松果菊苷对刀豆蛋白A所致急性肝损伤小鼠的保护作用及对细胞外组蛋白的影响

目的研究松果菊苷对刀豆蛋白A(Con A)诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用以及对细胞外组蛋白水平的影响,并初步探讨其可能机制。方法将野生型C57BL/6(B6)小鼠随机分为正常对照组(n=6)、Con A染毒组(n=8)和松果菊苷+Con A组(n=8)。Con A染毒组小鼠经尾静脉注射Con A(30mg/kg)诱导急性肝损伤,松果菊苷+Con A组小鼠先给予松果菊苷(50mg/kg)连续灌胃3d,然后再给予Con A染毒;正常对照组仅给予生理盐水。计算各组小鼠的生存率,HE染色观察肝损伤情况,ELISA法检测血清细胞外组蛋白表达情况,高效液相芯片系统测定细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平的变化。结果与正常对照组相比,Con A染毒组小鼠肝损伤严重,病理学观察可见大量肝细胞凋亡变性坏死,血清ALT、AST水平明显升高,血清中细胞外组蛋白和细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平均明显升高(P<0.01)。与Con A染毒组比较,松果菊苷+Con A组生存小鼠明显增多,肝损伤程度亦减轻;细胞外组蛋白、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平均显著低于染毒组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论松果菊苷能明显减轻Con A诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与降低血清中细胞外组蛋白及肝损伤相关的细胞因子水平有关。

家族性父系遗传的额外小染色体家系调查及探讨

额外小染色体(Extra small chromosome)又称超效染色体(Supernumerary chromosome)是指一类多于正常染色体数目(2n)的小染色体。根据国际标准化人类染色体命名体制(ISCN 1985),这种来源不明的一系列不同的异常小染色体,称为标记染色体(Marker chromosome,简称mar)它泛指一系列不同的异常小染色体,其临床表现不尽相同,可正常,亦可有多种异常。我科遗传研究室在优生咨询患者的染色体检查中。

十四味建中汤对氧惊厥小鼠惊厥潜伏期及脑组织炎症细胞因子含量的影响

目的探讨十四味建中汤对氧惊厥小鼠惊厥潜伏期及脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)含量的影响及意义。方法将56只小鼠随机分为7组:氧惊厥6 h组、氧惊厥24 h组、氧惊厥48 h组、十四味建中汤+氧惊厥6 h组(建中汤6 h组)、建中汤24 h组、建中汤48 h组以及正常对照组。建中汤组小鼠在惊厥发生2周前每日灌胃1次十四味建中汤煎剂。将氧惊厥组和建中汤组小鼠置于高压氧(500 k Pa)环境中至惊厥发作,建立氧惊厥小鼠模型。用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织IL-1β和IL-10含量。结果建中汤组小鼠氧惊厥潜伏期与氧惊厥组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。氧惊厥24 h组和48 h组小鼠脑组织IL-1β含量均显著高于正常对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);建中汤组24 h组和48 h组小鼠脑组织IL-1β含量均显著低于同时间点氧惊厥组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。在同时间点,氧惊厥组、建中汤组和正常对照组之间小鼠脑组织IL-10含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论十四味建中汤处理未能显著延长小鼠的氧惊厥潜伏期,但可有效降低氧惊厥后脑组织IL-lβ含量,有助于重建促炎和抗炎细胞因子的平衡,减轻惊厥性脑损伤。

平衡易位致子代多发畸形1例

染色体平衡易位携带者在人群中约占0.47％,是造成流产和畸形儿的重要遗传因素,平衡易位无遗传物质丢失,本人并不表现出疾患,但可遗传且影响生育。对平衡易位探讨和研究,对优生优育,提高人口素质,阻止遗传病儿的出生,具有极其重要的意义。我科遗传研究室在优生咨询患者的染色体检查中。

母血AFPIRMA对筛选神经管缺陷的意义

近年来 ,125I标记单克隆抗体的免疫放射分析技术(IRMA)已在临床上广泛应用。单克隆抗体制备的试剂盒灵敏度高 ,但亦存在一定的缺点 ,如它的特异性太单一 ,一种单克隆抗体在免疫诊断中的敏感性不如多克隆抗体。AFP有多种亚型 ,如果采用某一种单克隆抗体制备的试剂盒进行检测 ,则必有一部分病人被漏检 ,因此从原则上来说 。

