布雷菲尔德菌素A经内质网应激途径诱导的肝癌细胞HepG2发生p53依赖性死亡

目的探讨布雷菲尔德菌素A(BFA)作为肝脏肿瘤治疗药物的作用机制和可能的临床应用价值。方法采用细胞毒性试验(MTT法)观察BFA对肝癌细胞Hep G2的细胞毒性作用,采用定量荧光PCR法、蛋白杂交法观察BFA对Hep G2细胞有关囊泡转运相关、内质网应激相关基因和蛋白表达的影响。结果用不同浓度的BFA处理肝癌细胞24 h和48 h后,可引起肝癌细胞死亡,并呈现剂量依赖关系。(0.1~5)μg/m L BFA处理组细胞存活率与阴性对照组比较,差异具有统计学意义(24 h和48 h的H值分别为45.7和45.9,P<0.01)。2.5μg/m L BFA可引起HepG2细胞内COPI、Arf1、COPII和Sar1b的基因表达显著升高(24 h实验组的F值分别为72.5、41.4、107和134,P<0.05;48 h实验组的F值分别为69.2、51.4、49.8和170,P<0.05)。2.5μg/m L BFA处理24 h、48 h后可引起HepG2细胞内BiP(GRP78)和calnexin基因表达水平明显升高,其中BiP(GRP78)在24 h和48 h的基因表达分别为阴性对照组的46倍和36倍,calnexin在24 h和48 h的基因表达分别为对照组的10倍和5倍。2.5μg/m L BFA处理24 h、48 h后可引起HepG2细胞内Bi P(GRP78)蛋白表达明显升高,约为对照组的2倍,calnexin的表达明显减少,几乎无法检测到。2.5μg/m L BFA引起HepG2细胞内p-AMPKα(Thr 172)和p-p53蛋白表达明显增加。结论BFA可通过内质网应激途径引起肝癌细胞发生p53依赖的死亡,对肝癌细胞有一定的杀伤作用。