当归苯丙氨酸解氨酶基因片段克隆和组织特异性表达分析

苯丙氨酸解氨酶(PAL)在高等植物苯丙烷类代谢中具有重要作用,与植物体内很多重要的次生代谢产物的合成密切相关。当归主要药效成分阿魏酸是苯丙烷类代谢途径中的产物之一。为了探究阿魏酸生物合成和积累的机理,本研究克隆了当归苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)部分序列,运用荧光定量PCR方法分析该基因在当归不同组织部位的表达差异。根据已经克隆的植物PAL保守序列设计一对扩增引物,以当归叶片总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)方法扩增出PAL片段并连接到pGEM-T Easy载体上,转化大肠杆菌DH5α,阳性克隆经PCR检测后测序,得到一段706bp的序列(登录号:KJ000258),内含终止密码子TAA,编码232个氨基酸,与GenBank中注册的伞形科植物珊瑚菜等6个物种的PAL核苷酸序列同源性和氨基酸序列同源性都在80%以上;运用SYBR Green荧光定量PCR方法,以当归肌动蛋白基因Actin为内参基因,检测PAL在当归不同组织中的表达量,结果显示PAL在叶片中表达量最高,其次是茎和根,叶片和茎中表达量分别是根中表达量的7.5和2.7倍。

基于正交法的旋流泵结构优化

对80X-13.5型旋流泵的7种结构参数重新进行配置,同时引入正交试验法,设计一个7因素4水平的正交方案,对各种结构进行优化配置得到更好的旋流泵结构配置方案.以分块非结构六面体网格划分计算模型,运用雷诺平均N-S方程和标准的k-ε双方程湍流模型结合SIMPLEC算法,对各种不同结构方案进行数值模拟分析,得到3种比原模型更优秀的旋流泵结构方案.

瑞氏木霉内切葡聚糖酶II在大肠杆菌中的重组表达及重组酶性质测定

将不含信号肽的瑞氏木霉内切葡聚糖酶II(Cel5A)的cDNA克隆到pET-28a(+)表达质粒上,与其N末端6个组氨酸标签序列融合,构建成pET-28a(+)-egl2表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.利用低温诱导策略,成功表达出活性重组蛋白.Western blot结果显示重组Cel5A相对分子分量大约为43000.进一步对重组Cel5A进行Ni-NTA亲和层析柱纯化并对其进行酶学性质测定,结果显示以羧甲基纤维素钠为作用底物时重组酶最适作用pH为4.5,最适作用温度为60℃;重组酶热稳定性较好,在65℃及以下保温1.5h,活性仍相当稳定.Mn2+对Cel5A的酶活有促进作用,Fe3+和Cu2+有抑制作用,其它金属离子和EDTA对酶活没有明显影响.底物特异性研究表明,重组Cel5A只能水解混合键葡聚糖和羧甲基纤维素钠,对混合键葡聚糖的水解能力是其对羧甲基纤维素钠水解能力的6.7倍,但对微晶纤维素、Glass microfiber filters、木聚糖、阿拉伯木聚糖和木葡聚糖没有水解作用.

双吸离心泵径向力数值分析

应用CFD软件对某型双吸离心泵的内部流场进行了数值计算,给出了不同工况下叶轮出口与蜗壳耦合面静压沿周向、轴向的分布规律.通过对比试验曲线与数值计算外特性曲线,发现两者比较吻合,相对误差小于5%,且数值计算叶轮出口周向压力分布曲线与试验曲线趋势一致.采用径向力出口压力法计算模型,计算了各工况下离心泵叶轮所受的径向力及其分量.结果表明:应用数值计算结果而建立的离心泵径向力计算模型具有一定的准确性.小流量工况时,径向力随流量的增加而减少;设计流量工况附近时,径向力达到最小值且不为0;大流量工况时,径向力随流量的增加而增加.

基于OPLS模型分析生态因子对当归质量的影响

目的基于OPLS模型分析生态因子对当归质量的影响。方法采用HPLC法测定10个产地当归药材中9种主要活性成分的含量,利用主成分分析法对其进行综合质量评价。运用OPLS法建立当归药材质量和生态因子回归模型,分析两者之间相关性和变量投影重要性。结果不同地区生态因子对当归活性成分积累影响很大,在10种生态因子中平均气温、平均最低气温、平均日降水量和日照时数对当归质量影响最显著。结论明确当归活性成分与生态因子之间的关系,可为当归药材规范化种植,提高当归的产量和质量以及指导临床合理用药提供参考。