利用孕妇血浆DNA检测胎儿性别的研究

本文探讨应用孕妇血浆中游离DNA进行无创性产前性别诊断的可行性。用柱分离法提取73例孕妇血浆中DNA,用巢式PCR技术检测其胎儿SRY基因。结果73位孕妇血浆DNA含量为0.0062～0.3399μg/μL。巢式PCR检测胎儿SRY基因的灵敏度为97.37%(37/38),假阴性率2.86%(1/35),特异度85.71%(30/35),假阳性率13.16%(5/38),总符合率91.78%(67/73)。采用孕妇血浆胎儿DNA和巢式PCR技术可以快速简便的进行无创性产前性别诊断,诊断结果的准确率为91.8%,对性连锁遗传病的预防具有重要意义。

多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征

为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断,选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因,以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因,设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针,在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB病毒转化技术,把唐氏综合征患者外周血B淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件,使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致,接近100%,模板浓度在3～300ng/μL范围内,△CT值的变异系数小于15%,浓度在30ng/μL时,变异系数最小(<10%),以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好,变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本,正常人△CT值范围是-1.90～-1.30,患者的△CT值范围是-2.95～-2.15,两组之间无交叉重叠,有明显差异(P<0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功,染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此,实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。

RNF8的亚细胞定位及其在胃癌中的表达与凋亡调控

目的研究环指蛋白8(ring finger protein 8,RNF8)的亚细胞定位及其在胃癌中的表达及功能。方法构建RNF8正常及突变的真核表达载体,转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜下观察其亚细胞定位情况;利用Western blot及RT-PCR法分别检测RNF8在胃癌组织及细胞中的表达情况;利用流式细胞仪检测RNF8高表达对胃癌细胞凋亡的影响。结果野生型RNF8主要定位于胞核,其指环(RING)结构域和叉头相关(forkhead-associated domain,FHA)结构域突变均对RNF8的胞核定位有一定的影响;RNF8在胃癌细胞中的表达明显下调;外源导入RNF8可以导致胃癌MGC803细胞发生凋亡。结论 RNF8可能通过调控细胞凋亡参与肿瘤发生发展过程。

高压氧对大鼠创伤性脑损伤后血小板膜糖蛋白表达的影响

目的探讨高压氧对创伤性脑损伤（traumatic braininjury，TBI）大鼠血小板膜糖蛋白CD31和CD62p表达的影响及意义。方法56只SD大鼠按抽签法随机分为7组：TBI6h组、TBI48h组、TBI96h组、高压氧6h组、高压氧48h组、高压氧96h组以及假手术组，每组8只。建立侧位液压撞击致重度TBI大鼠模型。应用流式细胞术在相应时相点检测各组大鼠血小板膜糖蛋白CD31和CD62p表达。结果TBI6h组、TBI48h组、TBI96h组CD31（30．8±9．0，32．5±9．2，29．0±5．0）和CD62p（34．5±9．1，33．9±7．5，30．4±6．4）表达均明显高于假手术组（18．9±5．5，19．5±6．1，P〈0．05）。高压氧96h组CD31（22．7±5．5）明显低于TBI96h组（29．0±5．0，P〈0．05）；高压氧48h组、高压氧96h组CD62p（26．1±5．8，23．6±5．7）均分别明显低于TBI48h组、TBI96h组（33．9±7．5，30．4±6．4，P〈0．05）。结论TBI大鼠急性期存在血小板活化增强，高压氧对其有一定的抑制性调节作用，有助于抑制TBI后微血栓形成、减轻继发性脑损伤。

