwL比较差异无统计学意义（P〉0．05）；与C组和S组比较，NP组、N组和Q组T1-8时MWT降低，TWL缩短（P〈0．05）；与NP组比较，N组各时点各指标差异无统计学意义（P〉0．05），Q组T4-6时MWT升高，TWL延长（P〈0．05）。结论脊髓多巴胺D2受体功能抑制参与了大鼠神经病理性痛的维持。

神经痛大鼠脊髓胶质细胞源性神经营养因子参与多巴胺D2受体激动剂对痛觉过敏的调制作用

目的 研究鞘内注射多巴胺D2受体激动剂喹吡罗对坐骨神经慢性压迫损伤大鼠脊髓水平胶质细胞源性神经营养因子表达的影响,探讨其介导抗伤害作用的可能机制. 方法 实验1：采用完全随机分组方法将30只成年雄性SD大鼠制作坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury of sciatic nerve,CCI）模型分为5组（每组6只）：CCI＋生理盐水（NS组）、CCI＋喹吡罗0.1 μg（Q0.1组）、CCI＋喹吡罗1μg（Q1组）、CCI＋喹吡罗5 μg（Q5组）、CCI＋喹吡罗10 μg（Q10组）,分别在建模后第7天鞘内注射0.1、1、5、10 μg喹吡罗,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl.于给药前及给药后0.5、1、2、4、8、16h测定大鼠术侧后足机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）和热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）.实验2：将54只成年雄性SD大鼠制作CCI模型,并采用完全随机分组方法分为3组（Q5组、Q10组、NS组,每组18只）：Q5组、Q10组分别在建模后第7天鞘内注射5、10μg喹吡罗后0.5、1、2、4、8、16h处死取材,NS组单次鞘内注射生理盐水10μl;另取6只正常大鼠作为模型对照组（M组）,另取6只正常大鼠作为对照组（C组）.采用免疫印迹法测定脊髓背角胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic fact,GDNF）蛋白表达的变化. 结果 实验1：与NS组比较,Q0.1组注药后各时间点PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）,Q1组注药后2 h PWMT[（4.3±1.5）g]及PWTL[（13.2±1.6）s],Q5组注药后1,2、4 h PWMT[（4.7±1.6）、（5.3±1.6）、（4.7±2.1）g]和PWTL[（14.0±1.7）、（15.2±1.5）、（13.4±1.6）s],Q10组注药后1、2、4 h PWMT[（6.0±1.3）、（7.3±1.0）、（5.3±2.1）g]和PWTL [（15.3±1.8）、（17.5±1.2）、（14.9±1.7）s]明显升高（P＜0.05）.实验2：与C组比较,M组GDNF表达（0.95±0.09）明显升高（P＜0.05）.与M组和NS组比较,GDNF的表达Q5组[（1.47±0.12）、（1.24±0.05）]、Q10组[（1.63±0.08）、（1.27±0.06）]明显增加（P＜0.05）,并且可以至少持续至注药后4h. 结论 鞘内注射喹吡罗能够显著增加脊髓水平GDNF表达,同时伴有大鼠痛行为改善,GNDF的表达上调可能参与了多巴胺D2受体激动剂对神经病理性疼痛的调制过程.

鞘内注射KN93对神经病理性疼痛大鼠痛行为学的影响

目的观察鞘内注射钙，钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin dependent proteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）抑制剂KN93对腰背根神经节慢性压迫（chronic compression of dorsal root ganglion，CCD）大鼠神经病理性疼痛的影响。方法SD雄性大鼠48只，按随机数字表法分为3组：假手术组（S组，11只）、CCD模型组（C组，11只）、KN93组（K组，26只）。C组、K组制备CCD模型，S组仅暴露L。椎间隙。术后14dS组和C组鞘内注射10％溶媒二甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）25μl，K组鞘内注射溶于10％DMSO的KN9350μg／25μl。各组在造模前1d（t1），造模后4（t2）、7（t3）、10（t4）、14d（t5）随机取8只大鼠检测热缩足反射潜伏期（paw withdrawal thermal latency，PWTL）和机械缩足反射阈值（paw withdrawal mechanical threshold，PWMT）；并于鞘内注射DMSO或KN93后2（t6）、4（t7）、10（t8）、12（t9）、24h（t10）时进行相同的行为学检测。各组于给药前以及K组的给药后各时间点（t6．t9）随机取8只大鼠处死并取脊髓腰膨大部分，采用Westernblot方法检测CaMK11蛋白表达水平。结果鞘内给药后t6．t9时点，K组PWTL[（14．7±1．6）、（18．6±1．8）、（21．2±2．5）、（15．3±2．0）S]，PWMT[（12．0±1．0）、（15．4±1．4）、（17．5±1．7）、（14．9±1．6）g]比C组PWTL[（11．6±1．8）、（10．7±1．7）、（11．7±2．4）、（9．9±1．7）s]，PWMT[（8．4±0．9）、（9．6±1．6）、（10．6±1．7）、（8．9±1．3）g]升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。给药前及给药后t10时，K组PWTL、PWMT与C组比较，差异无统计学意义（P〉0．05o和t5时CaMKII值（1．55±0．12）比较，给药后t6～t9时间点CaMKⅡ蛋白[（1．37±0．11），（1．15±0．12）、（0．75±0．08）、（0．86±0．12）]表达下降（P〈0．05）。结论鞘内注射KN93可有效缓解神经病理性疼痛大鼠的疼痛反应。

