绵羊肺炎支原体小鼠感染模型的建立

旨在探索小鼠作为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)实验室感染模型的可行性,筛选建立Mo感染小鼠模型的最佳方法。将60只BALB/c小鼠随机分为对照组、Mo感染组1、感染组2、感染组3和感染组4(n=12)。Mo感染组1小鼠分别滴鼻30μL和腹腔注射25μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液各1次,Mo感染组2和3小鼠分别滴鼻2和3次30μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液,Mo感染组4小鼠喉头喷雾50μL 10^(8 )CCU·mL^(-1) Mo NJ01株菌液2次,对照组用正常培养基处理。分别于感染后第0、7和14天称量小鼠体重。感染后第14天处死所有小鼠,采集血液和肺组织。通过HE染色法进行肺组织病理学检查、剖检进行肺组织病理评分、qPCR方法检测肺组织中Mo的载荷量和ELISA检测血清Mo IgG水平,确定小鼠感染模型是否建立成功及最佳建立方法。Mo感染组2和组4中小鼠体重第14天时分别比对照组显著降低17.2%(P<0.05)和21.6%(P<0.05);感染第13天,感染组2和组4小鼠出现死亡;感染后第14天剖检,Mo感染组2和组4小鼠肺部有炎症,肺病变平均评分分别为3.5和3.3,均显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),而对照组小鼠无病变;组织病理学检查发现,Mo感染组小鼠肺可见不同程度的间质性肺炎,肺泡腔内有炎细胞浸润;对照组小鼠肺组织结构正常、完整,肺泡内未见明显细胞浸润。小鼠肺组织中Mo DNA拷贝数在Mo感染组1和组3中分别为10^(2.56)和10^(3.21)拷贝·g^(-1);感染组2和组4分别为10^(3.84)和10^(3.77)拷贝·g^(-1),且显著高于Mo感染组1(P<0.05)和组3(P<0.05),对照组为阴性。小鼠血清Mo抗体OD_(450 nm)值在Mo感染组1、组2、组3和组4分别为0.63、1.05、0.81和0.99,均显著高于对照组(P<0.05),且组2和组4均显著高于1组(P<0.05)。本研究通过1×10^(8 )CCU·mL^(-1)的Mo NJ01株菌液滴鼻2次或喉头喷雾2次均可成功建立Mo感染小鼠模型。为绵羊肺炎支原体的致病机制及防治策略研究奠定基础。

新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性调查

为了了解新疆伊犁地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗药性情况,本课题组对该地区某绵羊场捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因苯并咪唑抗药性相关单核苷酸多态性进行了调查。在通过捻转血矛线虫ITS-2种特异性PCR鉴定为捻转血矛线虫的基础上,分别扩增了27条捻转血矛线虫雄虫的Ⅰ型β微管蛋白基因,测序后对抗药性相关的167,198位点和200位点的单核苷酸多态性进行了调查研究。结果表明,该羊场的捻转血矛线虫种群的抗药性突变只发生在198位点和200位点,以198位点的抗药性突变为主,没有在167位点发现抗药性突变。共发现了4种基因型,198纯合敏感型及200位点纯合敏感型(20; 74. 07%)、198杂合抗药型及200位点纯合敏感型(3; 11. 11%)、198纯合敏感型及200位点杂合抗药型(2; 7. 41%)和198纯合抗药型及200位点纯合敏感型(2; 7. 41%)。该羊场捻转血矛线虫种群中存在198位点的纯合抗药型突变,说明有抗药性的风险,需要引起注意。本研究首次从分子水平报道了新疆伊犁地区捻转血矛线虫种群Ⅰ型β微管蛋白基因存在苯并咪唑抗药性突变,这对该地区以及其他类似地区的捻转血矛线虫病的防控以及抗药性的管理具有一定的指导意义。

禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因克隆与基因分型分析

为克隆禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因,确定其基因分型并分析其变异性,从GenBank数据库中查找大肠杆菌P型菌毛papA基因,并运用Snap Gene 3.2.1软件设计合成3对引物。其中,第1对引物为扩增不同基因分型通用引物,预计扩增片段大小为281 bp;第2对和第3对引物是为了扩增完整papA基因并分析有无变异而设计的,预计扩增片段大小分别为522 bp和943 bp。以禽大肠杆菌HJ2、TK3菌株的基因组为模板进行PCR扩增;将所有扩增片段回收、酶切,并分别与pTG19-T载体进行连接,转化进入DH5α受体菌,提取获得含扩增片段的重组质粒,测序并进行序列分析。结果表明,用引物1从HJ2、TK3菌株的基因组中均扩增获得接近281 bp大小的片段,用引物2则只从HJ2菌株基因组中扩增获得接近522 bp大小的片段,而未能从TK3菌株基因组中扩增出片段;用引物3从TK3菌株基因组中扩增出接近943 bp大小的片段,而未能从HJ2菌株基因组中扩增出产物。经过基因碱基序列分析比对,完整的papA基因则位于943 bp的片段之中,确定HJ2和TK3两个菌株P型菌毛papA基因均属基因11型,但发现二者papA基因存在一定的碱基差异。PapA蛋白氨基酸序列比对发现,同属于基因11型的papA基因编码的PapA蛋白氨基酸序列也存在位点差异。

“兽医毒理学”课程教学改革探索与实践

“兽医毒理学”是动物医学专业学生的一门专业基础课,理论性、实践性、应用性均较强。但因其专业性强、部分知识点冗杂难懂,学生学习的兴趣不高,且传统的课堂教学方式较为单调,弱化了学生的主体地位,也限制了学生学习的时间和空间,加之缺少实践教学环节,学生学习的积极性和参与度不高,影响了教学效果。针对“兽医毒理学”课程当前教学过程中的痛点问题,从明确学习目标、修订教学大纲、精简教学内容、挖掘思政元素、改变教学模式、优化考核方式等几个方面探讨“兽医毒理学”教学改革与实践,以提高课程教学效果。