兔骨髓基质干细胞与软骨细胞共培养体内成软骨的实验观察

目的:探讨骨髓基质干细胞(MSCs)与软骨细胞混和培养体内成软骨的可行性.方法:分离、培养、扩传兔MSCs及软骨细胞,二者按一定比例混和(3∶1),以6.0×1010/L的细胞密度接种于PGA(聚羟基乙酸)支架作为共培养组,以相同密度的单纯MSCs和单纯软骨细胞分别接种以作为阴性与阳性对照.将细胞PGA材料复合物种植在成兔皮下,各标本于体内培养8wk时取材,通过大体观察、组织学等方法对新生软骨进行初步评价.结果:各组细胞与PGA支架的黏附良好.混和培养组及阳性对照组(软骨细胞组)体内培养8wk后均形成了成熟的软骨组织,并基本保持了复合物初始的大小和形状,两组新生软骨外观及组织学特征基本相同.阴性对照组(单纯MSCs组)在体内培养过程中未形成软骨组织,而是形成了纤维结缔组织.结论:软骨微环境在MSCs成软骨分化及体内软骨形成中具有重要作用,软骨细胞能有效地诱导MSCs向软骨细胞分化并促进MSCs体内软骨形成.

化学腐蚀性组织工程皮肤检测模型的构建

利用组织工程学方法,以牛I型胶原为支架,人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞为细胞来源,构建化学腐蚀性检测用组织工程皮肤模型。选用欧洲替代方法验证中心(the Interagency Coordinating Committee on the Validation of Alternative Methods,ICCVAM)制定的体外测试化学品腐蚀性最小执行标准中的8种化学品为检测物质。在检测实验中,8种化学品(固体10mg、液体25μl)分3min、1h局部接触组织工程皮肤模型表面,MTT方法测定细胞活力,相对细胞活力值作为判定腐蚀性的标准。结果表明,构建的组织工程皮肤检测模型结构完整,含有基底层、棘层、颗粒层和角质层,能准确判断7种化学品的腐蚀性。构建的组织工程皮肤模型可以作为检测工具用于化学品腐蚀性的检测。

大鼠坐骨神经电损伤后的实验性痛定量检测

目的:对大鼠坐骨神经电损伤后疼痛行为进行定量检测,探索周围神经电损伤后出现的感觉功能障碍。方法:成年雄性SD大鼠56只,随机分成假手术组、电损伤65 V、75 V、100 V、125 V、150 V和坐骨神经慢性压榨(CCI)组,共7组,每组8只大鼠。分别于术后1、2、4周对大鼠后足进行热痛敏和机械痛敏定量检测。结果:和对照组相比65 V和75 V组表现出明显的机械缩足反射阈值减小,125 V组1周时机械缩足反射阈值减小,而2周和4周时则明显增大。150 V组1周机械缩足反射阈值无明显变化,2周和4周时明显增大。100 V、125 V和150 V均表现为热刺激缩足反射潜伏期延长。CCI组不论机械还是热刺激,其缩足反射阈值均减小。结论:坐骨神经电损伤可引起大鼠机械性痛阈值和热痛阈值的改变,其中较低电压损伤组大鼠机械性痛阈值减小,而较高电压组大鼠机械刺激阈值和热刺激阈值反而增高,说明较高电压可能导致坐骨神经的感觉传导功能完全受损。

MCPR1在小鼠胚胎发育中的表达

目的:初步探讨新基因m cpr1在小鼠胚胎多组织发育中的表达模式。方法:取妊娠(gestationday,GD)12、14、18 d的C57BL/6N孕鼠,拉颈处死,取出胎鼠,利用已制备的MCPR1多克隆抗体,进行免疫组织化学染色,分析MCPR1的表达情况。结果:免疫组化结果显示:MCPR1在小鼠胚胎多组织的发育中呈现不同的表达模式,在小鼠胚胎14 d(E14)时,M eckel软骨内有少数MCPR1阳性表达细胞,软骨周围阳性细胞较多;在E18时,M eckel软骨内MCPR1阳性表达细胞增多,且前部较后部多。在胚眼发育不同的时期也有不同的表达分布。结论:推测m cpr1基因在颅神经嵴细胞成骨过程中,可能以促PCD基因的身份在软骨细胞的移行中发挥作用;胚眼发育过程中m cpr1基因可能在视泡及晶状体等眼部结构的发生发展中起着一定的作用。

