冷沉淀临床应用的新进展

冷沉淀是重要的血液成分之一 ,随着人们对成分输血认识的提高和对冷沉淀研究的不断深入 ,冷沉淀已被临床广泛应用。作者就近年来冷沉淀临床应用的新进展作一综述。

胶体金法检测输血相关传染病的风险评估

目的:评估胶体金免疫层析法(G ICA)在不同温度、不同时间下检测输血相关传染病(HBsAg、抗-H IV、抗-HCV、梅毒抗体)的风险。方法:随机选取酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg、抗-H IV、抗-HCV、梅毒抗体阳性的115例标本,采用G ICA法分别在4℃、22℃、37℃进行检测,并在5分钟、10分钟、20分钟和30分钟4个时间段观察结果并与ELISA检查结果进行比较。结果:观察30分钟G ICA检测HBsAg、梅毒抗体与ELISA法的符合率为96.7%,抗-HCV与ELISA的符合率为93.3%,抗-H IV与ELISA法的符合率为100%,差异无统计学意义(P>0.05)。在G ICA检测中,除HBsAg外,温度对G ICA检测的其他三项均有影响,随温度的升高检出率提高,在不同时间段G ICA检测四项传染病指标的阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。将试验观察测时间从20分钟延长至30分钟时可明显提高G ICA与ELISA检测的符合率。结论:G ICA与ELISA有较好的符合性,但G ICA仍存在一定的漏检风险。

胶体金法快速检测输血相关传染病的可行性研究

目的评估胶体金法在紧急或特殊情况下快速检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的可行性。方法同时使用胶体金法和酶联免疫吸附(ELISA)试验检测6209份标本的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP抗体,比较分析两种方法的特异性、灵敏度。结果以ELISA法检测结果为标准,胶体金法检测的特异性从高到低依次为抗-HCV(99.92%)、抗-HIV(99.90%)、HBsAg(99.76%)和抗-TP(99.74%);灵敏度从高到低依次为抗-HIV(100%)、HBsAg(97.42%)、抗-HCV(91.67%)和抗-TP(85.83%)。结论在紧急或特殊情况下胶体金法可作为输血前输血相关传染病的检测方法,但存在漏检和误报的风险,应引起重视。

薏苡仁诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡及其机制

本研究探讨薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应及其作用机制。分别用0.4,0.8,1.6mg/ml的薏苡仁油作用Jurkat细胞24小时,用CCK法检测细胞增殖,应用Hoechst33258染色、PI及PI/Annexin V染色后流式细胞仪来检测细胞凋亡,然后采用JC-1染色分析线粒体膜电位。结果表明:0.8和1.6mg/ml的薏苡仁油能显著抑制Jurkat细胞增殖;随着薏苡仁油浓度的增加,凋亡细胞数目增多,线粒体膜电位降低。结论:薏苡仁油对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,而且此效应与线粒体膜电位降低有关,本研究结果为临床应用薏苡仁油治疗白血病提供了实验依据。

雷公藤甲素对嘌呤霉素所致足细胞凋亡的抑制作用

目的为了探讨雷公藤治疗足细胞病变的机制,利用嘌呤霉素诱导足细胞凋亡的体外损伤模型,观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用及其机制。方法用CCK法观察雷公藤甲素对足细胞增殖活性的影响;应用TUNEL染色法定性观察雷公藤甲素对嘌呤霉素诱导的足细胞凋亡的保护作用;采用PI染色后再经流式细胞仪来定量分析雷公藤甲素对足细胞凋亡的抑制效应。结果雷公藤甲素质量浓度小于1ng/mL时对足细胞生存率没有明显影响;100μg/mL嘌呤霉素诱导足细胞凋亡,但是此凋亡效应可以被1ng/mL雷公藤甲素抑制;而且这种抑制作用具有时间依赖性。结论雷公藤甲素通过抑制细胞凋亡来保护足细胞。雷公藤甲素对足细胞的保护作用可能是临床上雷公藤有效治疗足细胞病变的机制之一。

