金黄色葡萄球菌D型肠毒素抗血清制备和在肠毒素免疫检测上的应用

参考Robbins等文章,制定了制备抗-SED血清的免疫方案,抗原用量6.9mg/兔,注射8针,免疫时间共14周。用免疫双向琼脂扩散方法测定,抗-SED血清效价可达1:128,所制抗-SED血清与高纯度(98%)及低纯度(60%)的SED只产生一条沉淀线,并且融合,与SEA、SEB、SEC_1、SEC_2均没有交叉反应。以抗-SED抗体IgG制备的诊断血球检出灵敏度较高,约1ng/ml。对6种罐头食品人工污染毒素的模拟实验结果,检出灵敏度为1.56ng/ml,略低于含纯SED标本,食物成份对反向血凝检出没有影响。用抗-SED血清制备的酶标抗-SED IgG、与酶标抗-SEA、抗-SEB和抗-SEC IgG同时用免疫斑点法检出了138株金葡菌,其中产肠毒素者占75.3%,仅产SED和与其它型结合者占43%左右、免疫斑点法检验结果和反向间接血凝相同,高于免疫双向扩散结果。

金黄色葡萄球菌肠毒素分子遗传学研究进展

金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)肠毒素引起的食物中毒非常普遍,对它的致病机理研究尚未得到令人信服的结论。本文着重介绍各型肠毒素(SEA、SEB、SEC、SED和SEE)和中毒性休克毒素(TSST-1)的基因位点、基因克隆、结构基因核苷酸序列分析以及它们蛋白质和核苷酸序列的同源性和亲缘关系等。

层析等电聚焦法提纯葡萄球菌肠毒素D

我们成功地建立了层析等电聚焦的三步程序,分离提纯葡萄球菌D型肠毒素。首先用CG-50树脂吸附由细菌培养液中获得粗毒素,然后在PBE94柱上进行层析等电聚焦,最后经过Sephacryls-200过滤。纯化的SED纯度约98%,回收率89%,分子量为28500,pI 7.6。Western blot,免疫双向琼脂扩散的鉴定试验表明,纯化SED与其相应抗血清是特异性反应。

葡萄球菌毒素和葡萄球菌病

目前葡萄球菌仍是医院和公共场所的主要病原之一。近来美国疾病控制中心报告,在引起医院获得性感染中,葡萄球菌占居第二位,仅次于大肠杆菌。它们造成脓毒症、创伤感染、还能够侵入皮肤和粘膜的微小裂口,进入血液,在其中繁殖,引起心内膜炎、脓肿广泛转移及内毒素休克等等。

细菌毒素研究历史和分类

细菌毒素研究历史和分类雷祚荣综述严共华审校（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）一百多年来，毒素研究工作在全世界逐步展开，获得了巨大发展，特别是７０年代以来发展更快，被称为毒素研究的新世纪。研究工作的深度日益增加，生化、免疫、遗传等最...

细菌毒素的分子生物学研究进展

一百年来,毒素研究工作在全世界逐步展开,获得了巨大发展。特别是70年代以来发展更快,被称为毒素研究的新世纪,研究工作的深度日益增加,生化、免疫、遗传等最新技术都应用于毒素的研究,因此毒素研究已成了分子生物学一个极活跃的领域。毒素是细菌的主要致病因子,致病力强,对人畜健康危害甚大,无论人医、兽医、不管是在防疫还是医疗方面都日益受到重视。

人CD80-Linker-SEA重组毒素的设计及生物学特性预测

目的 :构建人重组CD80 Linker SEA毒素的真核表达载体并预测Linker的合理性和可行性。方法 :应用核酸和蛋白质序列分析软件GolgKey对融合基因及Linker部位翻译后在二级结构水平上的一些生物学特性 ,诸如柔性、抗原性、亲水性及表位等加以预测。结果 :CD80 Linker SEA融合基因的氨基酸序列经软件分析 ,并分别与CD80和SEA单独的分析结果相比较 ,发现在二级结构的水平未出现新的抗原性 ,同时在Linker部位具有很低的抗原性 ,亲水性没有改变 ,Linker部位呈中性 ,CD80和SEA具有原来各自的表位特征 ,无新的表位出现。结论 :本研究通过计算机软件对CD80 Linker SEA融合蛋白的预测 ,并与CD80、SEA各加以对比分析和比较 ,以利于在重组过程中有一个合理的设计 。

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究

抗金葡菌肠毒素单克隆抗体的实验和应用研究＊董邦权李恩善雷祚荣１杨琨金伯泉汪美先（第四军医大学免疫学教研室，西安７１００３２）由金黄色葡萄球菌产生的肠毒素（ＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ，简称ＳＥ）是一组分子量为２４～３０ｋｄ的单肽...

PCR检测食品标本中A、B、E和F型肉毒梭菌

ＰＣＲ检测食品标本中Ａ、Ｂ、Ｅ和Ｆ型肉毒梭菌军事医学科学院微生物流行病所（北京１０００７１）王颖群严共华雷祚荣用常规方法从食物中分离鉴定出肉毒梭菌至少需４天，不能达到快速监测食品的目的。为此，我们通过检索肉毒神经毒素的基因序列，选择保守区设计简并引物...