冰片外用对大鼠后肢穿刺伤急性疼痛的抑制作用

目的研究冰片外用对大鼠外伤引起的急性疼痛的抑制作用及机制。方法将45只SD大鼠随机分为假手术组、手术组及外用冰片组3组,假手术组仅对手术部位进行皮肤脱毛,建立手术组及外用冰片组大鼠后肢穿刺伤疼痛模型,外用冰片组术后创面外用冰片粉末300 mg。观察外用冰片组和手术组术后不同时间点继发机械痛阈、继发热痛阈水平和脊髓背角Fos蛋白阳性细胞数量(FPIN)的差异。结果假手术组在整个实验过程中痛阈变化与基础值比较差异无统计学意义(P>0.05)。外用冰片组术后继发机械痛阈、继发热痛阈值均高于手术组,FPIN(22.6±6.7)低于手术组(36.2±5.8),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论冰片外用于损伤部位,通过抑制损伤处伤害性感受器的传入信号对外伤后引发的急性疼痛产生抑制作用。

人脐静脉内皮细胞损伤过程中核转录因子κB及单核细胞趋化蛋白1mRNA的变化

背景:既往实验表明,炎性因子与内皮细胞的功能有密切的关系,观察保护和损伤因素对体外培养人血管内皮细胞炎性因子作用的报道较少。目的:实验拟观察姜黄素和肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞分泌核因子κB以及单核细胞趋化蛋白1mRNA的影响。设计、时间及地点:细胞观察实验,于2006-12/2007-08在解放军第四军医大学组织工程实验室完成。材料:健康人脐带由解放军第四军医大学唐都医院提供。内皮细胞培养采用M199完全培养基。方法:实验分为3组,正常对照组为无血清M199培养基;肿瘤坏死因子α组:在正常细胞培养液中加入浓度为10μg/L的肿瘤坏死因子α诱导损伤1.5h;姜黄素组:先在培养液中加入10μg/L的肿瘤坏死因子α30min诱导损伤,再分别加入终浓度为6.25,12.5,25,50,100mg/L的姜黄素孵育1h。主要观察指标:①四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度姜黄素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。②免疫细胞化学染色法观察胞核内核转录因子κB的表达。③反转录-聚合酶链反应检测单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达。结果:姜黄素可以提高肿瘤坏死因子α诱导损伤的人脐静脉内皮细胞活性(P<0.01),并呈一定剂量依赖性。肿瘤坏死因子α可刺激核因子κBp65表达的强度,姜黄素可以减少核因子κBp65的表达。与正常对照组相比,肿瘤坏死因子α作用30min后,单核细胞趋化蛋白1mRNA相对表达量明显增高(P<0.01);加入不同浓度的姜黄素作用1h后,单核细胞趋化蛋白1mRNA相对表达量明显减低(P<0.05,P<0.01)。结论:姜黄素对损伤的内皮细胞具有保护作用,其作用途径可能通过抑制核转录因子κB活性,并下调单核细胞趋化蛋白1mRNA的表达,从而阻滞了单核细胞的聚集。

兔坐骨神经电损伤后神经组织超微结构观察

目的:研究兔坐骨神经电损伤后神经组织和雪旺细胞超微结构变化。方法:随机将实验动物按损伤电压分为55V组、110V组、220V组3组,建立电损伤动物模型。对电击后不同时程兔坐骨神经进行取材固定,利用透射电子显微镜观察其超微结构。结果:(1)坐骨神经55V电损伤4周后,神经结构即恢复正常;(2)110V电损伤2周时,神经破坏加重,雪旺细胞增殖,16周时神经结构基本恢复正常;(3)220V电损伤时雪旺细胞被破坏,观察16周仍未见神经恢复。结论:神经组织在受到电损伤后超微结构随损伤电压的增大而改变明显;周围神经电击伤后神经再生能力与雪旺细胞相关,雪旺细胞的恢复可能是神经能够成功再生的必要保证。

