疟原虫疫苗候选蛋白pba-114320的原核表达载体构建

将疟原虫的膜表面蛋白基因pba-114320构建到原核表达载体PET32a(+)上,得到重组原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。方法:通过化学合成的方法得到目的基因,通过使用限制性内切酶BamHI-XhoI酶切目的基因与载体,回收酶切产物,进行连接并转化到感受态top10中,将阳性克隆送至测序公司进行测序,测序结果跟标准序列进行比对。结果:成功构建原核表达质粒PET32a(+)-pba-320。

2019新型冠状病毒核衣壳蛋白的表达及在诊断方面的应用

目的对2019新型冠状病毒(2019-novel Coronavirus,2019-nCoV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)进行原核表达、纯化与鉴定,并应用于2019-nCoV血清学诊断。方法合成2019-nCoV NP基因,克隆至pET28a载体中,构建表达质粒,并进行诱导纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE、间接ELISA、Western blot(WB)、免疫层析法进行鉴定。优化间接ELISA反应条件,进行血清抗体检测。结果重组NP经镍柱纯化后SDS-PAGE电泳显示相对分子质量约50×10^3,与预期一致;间接ELISA、WB表明其能与2019-nCoV感染患者血清特异性结合;用免疫层析法发现对NP检测限为0.2 ng/ml;间接ELISA检测32份2019-nCoV感染者血清及对照血清,发现二者结果可见明显分群。结论原核表达的NP具有良好的免疫原性,可用于制备血清学诊断试剂。