海南海域海洋红酵母的分离鉴定和应用性能评价

从海南海域的海滩、红树林、渔港码头、产盐滩涂、入海河沟分离海洋红酵母,旨在从中筛选与养殖对象共生的优良菌株。从海南海域分离和纯化海洋红酵母,对海洋红酵母进行形态和生理学及分子生物学的鉴定,大量发酵海洋红酵母,提取分离类胡萝卜素并测定其含量,并将海洋红酵母与鱼虾等养殖对象共培养试验。结果表明,共分离了40多株酵母菌,经形态和生理鉴定以及产类胡萝卜素试验,筛选得到一个高产类胡萝卜素的红酵母属(Rhodotorula)菌株。该菌株在葡萄糖2%、蛋白胨2%、酵母提取物0.3%、核黄素2×10-6 mol/L、pH 4.5的培养基中,于28℃振荡(180 r/min)培养72 h,其细胞生物产量可达87.55 g/L,类胡萝卜素含量可达520 mg/L;可以在13%高盐和pH 1.0强酸中培养生长;经过与鱼共培养试验,结果显示在合适的菌体浓度条件下,该菌株对鱼无毒害,并与鱼共生。该菌株与鱼共生,显示良好的应用前景,将其应用于盐诱导基因启动子的克隆和盐诱导表达外源基因蛋白(如抗菌肽)的海洋红酵母工程菌的构建,可以更好地应用于水产养殖业。

紫外诱变筛选海洋红酵母S8的尿嘧啶缺陷型菌株

本课题组从海南天然海域筛选到一株高产类胡萝卜素的海洋红酵母菌株S8,该菌株对鱼无毒害,并与鱼共生,欲将其应用于盐诱导表达外源蛋白的海洋红酵母工程菌的构建。本研究利用紫外诱变筛选的方法处理S8菌株,通过统计其UV致死率、5-氟乳清酸致死率等筛选S8的尿嘧啶营养缺陷型突变株。研究结果表明,供试菌株通过紫外线诱变、5-氟乳清酸致死和回复突变率的实验筛选,共获得16株稳定的尿嘧啶缺陷型突变株,突变菌株在基本培养基中培养了8d仍不能生长。选择了其中的一株ST5进行了产胡萝卜素能力的测定,结果表明,在同样的培养条件下,野生型S8菌株细胞生物产量可达87.55g/L,类胡萝卜素含量可达520μg/g,突变株ST5的细胞生物产量为85.45g/L,类胡萝卜素含量为512μg/g;ST5的产胡萝卜素能力方面与野生型S8无明显差异。因此,尿嘧啶缺陷型菌株ST5可为下一步海洋红酵母工程菌的构建提供受体菌。

皇帝蕉薄片外植体愈伤组织的诱导及植株再生

将皇帝蕉试管苗茎段徒手切成厚约1mm的薄片,经无菌的0.5%柠檬酸溶液处理片刻后,接入各种培养基中。结果表明:(1)适度的暗培养预处理有利于愈伤组织诱导,合适暗培养天数为4d;(2)诱导愈伤组织最佳培养基为:B5+2,4-D13.572μmol/L+IBA4.921μmol/L+NAA5.371μmol/L+KT13.94μmol/L+椰乳5%+PP3330.0001mg/L,愈伤组织诱导率为86.0%;(3)最佳愈伤组织分化芽培养基为:改良MS培养基+BA13.6831μmol/L+NAA0.537μmol/L,芽分化率达到87.0%;(4)诱导芽生根的最佳培养基是:1/2MS+IBA0.492μmol/L(或+NAA0.537μmol/L),生根率达到100%。

海洋红酵母电转化条件的研究

采用电穿孔的方法对海洋红酵母进行外源DNA的转化.通过调整参数,对影响电转化的主要因素进行探索,初步建立了载体pTEF1/Zeo-rDNA对海洋红酵母的高效电转化方法.结果表明,当采用对数生长中期的菌体制备感受态细胞、电压为900V、质粒浓度为20mg/L和0.2cm电转化杯时,转化率达到最大值,为每微克质粒DNA52个转化子.经抽样鉴定所得到的转化子均为阳性克隆.首次建立了以海洋红酵母为宿主的高效电转化体系,为外源基因在海洋红酵母中的表达奠定了基础.