不同方式损伤周围神经后许旺细胞钾通道基因的表达

目的:观察不同方式损伤兔坐骨神经电后受损区域神经许旺细胞Kv1.5钾通道基因的表达水平。方法:随机将实验动物分为3组:50V电损伤组、100V电损伤组、神经切割伤组,双酶消化法分离受损区域坐骨神经许旺细胞并体外培养,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术比较各组许旺细胞Kv1.5 mRNA的表达水平。结果:3组动物损伤区域神经许旺细胞均有Kv1.5基因的表达,其中损伤后3～7dKv1.5基因的表达最为显著;50V组及神经切割伤组两组之间比较无显著性差异(P>0.05);而100V组Kv1.5基因的表达水平较低,与其他两组有显著性差异(P<0.05)。结论:坐骨神经损伤后许旺细胞Kv1.5基因的表达与损伤后时间及损伤电压大小有关,可能与许旺细胞的增殖有密切关系。

铁路货车中梁上心盘焊接技术

在铁路货车出口车生产中,车厢车体中梁下盖板与上心盘的焊接应用广泛,属于2种化学成分和力学性能悬殊的异种材料焊接,上心盘作为车体连接转向架且承受冲击载荷的关键部位,其焊接质量直接影响到铁路货车的运行安全,在铁路货车生产中尤为重要。文中针对中梁下盖板与上心盘在焊接过程中易产生的焊接缺陷,创新焊接操作方法,提高产品焊接质量和生产效率。

兔骨髓基质干细胞与软骨细胞混和培养体内成软骨(英文)

背景：诱导因子及软骨微环境是影响骨髓基质干细胞成软骨分化及软骨形成的主要因素。目的：利用少量软骨细胞以共培养方式诱导骨髓基质干细胞体内成软骨。设计、时间及地点：2004-09/2005-03在解放军第四军医大学口腔医院病理教研室完成的随机对照动物实验。材料：选择清洁级新西兰兔15只用于细胞支架复合物的种植,随机分为混合细胞组、软骨细胞组、骨髓基质干细胞组,5只/组。取新生1-3d龄新西兰兔5只用于骨髓基质干细胞、软骨细胞的分离培养。聚羟基乙酸无纺网支架为上海易括公司产品,材料直径15μm,平均间距150-200μm,孔隙率97%,厚2mm。方法：混合细胞组将骨髓基质干细胞与软骨细胞按3：1混匀,调整细胞密度为6.0×10^10·L^-1,接种于经培养液预湿的塑形聚羟基乙酸5mm×5mm的支架上,然后在复合物周围滴加含胎牛血清的DMEM液培养1周。软骨细胞组、骨髓基质干细胞组的细胞密度调整为6.0×10^10·L^-1后同法接种于支架上。各组兔麻醉后于背部一侧皮下组织植入对应的细胞-支架复合物。主要观察指标：植入后第8周行新生软骨大体观察和苏木精-伊红、Masson三色染色。结果：各组细胞与聚羟基乙酸支架黏附情况良好。植入8周后,混和培养组和软骨细胞组均形成了成熟的软骨样组织,并基本保持复合物初始的大小和形状,两组新生软骨外观及组织学特征较接近。骨髓基质干细胞组在体内培养过程中未形成软骨组织,而是形成了纤维结缔组织。结论：骨髓基质干细胞与软骨细胞按3：1混合形成的微环境,能有效诱导骨髓基质干细胞向软骨细胞分化,并促进骨髓基质干细胞的体内成软骨。