柴胡斑枯病病原及其生物学特性

据2011-2014年调查,甘肃省柴胡斑枯病发生严重,常年发病率为13%~21%,严重度1~2级。本研究以形态学和分子生物学方法相结合,明确了甘肃省柴胡斑枯病病原及其生物学特性。甘肃省柴胡斑枯病菌分生孢子器近球形或球形,黑褐色,高66.4~90.2μm,平均77.5μm;直径57.3~90.0μm,平均70.5μm。分生孢子针形、无色,有些稍弯曲,具1~3隔膜,大小(13.0~26.0)μm×(1.5~3.0)μm,平均19.0μm×2.0μm。通过ITS、LSU、RBP2和β-tubline多基因位点构建系统发育树,将柴胡斑枯病病原鉴定为柴胡壳针孢Septoria bupleuricola Sacc.。该菌菌丝生长、分生孢子萌发和产孢的温度范围分别为0~35℃、0~35℃、5~35℃,最适温度分别为20~25℃、15℃、10~15℃;连续光照有利于菌丝生长、孢子萌发和病菌产孢;菌丝生长、孢子萌发和产孢的适宜pH范围分别为4.0~10.0、4.51~9.19和5.0~9.0,最适pH分别为5.0、6.49和5.5;此菌在相对湿度75%以上可萌发,以水中萌发最好;柴胡叶或根渍液对孢子萌发有较强的促进作用。表明柴胡壳针孢菌丝生长和孢子萌发的适宜温度偏低,因此该病害在气温偏低及持续阴雨结露条件下发生较重。

放线菌10885除草活性物质的分离鉴定

雪白链霉菌SPRI-10885菌株的发酵代谢产物对多种阔叶杂草和禾本科杂草具有显著的除草活性,通过溶剂萃取、柱层析分离、HPLC等手段,从中分离得到5个主要活性物质。经过质谱、核磁共振等分析,确定10885-Ⅰ分子质量为453、分子式为C18H23N5O9、10885-Ⅱ分子质量为535、分子式为C23H29N5O10、10885-Ⅲ分子质量为551、分子式为C23H29N5O11;另外两个分子质量分别为254和270,分子式分别为C15H10O4和C15H10O5。综合各种谱图分析确定前3个化合物的结构分别与文献报道的除草素herbicidin B、F、A相同,后两个与大豆异黄酮类物质三羟基异黄酮(genistein)、黄豆甙原(daidzein)一致。

试论新形势下成人高等教育的科学发展观

普通高校成人教育是我国教育的重要组成部分,在我国加入WTO和信息技术高速发展以及全面建设小康社会的重要战略机遇期,面临着更多的机遇和挑战。研究普通高校成人教育的科学发展观,对更好地指导普通高校成人教育的改革和发展具有一定的指导意义。

基于形态学和多基因位点鉴定甘肃秦艽斑枯病菌

目的:旨在明确甘肃省栽培秦艽斑枯病病原菌分类地位及其生物学特性,为该病的防控提供一定的理论依据。方法:通过形态学和分子生物学方法相结合确定病原分类地位,利用常规植物病原学培养的方法测定病原菌生物学特性。结果:秦艽斑枯病菌分生孢子器近球形、扁球形、黑褐色,55.3~125.8μm×51.7~115.3μm(平均83.3μm×83.2μm);分生孢子细镰刀形、披针形,具1~5个隔膜,多为3个,大小18.8~30.6μm×2.4~3.5μm(平均23.5μm×3.2μm)。通过ITS、LSU、RBP2和β-tubline多基因位点构建系统发育树,将秦艽斑枯病病原菌鉴定为龙胆壳针孢Septoria gentianae Thüm.。该菌菌丝生长、分生孢子萌发和产孢的温度范围分别为0~35℃、5~30℃和15~25℃,最适温度分别为20~25、20和15℃;连续光照有利于菌丝生长,连续黑暗有利于孢子萌发和病菌产孢;此菌在相对湿度75%以上时均可萌发,以水中萌发最好;菌丝生长、分生孢子萌发和产孢的适宜p H范围分别为4.0~10.0、4.51~9.19和5.0~8.0,最适p H为6.0、6.49和6.5;土壤浸渍液以及秦艽叶或根浸渍液对孢子萌发有较强的促进作用。结论:秦艽斑枯病是秦艽生长中的主要病害,在栽培过程中应注意药剂防治。

提高矩阵变换器传输性能的优化开关调制函数

用数学方法推导出矩阵变换器主电路开关矩阵调制函数的通解，针对变换器不同的传输性能指标，可对开关调制函数进行相应的优化，函数形式比较简单．在正弦输入和输出的目标下，可获得变换原理限定的最高电压传输率和接近为１的功率因数．给出了部分计算机仿真及实验结果．

