5α-羟基木香酸抑制VEGF164诱导大鼠脉络膜血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成

目的探讨5α-羟基木香酸(5α-hydroxycostic acid,5α-HA)体外抑制脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)模型的作用及其机制。方法体外培养大鼠脉络膜血管内皮细胞(choroidal vascular endothelial cells,CECs)后分为(n=3):空白对照组、模型组[30 ng/mL抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)164]、干预组(30 ng/mL VEGF164+100μmol/L 5α-HA)、抑制剂组[30 ng/mL VEGF164+5μmol/L Semaxanib(VEGFR2特异性阻断剂)]。CCK-8实验检测各组CECs的增殖情况,细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验分别观察各组CECs的增殖、迁移以及管腔形成。RT-qPCR检测各组细胞渗漏相关因子如血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang 2)、血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)、紧密连接蛋白(ZO-1)的mRNA水平的表达;Western blot检测各组细胞信号通路及渗漏相关蛋白P-VEGFR2、P-Tie2、P-FAK、VE-Cadherin、ZO-1、Occudin的表达;免疫荧光检测各组细胞中Ang 2蛋白的表达,统计分析上述各组间的指标差异。结果CCK-8实验表明:与模型组比较,干预组5α-HA作用于CECs后能抑制CECs的异常增殖(P<0.01)。细胞划痕实验、Transwell实验以及Matrigel基质胶管腔形成实验表明:干预组能扭转模型组VEGF164引起的CECs迁移及管腔形成(P<0.01)。RT-qPCR结果显示:干预组能抑制模型组中Ang 2 mRNA的上调以及VE-Cadherin和ZO-1的下调(P<0.01)。Western blot结果显示:干预组能减少模型组中P-VEGFR2、P-Tie2及P-FAK蛋白的表达(P<0.01),同时上调VE-Cadherin、ZO-1以及Occudin蛋白的表达(P<0.05)。细胞免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,干预组能减少模型组中Ang 2蛋白的表达(P<0.01)。结论5α-HA可能通过抑制VEGFR2、Tie2双途径磷酸化以及抑制VEGFR2/FAK信号通路抑制VEGF164诱导的CECs增殖、迁移以及管腔形成。

血管生成素1对大鼠脉络膜新生血管的治疗作用及其初步机制

目的 探究血管生成素1(Ang1)对大鼠脉络膜新生血管(CNV)的治疗作用及其可能机制。方法 选取30只6~8周龄挪威(BN)大鼠,雌雄不限,随机分为正常组、模型组、Ang1治疗组,每组10只。正常组不做处理;其余两组采用多波长氪激光对BN大鼠双眼进行CNV造模,于造模后14 d进行眼底荧光素血管造影检查。造模成功后1 d,Ang1治疗组玻璃体腔注射200μg/L的Ang1 20μl,其余两组注射等量生理盐水;注药后10 d进行眼底荧光素血管造影检查,使用FITC标记葡聚糖(FITC-dextran)心脏灌注法进行脉络膜铺片测量CNV面积,采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜-脉络膜结构变化;取大鼠视网膜-脉络膜-巩膜复合体,采用Western blotting检测Ang1、Rap1、小分子G蛋白Rap1(GAPRap1)、血管内皮-钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达情况。取对数生长期大鼠脉络膜血管内皮细胞(RCVECs),用血管内皮生长因子(VEGF)刺激培养24 h后,分为阴性对照组(siRNA-NC组)、GAPRap1小干扰RNA组(GAPRap1-siRNA组)、GAPRap1-siRNA+Ang1组。GAPRap1-siRNA组及GAPRap1-siRNA+Ang1组转染GAPRap1-siRNA试剂,siRNA-NC组细胞转染siRNA-NC试剂,转染6 h后,在GAPRap1-siRNA+Ang1组中加入200μg/L Ang1,继续培养24 h后提取细胞蛋白,采用Western blotting检测细胞中GAPRap1、Rap1、VE-cadherin的表达情况,免疫荧光染色检测转染后细胞中VE-cadherin的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显升高,脉络膜中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05);与模型组比较,Ang1治疗组大鼠新生血管渗漏面积、脉络膜损伤程度明显降低,脉络膜与细胞中GAPRap1、VE-cadherin蛋白表达明显升高(均为P<0.01),Rap1蛋白表达无明显变化(P>0.05)。脉络膜组织中,Ang1蛋白在Ang1治疗组的表达明显高于其余两组(P<0.01)。细胞实验中,GAPRap1-siRNA组GAPRap1与VE-cadherin的表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.01),而Rap1表达无明显变化(P>0.05)。免疫荧光染色检测结果显示,GAPRap1-siRNA组VE-cadherin表达水平较GAPRap1-siRNA+Ang1组及siRNA NC组明显降低(P<0.001)。结论 Ang1可减少大鼠CNV的渗漏,对CNV生长具有一定抑制作用,其机制可能与通过GAPRap1-VEcadherin途径加强细胞黏附作用有关。

浅谈数据安全防护措施

随着信息技术的发展和广泛应用,经济、政治、科技等各方面的电子信息化程度越来越高,越来越多的关键业务系统运行在数据库平台上。随着高级网络攻击日益猖獗,由于员工使用便携式存储设备而带来的数据窃取和数据意外泄露情况屡见不鲜,信息泄露事件频繁发生,企业、个人数据安全遭遇了较为严重的安全威胁。数据一旦泄露或丢失,就可能造成重大损失,甚至造成一定的社会影响。因此,人们对数据安全的关注程度越来越高,对数据安全防护措施的研究探索也越来越重视。

浅谈大数据与个人信息安全

随着信息技术的快速发展,经济、政治、科技等各方面的电子信息化程度越来越高,人们对信息安全问题的关注程度越来越高。所以当大数据走向我们生活的时候,人们的信息安全防护也必须紧跟这个脚步。

《战狼2》:国产主旋律电影找准了自己的节奏

时隔3年,吴京一手打造的动作题材电影《战狼2》回归银幕,首映4小时横扫9741万元、24小时近3亿元、4天突破9亿元票房大关。进电影院看《战狼2》的观众不少被燃得热血沸腾,想不到国产主旋律电影还有这种操作。事实上,自2016年《湄公河行动》