双抗体夹心酶联免疫试验检测牛奶中金黄色葡萄球菌C_2型肠毒素

金黄色葡萄球菌C_2型肠毒素是食物中毒的主要毒素之一,这类食物中毒是世界性卫生问题,几乎所有国家都暴发这样的食物中毒。受污染的常见食物是奶及其奶制品等。检测金黄色葡萄球菌C_2型肠毒素的方法也有人报道,如:动物实验。

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相对亲和力依次为４Ｄ５＞ＤＣ３＞ＤＣ４＞４Ｄ３＞ＤＢｌｌ。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体与ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并以该法检测了自临床标本中分离的８０林金葡萄菌所产生的ＳＥＤ，其产毒率为４１．３％。

葡萄球菌肠毒素的检测方法研究进展

葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal Enter-toxins,简称SE)是一组血清学上互不相同的胞外蛋白质,其分子量为24000～30000,主要是由金黄色葡萄球菌(金葡菌)所产生的。至今还有一些肠毒素尚未被人们认识,但还没有一种新的方法能够将它们全部鉴定出来。从血清型上已被鉴定的SE 有5种:即SEA、SEB、SECs、SED 和SEE。各型均能够引起细菌性食物中毒,最常见的主要症状为腹泻、吐呕和低烧等。到目前为止,已有许多种类型的生物学、免疫学和基因探针技术均可用于检测食物或金葡菌培养液中的SE。本文就检测SE 的方法及其进展作一概述。

反向乳胶凝集法快速检测肉毒A、B型毒素

采用物理吸附法，将Ａ、Ｂ型肉毒抗体致敏于聚苯乙烯乳胶，检测内毒毒素。通过不同实验条件的反复比较实验证明：制备的乳胶，可检出Ａ型肉毒类毒素３．１～３．９ｎｇ／ｍｌ，Ｂ型肉毒类毒素７．８ｎｇ／ｍｌ。反应快速，几分钟之内肉眼观察显示凝集，３０～６０ｍｉｎ判断结果。特异性好，与炭疽保护性抗原、绿脓杆菌外毒素Ａ和葡萄球菌肠毒素（Ａ－Ｄ）反应阴性，Ａ、Ｂ型肉毒类毒素间基本不出现交叉反应。食物标本不需要特珠处理，食物成份对检出没有干扰。Ａ、Ｂ型肉毒抗体致敏乳胶置４～８℃存放１年，检出灵敏度和特异性未见降低。

金黄色葡萄球菌A型肠毒素单克隆抗体的制备

金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)A型肠毒素(SEA)是金葡菌产生的一种水溶性胞外蛋白质,能引起人和某些哺乳动物的急性胃肠炎。SEA的致病作用机理目前尚不清楚。最近研究发现SEA还具有对人和小鼠等某些动物T淋巴细胞的多克隆丝裂原效应。因此,制备抗SEA单克隆抗体。

金黄色葡萄球菌肠毒素和中毒性休克毒素的分析

采用反向间接血凝法和双向免疫琼脂扩散试验,检测131株金葡菌的肠毒素和TSST-1并对其青霉素和甲氧西林耐药性作了测定。获得产毒株120株,产毒率为91.6%,Ⅰ型肠毒素为16.7%,Ⅱ型的为11.7%,Ⅲ型以上的占55%、TSST-1为16.7%。发现对青霉素的耐药株占92.3%,耐甲氧西林的占43.2%,产肠毒素的菌株耐青霉素为90.9%,耐甲氧西林43.3%。产TSST-1株耐青霉素为95.9%,耐甲氧西林为50%。对检测金葡菌肠毒素的临床意义进行了讨论。

中毒性休克毒素-1的结构-功能分析

中毒性休克毒素－１的结构－功能分析尚继栋雷祚荣（军事医学科学院微生物流行病研究所，北京１０００７１）Ｔｏｄｄ等于１９７８年首次介绍了中毒性休克综合征（ＴＳＳ），认为此病是由金黄色葡萄球菌引起的。１９８１年从ＴＳＳ相关的金葡菌株中分离到与发病密切相关的...

乳胶凝集法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素

在比较应用不同乳胶和不同致敏方法致敏金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)IgG特点的基础上,我们尝试建立一种快速检测SE的反向间接乳胶凝集试验法(RPLA)。检测19株参考产毒金葡菌均为阳性,FRI 184参考不产毒株为阴性。并实际检测了87株临床分离金葡菌培养上清的产毒情况,其产毒率为85.1％,比双向免疫琼脂扩散法(DIGD)的检出率(65.5％)高出许多,与反向间接血凝法(RPHA)的检出率(77.0％)接近。产毒阳性菌株中,RPLA以检出产SEA、SEB、SEC和SED混合型居多(38/74),而DIGD(34/57)和RPHA(24/67)以检出产SEA型为主。结果表明,我们制备的乳胶试剂具有敏感(最低可检出纯SE 6～12ng/ml)、特异(与大肠杆菌等5种不产SE培养菌液不发生凝集及乳胶自凝)和快速(室温反应5～7h)的特点,可以满足实际需要。

4类葡萄球菌肠毒素的3种放大酶联免疫吸附测定技术的研究

葡萄球菌肠毒素是引起食物中毒的主要致病蛋白质之一。目前由于对各类毒素检查方法的敏感性不太高(ELISA在1～10ng/ml),常常造成漏检。国内仅1篇文献报告采用BA-ELISA测定SEB的最低下限为0.38～1.5ng/ml,去年日本学者报道用BA-ELISA测定TSST的敏感性限30pg/ml。为了进一步提高对各类SE检测的敏感度,我们使用自制的兔抗SEA。