论改革开放以来党内基层民主建设的进程、特点与基本经验

党内民主对人民民主具有重要的示范带动作用,而党内基层民主又是党内民主建设的基础性工程。在党的历史上,尤其是改革开放以来,重视党的基层民主建设一直是我党的重要方针,党内民主的实践创新活动在基层组织显示了蓬勃的生机与活力。十一届三中全会以来党内基层民主建设形成了自身的特点,并取得了丰富的经验。

敦煌石室大宝胶囊对衰老大鼠血清白细胞介素-4、-10含量和海马区热休克蛋白86基因蛋白表达的影响

目的观察以健脾补肾-涤痰祛瘀法为指导的敦煌石室大宝胶囊(DHDB)对衰老模型大鼠血清白细胞介素(IL)-4、IL-10含量和海马区热休克蛋白(HSP)86基因和蛋白表达的影响。方法受试动物按随机数字表法分为空白组(n=10)和模型组(n=50)。采用D-半乳糖(0.125 g/kg)皮下注射建立衰老模型并筛选符合衰老模型的大鼠,按随机数字表法分为模型组、DHDB高、中、低剂量组(0.8、0.4、0.2 g/kg)和阳性对照组(0.4 g/kg吡拉西坦),经药物干预后分别测定各组大鼠血清IL-4、IL-10含量和海马区HSP86基因和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠学习能力下降,血清IL-4含量显著降低、IL-10含量显著增高,海马区HSP86基因和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);DHDB各剂量组大鼠学习能力提高,血清IL-4含量显著增高而IL-10含量显著降低,海马区HSP86基因和蛋白表达水平显著增高,且以高剂量DHDB作用为优(P<0.05)。结论 DHDB具有提高衰老大鼠学习记忆能力,调节血清IL-4、IL-10含量正常分泌及促进海马区HSP86基因和蛋白表达的作用。

斩控式变流器主电路开关矩阵调制函数的优化

用数学方法推导出斩波控制变流器主电路开关矩阵调制函数的通解，结合实际电路运行的物理过程，求得优化开关调制函数。函数形式适用于各种类型的斩控变流电路。给出了计算机仿真及部分实验结果。

钾素营养水平对当归光合生理的影响

目的:研究钾素营养水平对当归光合特性及荧光参数的影响,为制定当归规范化生产中合理施用钾肥技术提供理论依据。方法:通过大田栽培试验研究不同施肥方式下,施K_2O量150 kg·hm^(-2)(K_(150))、300 kg·hm^(-2)(K_(300))和450 kg·hm^(-2)(K_(450))等钾素营养水平对当归成药期净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、胞间CO_2浓度(Ci)、水分利用率(WUE)、表观CO_2利用效率(CUE)等光合指标及最小初始荧光(F_0)、光化学量子效率(F_v/F_m)、光化学淬灭系数(qP)、电子传递速率(ETR)、PSⅡ反应中心的激发能捕获效率(F_(v')/F_(m'))、PSⅡ反应中心电荷分离实际量子效率(ΦPSII)等叶绿素荧光参数的影响。结果:无论是全部基施,还是基施50%+叶盛期追施50%,随钾素营养水平的提高,当归叶片的Pn、Gs、Tr、WUE、CUE、F_v/F_m、qP、ETR、F_(v')/F_(m')、ΦPSII、叶绿素含量都有所提高,最适钾素营养水平为K_2O 300 kg·hm^(-2)。结论:钾素营养对当归叶片的光合作用和叶绿素荧光特性有不同程度地影响,适宜的钾素营养水平有利于改善当归叶片光合生理特性,促进初生代谢产物的合成与积累。

当归延伸因子AsEF-1β基因的克隆及胁迫应答分析

延伸因子1β(EF-1β)是蛋白质生物合成过程中肽链延长必需的调节因子之一。该研究采用同源克隆和RACE扩增技术克隆当归EF-1β基因序列,分析该基因序列特征、蛋白结构特点及UV-B辐射胁迫下的组织响应表达,以揭示当归栽培生境变迁过程中对UV-B胁迫适应的分子机制。结果显示:(1)成功克隆获得当归EF-1β基因全长序列(950 bp),编码225个氨基酸,命名为AsEF-1β(GenBank登录号:MG736314);AsEF-1β蛋白的分子量为24.5 kD,理论等电点为4.48,属亲水性氨基酸,在其C末端具有一个EF-1B超蛋白家族的典型结构域和保守区,鸟嘌呤核苷酸交换结构域;其氨基酸序列与同为伞形科的胡萝卜氨基酸序列相似性最高,达93%。(2)qRT-PCR分析结果显示,AsEF-1β基因在当归根部的表达量显著高于茎和叶(P<0.05);UV-B辐射胁迫下,茎及叶中的表达量均上调,分别是自然光照处理的2.43和3.76倍。研究表明,AsEF-1β基因可能参与当归对UV-B辐射胁迫的适应过程,为深入研究其在药用植物生长发育、逆境抗性形成及药效物质的生物合成代谢过程的生态调控奠定了基础。