气相色谱-质谱联用法对菠萝、杧果和米蕉混酿果酒的香气物质的分析

采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用法对菠萝、杧果和米蕉果实混酿的果酒的香气物质进行了分析。结果表明,菠萝、杧果和米蕉混酿果酒的香气物质的化学成分与菠萝果酒有显著差异,其中混酿果酒的香气物质更为丰富,尤其是包含着更多的中、高沸点的香气物质。这为感观评价提供了仪器分析依据。

红掌切花的瓶插保鲜液研究(摘要)(英文)

[目的]研究红掌切花的瓶插保鲜液,为红掌种植及筛选保鲜方法提供参考。[方法]以红掌(Anthurium seherzerianum)中的常用切花品种‘热情’为试验材料,采用3种不同的瓶插液配方,处理①:2%二甲基琥珀酰肼+1%8-羟基喹啉硫酸盐(HQS) +0.1%Ca(NO3)2+5%蔗糖;处理②:5%蔗糖+0.1 g/L明矾+10 mg/L6-BA;处理③:4%蔗糖+0.08% NaCl+0.01%过磷酸钙+0.01%中药杀菌剂(黄连的乙醇提取液) +0.1 mmol/LNaOH+0.1 mmol/L柠檬酸+10 mg/L6-BA。并与常用红掌保鲜配方(4%蔗糖+50 mg/LAgNO3+0.05 g/LNaPO4)进行对比,筛选最佳的红掌瓶插保鲜液。[结果]试验中处理①的配方比较简单,不能很好地杀菌,处理②虽然含有一定的碳源和营养,也有杀菌剂,但组成较简单,仍不能很好地满足红掌切花采后各方面生理的需要,以配方③为最佳的瓶插保鲜液,保鲜期为23 d,比对照延长了13 d,观赏期达31 d,比对照延长了18 d,效果显著;且配方③明显地减少了红掌佛焰苞的水分丧失,有利于维持组织的含水量,降低细胞膜透性,抑制膜脂的过氧化作用,减少丙二醛含量的积累,提高了SOD的活性,提高了细胞保护酶的活性,增加了脯氨酸和可溶性糖的含量,降低了呼吸速率。[结论]4%蔗糖+0.08% NaCl +0.01%过磷酸钙+0.01%中药杀菌剂(黄连的乙醇提取液) +0.1 mmol/L NaOH+0.1 mmol/L柠檬酸+10mg/L6-BA配方达到了延长红掌佛焰苞保鲜期的目的。

红掌切花的瓶插保鲜液研究

[目的]研究红掌切花的瓶插保鲜液,为红掌种植及筛选保鲜方法提供参考。[方法]以红掌(Anthuriumseherzerianum)中的常用切花品种‘热情’为试验材料,采用3种不同的瓶插液配方,并与常用红掌保鲜配方进行对比,研究红掌的瓶插保鲜液。[结果]以配方3即4%蔗糖+0.08%NaCl+0.01%过磷酸钙+0.01%中药杀菌剂(黄连的乙醇提取液)+0.1mmol/LNaOH+0.1mmol/L柠檬酸+10mg/L6-BA为最佳的瓶插保鲜液,保鲜期为23d,比对照延长了13d,观赏期达31d,比对照延长了18d,效果显著;且配方3明显地减少了红掌佛焰苞的水分丧失,有利于维持组织的含水量,降低细胞膜透性,抑制膜脂的过氧化作用,减少丙二醛含量的积累,提高了SOD的活性,提高了细胞保护酶的活性,增加了脯氨酸和可溶性糖的含量,降低了呼吸速率。[结论]4%蔗糖+0.08%NaCl+0.01%过磷酸钙+0.01%中药杀菌剂(黄连的乙醇提取液)+0.1mmol/LNaOH+0.1mmol/L柠檬酸+10mg/L6-BA配方达到了延长红掌佛焰苞保鲜期的目的。

海洋红酵母耐盐cDNA文库的构建与序列分析

利用消减杂交技术(SSH)构建了海洋红酵母耐盐cDNA文库,一共挑出270个克隆子,选取了25个克隆进行测序,经过Blast分析,初步认为有一个克隆是与耐盐相关的基因,2个属于未知基因,其余为核RNA。

海南红掌的采收包装储运及其保鲜技术

结合国内外红掌采后处理的经验,全面介绍海南红掌在采收、分级、气调保鲜包装、采后冷藏、运输,以及化学保鲜处理的内容。同时,针对目前海南红掌采后保鲜中存在的问题进行讨论,并且提出了相应的对策。