微囊化NGF基因修饰NIH3T3细胞对体外培养的组织工程皮肤功能的影响

神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)能促进周围神经再生,还能加速创面收缩和再上皮化。本实验采用微囊和组织工程研究技术,探讨构建微囊化转NGF基因NIH3T3细胞复合组织工程真皮的可行性及其生物效应。我们将NGF基因修饰的NIH3T3细胞包裹在海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内体外培养,夹心ELISA法测定其上清NGF含量,将此微囊与人表皮细胞、成纤维细胞共培养一周后行MTT、羟脯氨酸(HP)测定、超微结构及组织形态学观察。用组织工程皮肤培养系统构建复合微囊的组织工程真皮,HE染色、羟脯氨酸测定和扫描电镜观察其生物功能及活性。我们发现:转NGF基因微囊体外培养8周,仍稳定分泌NGF,能促进人表皮细胞增殖,促进人成纤维细胞分泌胶原,复合组织工程真皮后仍保持此功能。因此,将微囊和转基因技术结合构建组织工程皮肤是可行的。

浅析铁路敞车中梁环形塞焊“360°旋转”焊接技术

在铁路货车敞车生产实践中发现,多种车型中梁部位存在环形塞焊缝,焊接区域小,容易出现焊缝根部和层间未熔合、成形不良等焊接缺陷,返工率高,克服这一质量难题需手持焊枪跟随焊缝360°不断旋转,该操作方法短时间内难以掌握。经理论与实践反复探索,通过采用"360°旋转"焊接技术,使焊接操作更加简便化,能够较好地解决这一质量难题。

封闭负压引流联合局部给氧治疗兔耳缺血性创面的实验研究

目的:观察封闭负压引流联合局部给氧促进兔耳缺血性创面愈合的效果。方法:28只大耳白兔,双耳背各造成直径2.5cm全层皮肤缺损,结扎中央血管神经束及后边缘动静脉,形成缺血创面。56个创面随机分为七组:A组(-50mmHg负压同时给氧,浓度为40%±5%,每日4小时)、B组(持续-50mmHg负压4小时继之局部给氧1小时)、C组(负压治疗4min,停止1min,每日4小时,之后给氧1小时),D组(-50mmHg负压治疗每日4小时)、E组(-125mmHg负压治疗每日4小时)、F组(单纯给40%±5%氧1小时)和G组(空白对照)。在创面形成第0、1、3、5、7、10、14、18天拍照,测量创面面积,计算创面愈合率及创面愈合时间;在各时相点切取创面标本,组织学观察创面肉芽、上皮生长、水肿和炎细胞,Ki67免疫组化标记增殖细胞并计算增殖指数,TUNEL法计算凋亡指数。结果:负压给氧组在相同时相点创面愈合率高于单纯负压、氧疗或空白组(P<0.05),创面肉芽生长快,水肿和炎症轻,细胞增殖指数高于对照组(P<0.05),而细胞凋亡指数显著低于对照组(P<0.05)。结论:负压联合局部给氧能显著促进兔耳缺血创面的愈合。

新型战伤急救止血剂体内抗菌活性的实验研究

目的:探讨新型战伤急救止血剂对家兔急性感染伤口的抗菌作用。方法:选用兔感染创面模型,分新型战伤止血剂、5A沸石、Quiclot和空白对照组对创面进行治疗,通过组织学观察、组织内细菌计数等方法对各组抗菌性能进行研究。结果:肉眼和组织学观察新型战伤急救止血剂治疗组动物模型伤口,炎症反应均小于其他各组;新型战伤急救止血剂治疗组织内细菌计数为104,比其他3组显著减少(P<0.01)。结论:新型战伤急救止血剂具有良好的体内抗菌性能。