血浆中残余白细胞的潜在免疫作用

目的 探讨开展血浆去除白细胞工作的必要性。方法 用Nageotte计数法、流式细胞分析和双向混合淋巴细胞培养的方法 ,对血浆中白细胞的数量、亚群情况、存活情况及同种免疫原性进行分析。结果 新鲜血浆中残余的白细胞约为 3.3×10 5/袋 ,经过 3个月的冻存后尚有近 30 %的白细胞存活并显示一定的同种免疫活性。结论 新鲜血浆的输注有引起同种免疫作用的危险 ,大量使用新鲜血浆如血浆置换等必须考虑白细胞的去除 ,如经济条件允许 ,输注去白细胞的血浆无疑是最佳选择。

雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

为了研究雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖和凋亡效应,用不同浓度的雷公藤甲素作用于Jurkat细胞,用CCK法检测细胞存活率,选取使细胞增殖抑制率为50%的雷公藤甲素作用于细胞,然后在应用Hoechst 33258染色、DNA电泳、PI以及PI/Annexin V染色后用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果表明:雷公藤甲素抑制Jurkat细胞的生长增殖,半数细胞抑制剂量为4μg/L。4μg/L雷公藤甲素作用于Jurkat细胞12小时后,出现明显的细胞凋亡特征(Hoechest 33258染色显示细胞核呈亮蓝色;DNA断裂产生DNA ladder,细胞凋亡的亚二倍体峰出现,细胞磷脂酰丝氨酸发生转位),细胞凋亡比率明显增加,24小时后细胞凋亡进一步增加。结论:雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,这为临床应用雷公藤甲素治疗白血病提供了实验依据。

光量子血液疗法对血小板的影响

目的 探讨光量子血液疗法对血小板的影响。方法 血液光量子前后进行血小板计数和血浆α颗粒膜蛋白 140 (GMP 140 )测定 ,并对光量子前后的血小板形态进行电镜观察。结果 与光量子化前相比 ,量子化后 ,血液的血小板数有所下降 (P<0 .0 5 ) ,血浆中的GMP 140含量显著升高 (P <0 .0 1) ,电镜结果显示量子化后血小板伪足形成增多 ,并伴有血小板碎片。结论 在本试验条件下紫外线照射对血液中的血小板有激活和形态损害作用。

临床输血质量管理体系的建立

为确保血液和血液成分的安全和合理使用,必须加强临床输血的质量管理。根据ISO9001:2000标准,文中建立了有效的临床输血质量管理体系,其关键控制点涵盖了人员、设备、试剂、环境、血液储存、运输与发放、输血不良反应和计算机管理系统等。编写的质量管理体系文件包括质量手册、程序文件、标准操作规程和质量记录,所有有效文件必须经授权和受控。

丙型肝炎病毒核酸扩增及微流芯片检测方法的建立

目的建立稳定、可靠的核酸扩增和微流芯片分析法,用于血液中丙型肝炎病毒的检测。方法分别选取经2种酶联免疫吸附试验验证的丙型肝炎阴性(60份)和阳性(200份)血液标本;提取核酸后采用巢式PCR法进行扩增,最后用微流芯片法分析扩增产物。结果经过核酸扩增的丙型肝炎阳性血液经分析后皆出现预期大小片段的特异性条带,而阴性血液缺少相应的条带。结论本次建立的特异性巢式PCR扩增和微流芯片法检测结果可靠,可用于血液筛查。

海藻糖和葡萄糖联合负载红细胞的效果评价

目的探讨海藻糖和葡萄糖联合负载红细胞的效果,为冷冻干燥红细胞提供新的保存剂。方法分别采用0、0.125、0.25、0.5和1mol/L的海藻糖、葡萄糖以及海藻糖联合葡萄糖37℃负载红细胞6h。分别检测负载后红细胞内海藻糖和葡萄糖的浓度。结果负载液中糖类浓度为0.125、0.25和0.5mol/L时,联合负载组与海藻糖或葡萄糖组负载后红细胞内的海藻糖和葡萄糖浓度的差异无统计学意义(P>0.05)。而负载液糖类浓度达到1mol/L时,联合负载组红细胞内海藻糖和葡萄糖的浓度明显低于海藻糖和葡萄糖单独负载组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论浓度小于1mol/L时,海藻糖联合葡萄糖负载红细胞并不影响海藻糖和葡萄糖进入红细胞内,可以满足红细胞冷冻干燥的要求。