依达拉奉对氧惊厥小鼠脑组织白细胞介素-1β和白细胞介素-10含量的影响

将56只小鼠随机分为氧惊厥组、依达拉奉组以及正常对照组。氧惊厥组和依达拉奉组小鼠置于高压氧环境中至惊厥发作,建立氧惊厥小鼠模型。用酶联免疫吸附法检测小鼠脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-10(IL-10)含量。结果显示,依达拉奉24 h组和48 h组小鼠脑组织IL-1β含量均低于同时间点氧惊厥组(P<0.05);氧惊厥组、依达拉奉组和正常对照组之间小鼠脑组织IL-10含量差异无统计学意义(P>0.05)。提示依达拉奉可以有效降低氧惊厥小鼠在惊厥早期脑组织IL-1β水平,有助于减轻惊厥性脑损伤。

高压氧对脑缺血再灌注小鼠肺组织白细胞介素-1β和白细胞介素-10水平的影响

目的 观察高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）对脑缺血再灌注（ischemia-repeffasion,IR）小鼠肺组织白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-10（IL-10）水平的影响,探讨其作用和意义.方法 63只成年雄性BALB/c小鼠按抽签法随机分成3组,每组又分为3个亚组,分别为：（1）IR组：1R4h组、IR24h组、IR48h组;（2） HBO组：IR4h±HBO组、IR24h±HBO组、IR48h±HBO组;（3）假手术（sham）组：sham4h组、sham24h组、sham48h组.每个亚组7只.夹闭小鼠双侧颈总动脉,建立脑缺血再灌注动物模型.采用ELISA法检测缺血再灌注4 h（IR4h）、24 h（IR24h）和48 h（IR48h）时各组小鼠肺组织IL-1β和IL-10水平.结果 在IR4h时,HBO组[（217.50 ±40.45） pg/g]和IR组[（250.15 ±45.61） pg/g] IL-1β水平均显著高于同时间点sham组[（139.17±31.49）pg/g]（均为P＜0.01）;HBO组和IR组IL-1β水平差异无统计学意义.在IR24h时,HBO组[（189.48±30.18） Pg/g]和IR组[（235.86±46.87） pg/g]IL-1β水平均显著高于同时间点sham组[（137.88±33.54） Pg/g]（分别为P＜0.05,P＜0.01）,HBO组IL-1β水平显著低于同时间点IR组（P＜0.05）;HBO组IL-10水平显著高于IR组和sham组（均为P＜0.05）.结论 HBO可显著降低IR小鼠肺组织IL-1β水平、升高IL-10水平,对IR所致急性肺损伤具有一定的保护作用.

创伤性脑损伤大鼠血小板膜糖蛋白表达的变化

为探讨血小板活化在创伤性脑损伤(TBI)大鼠急性期的作用,建立侧位液压撞击致重度TBI大鼠模型,应用流式细胞术在相应时间点检测各组大鼠血小板膜糖蛋白CD31和CD62p的表达。结果显示,TBI大鼠6 h组、24 h组、48 h组、96 h组血小板膜糖蛋白CD31和CD62p表达均明显高于假手术组(P<0.05或P<0.01)。提示TBI大鼠在急性期存在血小板活化增强,利于微血栓形成,加重继发性脑损伤。

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法 (FQ PCR) ,并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBVDNA 314bp特异保守序列的 1对引物及 1条带 2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE 5 70 0型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同时PCR产物经琼脂糖凝胶电泳 ,EB染色 ,UVP(凝胶成像仪 )检出有 314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术 ,用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct,原始拷贝数在 10 5 ml以上者为阳性 ,用定量及定性PCR 2种方法检测 6 98例血清标本的结果表明 :用FQ PCR技术共检测出 2 0 4例为阳性 ,阳性率 2 9.2 % ;用定性PCR观察到 193例有阳性特异带 ,阳性检出率为 2 7.6 5 %。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ PCR检测为阴性者。结论 FQ PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便、灵敏度更高 ,减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点 。