负载金属离子的5A沸石的体外抗菌实验

目的:探讨负载金属离子的5A沸石的体外抗菌作用。方法:选用金黄色葡萄球菌、铜绿假单孢菌、白色念珠菌,利用倍比稀释法对5A沸石组、磺胺嘧啶银组及载不同浓度Ag+、Zn2+5A沸石共15组进行了体外抗菌试验研究,确定最佳抗菌效果离子负载方案。结果:三种细菌的MIC,双金属离子负载在抗菌上具有协同载Ag+5A沸石分别达到了125μg/ml^500μg/ml、31.25μg/ml^500μg/ml、250μg/ml^500μg/ml;附载Zn2+5A沸石分别达到了12.5mg/ml^25mg/ml、6.25mg/ml^50mg/ml、25mg/ml;负载双离子5A沸石分别为250μg/ml^500μg/ml、62.5μg/ml^500μg/ml、500μg/ml。结论:5A沸石负载金属离子后均具有抗菌作用,且抗菌作用与附载金属离子的量正相关;负载相同质量Ag+的5A沸石较附载Zn2+者具有更强的抗菌作用;双金属离子负载在抗菌上具有协同作用;2%Ag++8%Zn2+与2%Ag++10%Zn2+及4%载银组与阳性对照组无显著性差异。

大鼠铜梳烧伤模型建立方法的改良

目的:改良大鼠铜梳烧伤模型的建立方法,对比不同方法建立的烧伤模型的烧伤间隙区初始面积及坏死程度的差异,探索更加理想的大鼠铜梳烧伤模型的建立方法。方法:48只SD大鼠被随机分为A组(原方法)、B组(改良法1)及C组(改良法2)。将铜梳烧伤器加热后,即刻置于各组大鼠背部中线两侧的皮肤上,A组铜梳接触皮肤时,除自身重力以外,不施加任何压力;B组铜梳接触皮肤时施加压力,使皮肤凹陷约0.5 cm;C组使用铜梳烧伤器嵌合聚乙烯泡沫塑料模型后再接触皮肤,并施加压力,使皮肤凹陷约0.5 cm。测量各组伤后即刻的烧伤间隙区面积;伤后6、12、24、48小时的间隙区组织坏死面积;各个时间点取材后,通过HE染色观察间隙区组织坏死程度并测量坏死深度。结果:伤后即刻C组的烧伤间隙区面积介于A组与B组之间,且与理论值最接近;B组间隙区组织坏死进程最快,伤后24小时已基本坏死。A组坏死进程最慢,间隙区组织基本坏死时间超过48小时。C组间隙区组织基本坏死时间是伤后48小时,与理论上的时间最接近。结论:通过铜梳烧伤器嵌合聚乙烯泡沫塑料模型后再接触皮肤,并施加压力,使皮肤凹陷约0.5 cm,是建立大鼠铜梳烧伤模型更加理想的方法。

VAC技术治疗兔耳缺血性创面的实验研究

目的:观察间歇和持续负压下缺血创面不同处理与愈合的关系。方法:实验前1天,用脱毛剂(Nair,美国)对兔耳背脱毛。动物用1%戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉(30 mg/kg体重),固定于手术台。75%乙醇消毒双侧耳背皮肤。距耳根3-3.5cm处分离、结扎兔耳中央神经血管束。在耳背中部形成直径2.5cm全层皮肤缺损创面(保留软骨膜)[1]。止血后置动物于特制木盒内。42只大白兔共84个创面,随机分为-50mmHg-75mmHg和-100mmHg 3大组,分别施以间歇负压(运行2分钟,停1分钟)和持续负压组。实验分别运用-50mmHg,-75mmHg,-100mmHg三个不同负压值进行连续、间歇治疗兔耳缺血性创面,观察伤后1,3,7,10,14,20d创面愈合情况,取伤后7d组织标本进行Western blot、HE染色,观察VEGF(vascular endothelial growth factor)的表达及创面上皮的再生和肉芽组织生长情况[1]。以及各时间点细胞凋亡的检测。结果:-50mmHg(纱布+海绵)间歇负压引流技术治疗兔耳缺血性创面的愈合最快,-75mmHg治疗组次之,-100mmHg治疗组创面愈合最慢。在同一时间点上,-50mmHg治疗组与-75mmHg,-100mmHg治疗组和空白对照组之间相比,能够更快地促进创面VEGF的表达和肉芽组织的再生,毛细血管增多。封闭负压治疗能够降低创面组织细胞的凋亡的发生。结论:(1)封闭负压治疗能够促进缺血创面的肉芽组织再生及VEGF的表达,减少创面组织细胞的凋亡的发生;(2)-50mmHg间歇封闭负压治疗效果最好。

