贝莱斯芽孢杆菌BR-01菌株高产抗菌肽培养基的优化及其抗菌肽的鉴定

贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) BR-01菌株对水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)具有较好的拮抗作用。为了提高该菌株的抗菌肽发酵产量和生防价值,对其产抗菌肽培养基进行了优化,并初步鉴定了其抗菌肽的成分。以B.velezensis BR-01菌株无菌发酵滤液对Xoc的抑菌圈直径为评价指标,从7种常见培养基中筛选出最适培养基,通过单因素试验优化初始培养基各组分含量和发酵条件,再利用Plackett-Burman (PB)试验筛选出影响发酵滤液抑菌活性的显著因素,运用响应面分析法获得最优发酵条件。利用PCR分析B.velezensis BR-01基因组中抗菌肽合成相关基因;使用液相色谱-质谱联用(Liquid Chromatography-Mass Spectrometer, LC-MS)技术鉴定其产生的抗菌肽。结果表明,B.velezensis BR-01菌株最佳抗菌肽培养基配方与发酵条件为麦芽糖11.89 g/L、酵母提取物13.54 g/L、NaCl 5 g/L、KH_2PO_4 1 g/L、初始pH值为7、发酵时间48 h、发酵温度32.3℃。该优化方案下,B.velezensis BR-01菌株的无菌发酵滤液对Xoc的抑菌圈直径为(42.5±0.2) mm,显著高于优化前的(28.0±0.9) mm,比优化前增大51.79%。抗菌肽主要成分初步鉴定为溶杆菌素(Bacilysin)、表面活性素(Surfactin)、伊枯草菌素(Iturin)和丰原素(Fengycin)。本研究为B.velezensis BR-01菌株用于快速、批量发酵制备生防菌液,以及其抗菌肽的分离纯化、结构鉴定、田间生防利用等后续研究提供了理论基础。

后金融危机时期流动性不足及其对我国的影响探究

本文选自2008年IAFE会议主题。作者从全球资本流动的角度来分析后金融危机时期的流动性不足的起因,发展和对策,和对我国可能产生的影响,并提出相关建议。

2020年那坡县高寒山稻区水稻白叶枯病发生情况及防控建议

本文总结了2020年那坡县高寒山稻区水稻白叶枯病发生情况,分析了其发生的原因并提出相应的防控措施。

水稻白叶枯病菌的一个非典型趋化受体基因与游动性和早期侵染相关

在对水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)PXO99A-GX菌株的基因组注释过程中发现了一个非典型趋化受体基因PXO_01024,预测其产物具有2个跨膜结构域(TMD)和1个甲基接收结构域(MA),但缺少配体结合结构域(LBD)。为明确该基因的生物学功能,本研究通过同源双交换的方法构建了PXO_01024的缺失突变体DM01024。该基因缺失导致细菌的游动性几乎丧失,生物被膜减少,而互补菌株CDM01024的这些性状又恢复至野生型水平;在有伤接种条件下,DM01024的毒力与野生型相比并无明显变化,但是在喷雾接种(无伤)条件下,DM01024的病情指数相比野生型显著降低,而CDM01024的毒力又恢复至野生型水平,说明PXO_01024在侵染早期发挥作用;利用毛细管法对野生型及突变体DM01024进行趋化性检测,发现DM01024对甲硫氨酸、丙氨酸、亮氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、苯丙氨酸、异亮氨酸、葡萄糖、麦芽糖、木糖、果糖、琥珀酸和酒石酸的趋向性相比野生型显著下降。本研究表明,非典型趋化受体基因PXO_01024与Xoo的趋化性、游动性和早期侵染相关。

短期强化血糖控制对重症感染合并应激性高血糖患者血糖变异性及预后的影响

目的研究应激性高血糖并发重症感染患者接受短期强化血糖控制对预后和血糖变异性的影响。方法选择我院2018年6月到2020年6月的应激性高血糖并发重症感染患者30例,依随机数字表法分为常规组和强化组各15例,强化组接受短期强化血糖控制,常规组接受常规血糖控制,比较两组治疗效果。结果治疗7天后强化组降钙素原、白细胞计数低于常规组;强化组血糖指标优于常规组,P<0.05;强化组28天病死率低于常规组,治疗7天后急性生理与慢性健康评分优于常规组,P<0.05;两组低血糖率差异不显著,P>0.05。结论给予应激性高血糖并发重症感染患者短期强化血糖控制可显著改善其降钙素原、白细胞计数、血糖等水平,降低血糖变异性、缩短血糖达标时间,改善预后。

犬子宫内膜基质细胞的分离培养与鉴定

通过优化犬子宫内膜基质细胞原代及传代培养方法来提高分离培养细胞纯度和效率,以期为犬子宫内膜相关疾病研究建立模型。采用不同浓度胶原蛋白酶消化、二次网筛过滤及差时消化法,选择细胞消化最适酶浓度,改进纯化方法,观察犬子宫内膜基质细胞的形态学和生长特性,通过免疫荧光染色鉴定分离的细胞并作图像分析,MTT法检测不同时间点的细胞活率。结果:0.5%胶原酶Ⅰ消化1 h,经400目筛网过滤可获得大量活力较好的犬子宫内膜基质细胞,且处于发情期的子宫样本分离获得的基质细胞活力更好;细胞呈长梭形或多角形,平行或涡旋状生长,原代细胞培养2~3 d基本铺满培养瓶瓶底,可进行有限的传代培养,传代细胞生长迅速并维持基本的形态不变,P9代之前细胞增殖旺盛,冷冻前后均有较高的存活率;免疫荧光法鉴定表明,所获细胞波形蛋白抗体染色阳性,角蛋白抗体染色阴性,证明确为子宫内膜基质细胞,纯度可达95%。本试验为研究犬子宫内膜相关疾病提供了理想的细胞模型。