人类血小板抗原1～6和Gov系统的PCR-SSP同步基因分型

目的：采用序列特异性引物PCR（PCR—SSP）对人类血小板抗原（HPA）1-6、Gov系统进行同步基因分型，以确定中国大陆汉族人群中的HPA等位基因频率。方法：随机采集100名中国大陆汉族无偿献血者外周血标本，采用酚／氯仿方法提取基因组DNA。设计合成21条序列特异性引物，在相同的PCR循环条件下对HPA-1-6和Gov进行PCR-SSP同步基因分型。结果：100名随机供血者中观察到的基因频率分别是HPA-1a和1b为1．000和0．000，HPA-2a和26为0．995和0．005，HPA-3a和36为0．655和0．345，HPA-4a和46为1．000和0．000，HPA-5a和56为0．990和0．010，HPA-6a和66为0．980和0．020，Gov^a和Gov^b为0．515和0．485。中国人HPA—1．6、Gov的基因频率与亚洲其他人群相一致，HPA-3a／3b和Gov^a／Gov^b基因频率在包括高加索人在内的不同人群中基本相等。结论：中国大陆汉族人群中Gov和HPA-3等位基因分布有其自身特点。

应急状态下快速分析血液传播疾病和判断溶血的方法

目的应急状态下的血液供应和质量检测不同于常规情况下,必须采取有效方法保证血液质量。文中研究建立应急状态下快速判断血液质量的方法,旨在为战争、突发事件或灾害事故等情况下供应合格血液。方法采用快速胶体金法检测血液中病原体;运用专用运血箱和相变保温材料来保障血液运输时质量;应用磁珠分离技术快速判断血液是否溶血。结果快速胶体金法检测乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)、人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)和梅毒结果与ELISA法有很高的符合率;采用相变材料和专用运血箱可较长时间保持血液运输的温度,且细胞不会严重溶血;判断血液溶血程度时,磁珠分离法与离心法效果相当。结论建立的系列方法适合应急状态下的血液质量判断,能够保障供应合格的血液。

不同温度下海藻糖联合葡萄糖负载红细胞后溶血情况

目的探索海藻糖和葡萄糖联合负载红细胞的最适温度,为冷冻干燥红细胞提供基础。方法分别采用0、0.125、0.25、0.5和1mol/L的海藻糖联合葡萄糖在4℃、25℃和37℃负载红细胞6h。然后检测上清液中游离血红蛋白和乳酸脱氢酶含量。结果负载液浓度为1mol/L时,3种温度下的细胞溶血程度较重,即上清中游离血红蛋白和乳酸脱氢酶浓度较高。在浓度低于1mol/L时,25℃负载后,红细胞溶血程度较高。4℃和37℃负载时,上清中游离血红蛋白和乳酸脱氢酶浓度较低。结论在浓度小于1mol/L时,海藻糖联合葡萄糖在4℃和37℃情况下,负载红细胞后对细胞的损伤较小,能够满足冻存的负载要求。

应用紫外线照射自血回输治疗增生性瘢痕的临床研究

增生性瘢痕是大面积深度烧伤创面愈合后常见的并发症，而在增生性瘢痕形成过程中伴随的局部痒痛、表皮糜烂破溃以及精神紧张等，严重干扰患者的休息、工作和生活，并可致心理障碍，因瘢痕挛缩而引起的机体结构和功能异常，影响到患者的生活质量。现国内外学者对瘢痕增生的...

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡配体的凋亡效应

目的研究重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的生物学活性。方法应用RT-PCR方法检测TRAIL受体(DR4和DR5)表达;细胞数目分析采用CCK试剂盒;细胞凋亡应用PI染色并经流式细胞仪检测;线粒体膜电位观察采用JC-1荧光染料。结果重组可溶性TRAIL抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;凋亡过程中出现线粒体膜电位的降低。结论此重组可溶性TRAIL具有诱导细胞凋亡的生物学活性。