透明质酸酶对兔耳软骨的组织学影响

目的探索透明质酸酶(HAase)对兔耳软骨组织糖胺聚糖(GAGs)含量的早期影响。方法使用不同浓度的HAase(75、150、300U/ml)及同体积的生理盐水分别注入兔耳皮下,在注射后第3天及第7天,分别对耳软骨进行阿利蓝染色,并采用1-9-二甲基亚甲基蓝光度法和双抗体夹心ABC-ELISA法测定GAGs含量[包括透明质酸(HA)和硫化糖胺聚糖(sGAG)两部分],分析各组GAGs含量的变化。结果注射后第3天和第7天,HA和sGAG含量分别从低酶浓度组到高酶浓度组大体呈递减趋势。其中,第3天:HA含量在生理盐水组与中、高浓度酶组间比较,以及低浓度组与高浓度酶组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);sGAG含量仅在生理盐水组与其他各组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。第7天:HA含量仅在生理盐水组与其他各组相比,差异有统计学意义;sGAG含量仅在高浓度酶组分别与生理盐水组、低浓度酶组间相比,差异有统计学意义(P<0.05)。在相同浓度下,HA和GAGs含量在第7天均高于第3天,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论早期HAase能够明显降低兔耳软骨中GAGs(包括HA和sGAG)的含量。

玻璃化冻存延期回植技术在大面积皮肤撕脱伤中的应用研究

目的:探讨玻璃化冻存延期回植技术用于大面积撕脱皮肤伤的临床效果。方法:选择2015年6月至2018年6月收治的大面积皮肤撕脱伤的患者16例,根据处理方式分为撕脱皮肤玻璃化冻存二期回植组和撕脱皮肤一期回植组,每组8例患者。皮肤冻存后回植前,采用MTT法检测皮肤活力,比较两组皮片回植后的成活率、感染率、平均住院时间。结果:玻璃化冻存组皮肤冻存后平均活力为92.56%±7.20%,皮片成活率为81.74%±5.78%,感染率12.5%,平均住院时间33.13±3.91 d;一期皮肤回植组皮片成活率21.91%±5.28%,感染率100%,平均住院时间47.50±1.93 d。玻璃化皮肤保存组皮片成活率、感染率、平均住院时间均优于一期皮肤回植组(P<0.05)。结论:皮肤玻璃化冻存延期回植技术用于无法一期回植皮肤撕脱伤的临床效果较好。

改良皮片4℃低温保存方法在创面二次植皮治疗中的应用研究

目的:探讨改良皮片4℃低温保存方法在创面二次植皮治疗中的应用效果。方法:①动物实验:健康成年豚鼠3只,处死后,取背部皮肤做成32个1 cm×1 cm小皮样,随机分为新鲜皮组、庆大盐水保存组、RPMI保存组,改良RPMI保存组进行4℃保存;1周后测定皮肤活力;②临床实验:观察自2018年10月至2018年12月,二期植皮患者33例,应用改良RPMI 4℃低温保存皮肤二期回植的患者16例,与重新取皮植皮患者17例比较其皮片成活率。结果:动物实验证实:改良RPMI保存组4℃保存组在皮肤储存1周时皮肤平均活力较庆大盐水保存组、RPMI保存组高(P<0.05);临床实验证实:改良RPMI保存组与重新植皮的皮片平均成活率没有显著性差别(P>0.05)。结论:改良4℃断层皮片低温保存方法可短期内保存皮肤较高的活力,是皮片再利用的一种有效方法。