目的研究线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)沉默对人肝癌细胞株(HepG2)葡萄糖代谢和胰岛素信号通路分子丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt1)的影响。方法构建Mfn2短发夹双链RNA(Mfn2shRNA)和阴性对照短发夹双链RNA(HK),将HepG2细胞株分为空白...目的研究线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)沉默对人肝癌细胞株(HepG2)葡萄糖代谢和胰岛素信号通路分子丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt1)的影响。方法构建Mfn2短发夹双链RNA(Mfn2shRNA)和阴性对照短发夹双链RNA(HK),将HepG2细胞株分为空白对照组(NC)、阴性对照组(HK)、Mfn2shRNA质粒转染组(Mfn2)。HK和Mfn2组细胞应用lipo-fectamine2000转染HepG2细胞株;采用葡萄糖氧化酶的方法和氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)放射性核素示踪法检测细胞葡萄糖消耗量和摄取率;Western blotting检测Mfn2和Akt1蛋白表达。结果与HK组比较,Mfn2组细胞Mfn2蛋白表达明显下降(0.23±0.05 vs 0.51±0.14,P=0.034),Akt1表达差异无统计学意义(0.13±0.00 vs 0.14±0.01,P=0.055);Mfn2组细胞葡萄糖消耗量明显下降(8.72±0.62 vs 9.75±0.35,P=0.001),葡萄糖摄取率亦显著下降(7.94±0.04 vs 9.64±0.13,P=0.002)。结论抑制Mfn2基因表达导致HepG2细胞葡萄糖代谢下降;Mfn2表达对葡萄糖代谢的影响是否通过PI3K/Akt信号通路介导还需要进一步研究。展开更多
目的研究二甲双胍对高脂喂养Wistar大鼠肝脏脂肪变性、胰岛素敏感性和线粒体功能的影响。方法24只雄性Wistar大鼠分为对照组(NC)、高脂组(HF)和二甲双胍组(MF),每组8只,喂养8周后,以高胰岛素-正常葡萄糖钳夹测定大鼠胰岛素敏感性,取空...目的研究二甲双胍对高脂喂养Wistar大鼠肝脏脂肪变性、胰岛素敏感性和线粒体功能的影响。方法24只雄性Wistar大鼠分为对照组(NC)、高脂组(HF)和二甲双胍组(MF),每组8只,喂养8周后,以高胰岛素-正常葡萄糖钳夹测定大鼠胰岛素敏感性,取空腹血清测定大鼠天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBS),空腹胰岛素(FINS)的水平;将大鼠肝脏组织进行HE染色,观察肝脏组织学变化;取肝脏组织,测定肝糖原含量;提取、分离肝细胞线粒体超氧化物歧化酶,测定线粒体超氧化物歧化酶活性,以及提取肝组织总RNA,应用RT-PCR测定肝脏组织Mfn2mRNA的表达。结果与NC组大鼠比较,HF组大鼠肝脏指数、TG、FBS、ALT、AST、INS明显升高,MF组大鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05),HF组大鼠GIR、SOD活性及肝脏组织Mfn2mRNA表达显著降低(P<0.05)。与NC组和HF组大鼠分别比较,MF组大鼠GIR(8.40±0.50,7.29±0.40 vs 12.92±8.33)、肝糖原含量(1.73±0.01,1.82±0.31 vs 12.92±8.33)、SOD活性(13.71±2.67,9.08±3.12 vs 16.72±4.80)显著增加(P<0.05)。NC和HF两组间,肝糖原含量差异无统计学意义(P>0.05)。肝组织HE染色,结果显示,HF组大鼠肝细胞体积增大,胞质中有脂滴空泡;MF组大鼠肝细胞显微结构无显著变化。结论二甲双胍可以改善高脂诱导的肝脏脂肪变性、增加胰岛素敏感性,这一作用可能是通过促进肝细胞线粒体融合基因2(Mfn2)表达、改善线粒体功能实现的。展开更多
文摘目的研究线粒体融合素基因-2(mitofusin-2,Mfn2)沉默对人肝癌细胞株(HepG2)葡萄糖代谢和胰岛素信号通路分子丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt1)的影响。方法构建Mfn2短发夹双链RNA(Mfn2shRNA)和阴性对照短发夹双链RNA(HK),将HepG2细胞株分为空白对照组(NC)、阴性对照组(HK)、Mfn2shRNA质粒转染组(Mfn2)。HK和Mfn2组细胞应用lipo-fectamine2000转染HepG2细胞株;采用葡萄糖氧化酶的方法和氚标记葡萄糖(3-3H-Glucose)放射性核素示踪法检测细胞葡萄糖消耗量和摄取率;Western blotting检测Mfn2和Akt1蛋白表达。结果与HK组比较,Mfn2组细胞Mfn2蛋白表达明显下降(0.23±0.05 vs 0.51±0.14,P=0.034),Akt1表达差异无统计学意义(0.13±0.00 vs 0.14±0.01,P=0.055);Mfn2组细胞葡萄糖消耗量明显下降(8.72±0.62 vs 9.75±0.35,P=0.001),葡萄糖摄取率亦显著下降(7.94±0.04 vs 9.64±0.13,P=0.002)。结论抑制Mfn2基因表达导致HepG2细胞葡萄糖代谢下降;Mfn2表达对葡萄糖代谢的影响是否通过PI3K/Akt信号通路介导还需要进一步研究。
文摘目的研究二甲双胍对高脂喂养Wistar大鼠肝脏脂肪变性、胰岛素敏感性和线粒体功能的影响。方法24只雄性Wistar大鼠分为对照组(NC)、高脂组(HF)和二甲双胍组(MF),每组8只,喂养8周后,以高胰岛素-正常葡萄糖钳夹测定大鼠胰岛素敏感性,取空腹血清测定大鼠天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBS),空腹胰岛素(FINS)的水平;将大鼠肝脏组织进行HE染色,观察肝脏组织学变化;取肝脏组织,测定肝糖原含量;提取、分离肝细胞线粒体超氧化物歧化酶,测定线粒体超氧化物歧化酶活性,以及提取肝组织总RNA,应用RT-PCR测定肝脏组织Mfn2mRNA的表达。结果与NC组大鼠比较,HF组大鼠肝脏指数、TG、FBS、ALT、AST、INS明显升高,MF组大鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05),HF组大鼠GIR、SOD活性及肝脏组织Mfn2mRNA表达显著降低(P<0.05)。与NC组和HF组大鼠分别比较,MF组大鼠GIR(8.40±0.50,7.29±0.40 vs 12.92±8.33)、肝糖原含量(1.73±0.01,1.82±0.31 vs 12.92±8.33)、SOD活性(13.71±2.67,9.08±3.12 vs 16.72±4.80)显著增加(P<0.05)。NC和HF两组间,肝糖原含量差异无统计学意义(P>0.05)。肝组织HE染色,结果显示,HF组大鼠肝细胞体积增大,胞质中有脂滴空泡;MF组大鼠肝细胞显微结构无显著变化。结论二甲双胍可以改善高脂诱导的肝脏脂肪变性、增加胰岛素敏感性,这一作用可能是通过促进肝细胞线粒体融合基因2(Mfn2)表达、改善线粒体功能实现的。