miR-382通过PGC-1α对三阴性乳腺癌细胞株4T1生物学特性的影响

目的研究乳腺癌4T1细胞内miR-382下调PGC-1α对细胞生物学特性的影响。方法①以4T1细胞作为研究对象,miR-382mimics或抑制性探针anti-miR-382转染4T1细胞后,以qRT-PCR检测4T1中miR-382水平变化,qRT-PCR和Western blot检测各组PGC-1α的表达水平变化;②荧光素酶报告基因检测miR-382与PGC-1α3′UTR的结合位点;③将miR-382mimics或对照miR分别与pCDNA3.1或pCDNA-PGC1α共转染于4T1细胞,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的变化;CCK8实验检测细胞增殖活力的变化;皮下移植瘤实验和尾静脉肺移植瘤实验分别检测小鼠体内肿瘤生长及肺转移的变化。结果转染miR-382 mimics之后乳腺癌细胞PGC-1α表达明显降低(P<0.05),转染抑制性探针anti-miR-382后PGC-1α表达明显升高(P<0.05);miR-382与PGC-1α存在靶向调控核心序列,其作用位点位于PGC-1α3′UTR 565-582(核心序列ACAACTT)。相比对照+pCDNA3.1组,miR-382+pCDNA3.1组的细胞迁移和增殖活力明显降低,4T1皮下移植瘤体积和尾静脉移植瘤肺转移灶的面积显著减小(P<0.05);对照+pCDNA-PGC-1α较对照+pCDNA3.1组,细胞迁移和增殖活力明显提高,4T1皮下移植瘤体积和尾静脉移植瘤肺转移灶的面积显著增加(P<0.05);miR-382的抑瘤效应因PGC-1α过表达而被阻断。结论miR-382可能通过PGC-1α抑制4T1细胞株的增殖和肺转移能力,其作用位点可能位于PGC-1α3′UTR 565-582。

过表达miR-382的肿瘤相关巨噬细胞对三阴性乳腺癌生物学特性的影响

目的探讨microRNA-382(miR-382)在肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)中的表达对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)细胞(4T1)生物学特性的影响。方法以小鼠腹腔巨噬细胞(mouse peritoneal macrophages,PMs)作为研究对象,分为PMs组,TAMs组和L-TAMs组;Western blot与qRT-PCR检测极化指标(IL-10、TNF-α)、miR-382、PGC-1α和NF-κB的表达变化;流式细胞术检测TAMs的极化变化(CD86、CD206);激光共聚焦显微镜成像检测PGC-1α和NF-κB的表达变化;以4T1细胞作为研究对象,分为4T1组,4T1+PMs组和4T1+L-PMs组,流式细胞术检测细胞凋亡率与细胞周期;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与PMs组比较,TAMs组IL-10、CD206和PGC-1α表达明显增加(P<0.05),miR-382、TNF-α和CD86表达明显降低(P<0.05),NF-κB转录活性显著降低(P<0.05),而L-TAMs组TNF-α、CD86和miR-382表达明显增高(P<0.05),IL-10、CD206和PGC-1α表达明显降低(P<0.05),NF-κB转录活性显著增强(P<0.05);与4T1组比较,4T1+PMs组侵袭能力明显增强(P<0.05),凋亡率明显下降(P<0.05),而4T1+L-PMs组侵袭能力明显下降(P<0.05),凋亡率明显增高(P<0.05)。结论 TAMs通过调节miR-382的表达可抑制TNBC的侵袭和增殖,其机制可能与TAMs中miR-382抑制PGC-1α的表达、增强NF-κB的转录活性,进而抑制TAMs的M2分化有关。