百日咳系列抗原的酶联免疫检测法建立及其在组分百日咳疫苗吸附原液中的应用

目的:建立百日咳毒素、百日咳丝状血凝素、百日咳黏附素3种抗原含量检测方法,用于组分百日咳疫苗吸附原液的检测。方法:制备抗百日咳毒素、抗百日咳丝状血凝素和抗百日咳黏附素3种兔多克隆抗体,利用棋盘滴定法确定检测条件,建立双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行方法学的验证。结果:3种酶联免疫吸附法的线性相关良好(R^(2)>0.98),线性检测范围分别为1.25~20,2.5~40,0.625~10ng·mL^(-1);该方法的检测准确度高(回收率均在95%~115%),精密度良好(CV<10%)。结论:本研究建立了百日咳系列抗原的酶联免疫吸附法,可用于组分百日咳吸附原液解吸附方法及吸附原液稳定性的研究。

百日咳菌毛抗原检测方法的建立及初步应用

目的建立百日咳菌毛(fimbriae, Fim)抗原组分纯化过程中含量监测的双抗体夹心ELISA方法。方法 Fim抗原免疫家兔获得多克隆抗血清,经辛酸-硫酸铵法纯化并用辣根过氧化物酶标记,采用棋盘滴定法确定最佳包被抗体浓度和酶标抗体最适稀释倍数,建立双抗体夹心ELISA检测法,并对其进行全面验证。结果棋盘滴定法确定包被抗体浓度为2μg/mL,最适酶标记抗体稀释倍数为2 000倍。验证双抗体夹心ELISA线性检测范围为15.625~250.000 ng/mL(相关系数r>0.99)。该方法与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒抗原、白喉类毒素(diphtheria toxin, DT)、破伤风类毒素(tetanus toxin, TT)、b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(Hib)、百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、百日咳丝状血凝素(filamentous haemagglutinin, FHA)和百日咳黏着素(pertactin, PRN)抗原均无明显交叉反应,重复性好,专属性强,其他均符合常规质控要求。结论建立了Fim双抗体夹心ELISA检测法,为百日咳菌毛蛋白生产过程和以组分百日咳疫苗为基础的联合疫苗中Fim含量的质量控制提供有效技术手段。

健康成人抗百日咳毒素和抗百日咳丝状血凝素抗体检测与分析

目的评估健康成人抗百日咳毒素(anti-PT)和抗百日咳丝状血凝素(anti-FHA)抗体水平。方法选择20-59岁健康成人,采用改良ELISA(mELISA)、改良硫氰酸铵-ELISA分别测定血清anti-PT和anti-FHA IgG抗体的浓度、亲和力,分析二者的相关性;采用CHO细胞簇集试验测定anti-PT中和抗体滴度,分析与anti-PT IgG抗体浓度的相关性。结果共纳入研究对象73名,anti-PT、anti-FHA IgG抗体几何平均浓度(GMC)分别为10.4 IU/mL、58.2 IU/mL,抗体亲和力中位数分别为34.8%、61.4%,anti-PT中和抗体几何平均滴度(GMT)为1:27.3。anti-PT、anti-FHA IgG抗体的浓度与亲和力均呈正相关(r=0.45,P<0.01;r=0.76,P<0.01);anti-PT中和抗体滴度与浓度呈正相关(r=0.77,P<0.01)。结论健康成人anti-PT抗体水平较低,建议制定成人百日咳疫苗免疫程序;mELISA可替代CHO细胞簇集试验用于百日咳血清学检测。

联合疫苗中白喉类毒素抗原质量控制方法的研究

目的建立白喉类毒素含量测定方法,用于百白破为基础的联合疫苗的质量控制。方法采用棋盘滴定法确定抗白喉类毒素包被抗体及酶标抗体浓度,并对方法进行全面验证。结果棋盘滴定法确定包被抗体浓度为5μg/ml,酶标记抗体稀释2000倍为宜。验证双抗体夹心ELISA线性检测范围为0.0027 lf/ml^0.0429 lf/ml(相关系数r>0.99),检测方法特异性强、精密度及准确度均符合要求(精密度验证CV<10%,准确度验证回收率在85%~115%)。利用该法测定多批联合疫苗中DT的吸附率,分别使用该法和絮状单位法测定了17批类毒素原液中DT的含量,比较2种检测方法呈显著相关(r=0.594)。结论建立了白喉类毒素抗原含量检测方法,为白喉疫苗生产过程及联合疫苗中DT吸附率的评价提供有效质控方法。