用短串联重复序列诊断唐氏综合征

目的 建立一种准确、快速、简便的唐氏综合征 (Down's syndrome,DS)基因诊断技术。方法选择 10个位于 2 1号染色体上唐氏综合征关键区域内 (2 1q2 2 .1～ 2 1q2 2 .2 )或附近的短串联重复序列 (shrottandem repeats,STR)位点 ,应用 PCR与聚丙烯酰胺凝胶电泳或荧光 PCR(ABI 310 )进行 STR分型 ,根据STR位点出现 3条带图谱诊断 DS,荧光半定量的 2∶ 1带型可辅助诊断 ,并用细胞遗传学染色体核型分析进行证实。结果 在 2 0例可疑患者外周血中有 5例 DS阳性结果 ,其中 1～ 6个 STR位点呈 3条带图谱 ,其余为强度 2∶ 1的两条带型。 2 6例 DS的高危孕妇羊水细胞均未检出 3条带图谱和 2∶ 1图谱。基因诊断结果与细胞染色体核型分析一致。结论 联合进行 2 1号染色体上 10个 STR位点的基因分型 ,可准确、快速、简便地作出 DS的基因诊断 ,促进 DS产前诊断的开展 ,降低发病率。

结直肠癌中p53对组蛋白去乙酰化酶2表达的调控作用

目的 :研究结直肠癌中p53与组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)表达的相关性及其调控关系。方法:利用美国癌症基因组图谱计划(the Cancer Genome Atlas,TCGA)结直肠癌临床样本数据,分析p53与HDAC2表达的相关性。采用蛋白质印迹法检测HDAC2在野生型(wild type,WT)及p 53基因敲除型(p53-/-)结直肠癌HCT116细胞系中的表达情况。采用腺病毒感染技术恢复HCT116p53-/-细胞中p53的表达,然后再用蛋白质印迹法检测HDAC2表达的变化。进一步利用TCGA结直肠癌数据,分析HDAC2与p53信号通路相关基因的相关性。结果:TCGA大数据分析发现,在382例结直肠癌组织的RNA测序标本中,p53与HDAC2转录水平呈现明显的正相关性(r=0.198,P=0.000 1)。体外细胞系检测结果显示,p 53基因敲除的结直肠癌HCT116 p53-/-细胞中HDAC2蛋白的表达水平明显低于p53野生型的HCT116 WT细胞(P<0.000 1);而将重组腺病毒Ad-p53感染HCT116 p53-/-细胞后,p53和HDAC2蛋白表达水平均重新上调(P值均<0.000 1)。TCGA结直肠癌大数据分析发现,HDAC2与9个p53信号通路相关基因具有显著的同现趋势(P值均<0.05)及正相关性(P值均<0.01)。结论:结直肠癌中p53对HDAC2表达可能发挥重要的调控作用。HDAC2可能作为p53的一个下游调控蛋白,参与p53信号转导,从而在肿瘤的发生和发展进程中发挥重要作用。

孕妇血浆纤维结合蛋白变化预测胎膜早破早产的临床研究

目的 探讨孕妇血浆纤维结合蛋白 (fibronectin ,FN)的变化及对妊娠结局的影响。方法 2 0 0 1年 12月至 2 0 0 2年 12月采用酶联免疫固相吸附法测定 110例妊娠 2 0～ 2 8周妇女FN值 ,并观察妊娠结局。结果 胎膜早破、早产组FN明显低于对照组 (P <0 0 1) ,宫内感染、产褥感染发生率明显高于对照组 (P <0 0 0 1)。结论 FN水平降低 ,可作为预测胎膜早破发生。

唐氏综合征患者永生细胞系的建立

目的建立唐氏综合征患者永生细胞系,为唐氏综合征的基因诊断提供标准品。方法采集唐氏综合征患者外周血,采用 EB 病毒转化外周血 B 淋巴细胞和加环孢霉素 A 抑制 T 淋巴细胞的技术,建立永生淋巴母细胞系。用细胞遗传学方法、实时荧光定量 PCR 及短串联重复序列(STR)多态性分析技术检测其建系前后的遗传特性及稳定性。结果建系成功,经过传代、冻存和复苏,建系后第10代染色体核型和 DNA 标志未发生改变。建系前后染色体核型均为47,XX,+21。多重荧光相对定量 PCR 鉴定,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株的△Ct 值均在-2.55±3s 范围内,与正常对照相比△Ct 值范围无重叠。21号染色体上的 STR 基因座 D21S11多态性分析表明,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株均有同样的3种基因型。结论染色体核型和 DNA 分析表明,唐氏综合征患者永生细胞系建立前后遗传特点一致,且稳定,可用作基因诊断试剂盒产品质量检测、质量控制的标准品。