脊髓蛋白激酶B在瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏中的作用

阿片类药物是术后镇痛的常用药物,但长期应用会诱发痛觉过敏,影响镇痛效果.超短效阿片受体激动剂瑞芬太尼诱发的痛觉过敏明显强于其他阿片类药物[1].探讨其诱发痛觉过敏的机制,对防治措施的选择极为重要.研究表明,阿片类药物诱发痛觉过敏与脊髓背角神经元敏化有关[2].蛋白激酶B（Akt）是重要的细胞内信号转导分子,参与调节细胞代谢、细胞存活、细胞周期调控、转录调控等多种生物学过程.研究表明,Akt活化后参与了痛觉过敏的形成[3].但Akt是否参与了瑞芬太尼诱发的痛觉过敏尚有待研究.本研究拟探讨脊髓Akt在瑞芬太尼诱发切口痛小鼠痛觉过敏中的作用.

鞘内注射不同浓度蛋白激酶B抑制剂Ⅳ对瑞芬太尼痛觉过敏的影响

目的 通过观察鞘内注射不同浓度的蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）抑制剂Ⅳ对切口痛瑞芬太尼痛觉过敏小鼠痛行为学的影响,初步探讨Akt在阿片诱导的痛觉过敏（opioid-induced hyperalgesia,OIH）中的作用及其机制. 方法 C57BI/6小鼠60只,采用随机数字表法分为5组（每组12只）：切口痛＋二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）组（Ⅰ组）、瑞芬太尼＋DMSO组（R组）、Akt抑制剂Ⅳ0.08 μg/10μl组（A1组）、Akt抑制剂Ⅳ0.16 μg/10μl组（A2组）、Akt抑制剂Ⅳ0.32 μg/10μl组（A3组）,其中DMSO是Akt抑制剂Ⅳ的溶媒.所有分组均在右侧足做切口痛,R组、A1组、A2组及A3组造模同时腹部皮下泵注瑞芬太尼（0.04 mg/kg）30 min.R组及A1组、A2组及A3组术前30 min分别鞘内给予10％ DMSO 10μl和相应浓度的Akt抑制剂Ⅳ10μl.各组小鼠在术前1 d（T0）及术后6 h（T1）、1（T2）、2（T3）、3（T4）、5（T5）、7 d（T6）检测术侧后足热缩足潜伏期（paw withdrawal thermal latency,PWTL）及机械缩足阈值（paw mechanical withdrawal threshold,PMWT）. 结果 与Ⅰ组和基础值比较,R组、A1组、A2组及A3组术后各时间除术后7d外PMWT和PWTL均降低（P＜0.05）;与R组比较,A1组、A2组及A3组术后6h、1、2d的PMWT [（5.03±0.62）、（6.10±0.86）、（5.92±0.88）、（6.01±1.02） g;（4.07±0.79）、（4.73±0.48）、（4.77±0.59）、（4.86±0.56）g;（5.05±0.75）、（5.99±0.63）、（5.99±0.71）、（6.00±0.81）g]和术后1、2、3d的PWTL明显升高[（0.48±0.06）、（0.60±0.08）、（0.61±0.07）、（0.58±0.04）s;（0.38±0.07）、（0.50±0.08）、（0.48±0.06）、（0.45±0.08） s;（0.37±0.09）、（0.52±0.09）、（0.49±0.12）、（0.58±0.21）s]（P＜0.05）;A1组、A2组及A3组的各时间点的PWMT和PWTL差异无统计学意义（P＞0.05）; 结论 预先鞘内注射Akt抑制剂Ⅳ能够有效缓解瑞芬太尼诱发的痛觉过敏,而且没有剂量依赖性.

黑皮质素-4受体在神经病理性疼痛中的作用

背景 黑皮质素系统在调节能量平衡、食物摄取、心血管功能和性功能中起重要作用,近年来发现其在神经病理性疼痛中也发挥着重要作用,尤其是黑皮质素-4受体（melanocortin receptor 4,MC4R）. 目的 阐明MC4R在神经病理性疼痛发生发展中的作用及机制,为寻找神经病理性疼痛的新靶点提供思路。 内容 MC4R与阿片受体、P38有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）、神经肽Y（neuropeptide tyrosine Y,NPY）、降钙素基因肽（calcitonin gene-related protein,CGRP）等相互作用,参与神经病理性疼痛的产生和维持。主要综述近几年来MC4R在神经病理性疼痛中的研究进展。趋向 黑皮质素受体很可能是潜在的治疗神经病理性疼痛的新靶点。