钾素对当归碳氮代谢产物及其相关酶活性的影响

目的:研究不同钾素水平对当归碳氮代谢及相关酶的影响,揭示钾素影响当归品质形成的生理学本质,为当归生产合理施用钾肥提供理论依据。方法:通过大田栽培试验研究不同施肥方式下,施K2O量150 kg/hm^2、300 kg/hm^2和450 kg/hm^2等钾素水平对叶盛期当归叶片中SPS、PK、SS、MDH、FUM、AGP、GAPDH、GS、GOGAT、NR、尿囊素酶等碳氮代谢相关酶活性及葡萄糖、果糖、蔗糖、总氨基酸、总叶绿素等碳氮产物及生长指标的影响并进行相关分析。结果:在全部基施和50%基施+50%追施两种施肥方式下,施K2O量为300 kg/hm^2的处理为最佳施肥量,其对当归叶片中的SPS、PK、SS、MDH、FUM、AGP、GAPDH、GOGAT、尿囊素酶的活性及果糖、蔗糖、总氨基酸、总叶绿素的含量及生长指标具有显著地促进作用,而对GS、NR活性具有显著抑制作用。产量与代谢产物相关分析表明,葡萄糖、果糖、蔗糖、叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素及总氨基酸含量均与根粗之间具有显著相关性(P<0.05),果糖、蔗糖及总氨基酸含量与地下干重之间具有显著相关性(P<0.05),说明可以通过根粗和地下干重预测当归产量。结论:适量施用钾肥能调节当归叶片碳氮代谢产物的合成与积累,提高当归产量,其生理基础是提高了相关代谢酶的活性及相关代谢产物的含量。

当归施肥技术研究现状及展望

为了研究分析施肥对当归生长和品质的影响,对我国道地药材当归的需肥规律、肥料效应与施肥技术的研究进行综述,分析当归施肥技术研究中需要解决的关键问题,并对研究重点进行展望。

加强行业文化建设，树干线公路新形象

行业文化是行业内行为、工作态度．价值观以及关系设定的规范，是行业成员的共同价值观体系，独具特色，区别于其他组织。应进一步加强行业文化建设，发挥行业文化的导向、规范．凝聚、激励．辐射作用，真正树立干线公路新形象。

适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法研究

为了有效消除次生物质、多糖和多酚类物质的严重干扰,获得高质量适宜于实时荧光定量分析的当归总RNA,本研究采用CTAB法、试剂盒法和Trizol法分别提取当归根、茎、叶组织的总RNA,并通过紫外可见光分光光度计、非变性琼脂糖凝胶电泳和反转录荧光定量PCR检测总RNA的纯度、产率、完整性及质量。结果表明:CTAB法提取的当归根、茎、叶组织总RNA纯度较高、完整性较好且叶组织总RNA得率较高;试剂盒法所提的总RNA完整性亦较好,但纯度略差且各组织的得率均较低;Trizol法提取的茎组织总RNA能满足荧光定量PCR要求,但提取的根和叶组织总RNA均出现严重污染,无法满足后续研究要求。因此,CTAB法是一种经济、可靠、适宜当归实时荧光定量分析的总RNA提取方法。本研究结果为今后有效开展当归分子生物学研究奠定了方法学基础,也为其他药用植物总RNA的提取提供了参考。

改性凹凸棒基复合肥对当归光合特征及叶绿素荧光参数的影响

探明改性凹凸棒基复合肥对当归光合生理的影响。设T1(30%改性凹凸棒基复合肥)、T2(磷酸二铵)和CK(不施肥)田间试验,研究凹凸棒基复合肥对当归农艺学性状、叶绿素含量、光合特性及叶绿素荧光参数的影响。结果表明,不同施肥处理能够促进当归株高生长和株展伸长且出苗数增多;不同施肥处理均可显著提高当归叶绿素含量,以T1最高,分别比CK和T2高19%和4%;T1和T2均可以提高当归叶片的净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、胞间CO2浓度(Ci)和水分利用率(WUE),且以T1处理效果最显著;在各处理中T1的PSⅡ反应中心电荷分离实际量子效率(ΦPSⅡ)、电子传递速率(ETR)、光化学淬灭系数(qP)、PSⅡ的潜在活性(Fv/Fo)均为最高水平。叶绿素含量、净光合速率、蒸腾速率、电子传递速率和光化学淬灭系数等数据显示,30%凹凸棒改性复合肥对当归光合特性和荧光参数的影响效果最佳。本试验为指导当归合理施肥种植,提高产量品质提供了重要的理论依据。