地黄中松果菊苷对谷氨酸诱导的PC-12细胞神经损伤模型的氧化应激和NMDAR1表达的影响

目的:观察从地黄中提取的松果菊苷对谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法:采用谷氨酸诱导PC-12细胞损伤建立神经损伤模型,加入2、5、10μmol/L的松果菊苷,24 h后通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞内Ca^(2+)和活性氧(ROS)水平,用In Cell Western法检测谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR1)水平,用试剂盒检测细胞上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组的细胞活力和细胞内SOD活力显著降低(P<0.01),细胞内Ca^(2+)浓度、NMDAR1蛋白表达、ROS、MDA和LDH含量显著升高(P<0.01)。与模型对照组比较,10μmol/L的松果菊苷可以显著提高谷氨酸诱导后PC-12细胞的活力和SOD活力(P<0.01),降低细胞内Ca^(2+)浓度、NMDAR1蛋白表达、ROS、MDA和LDH含量(P<0.01)。结论:松果菊苷可能通过降低细胞内Ca^(2+)的堆积、抑制NMDAR1蛋白的表达及抗氧化作用来改善谷氨酸诱导的PC-12细胞损伤。

地黄中松果菊苷对皮质酮诱导PC-12细胞凋亡的抑制作用及机制研究

目的观察松果菊苷对于皮质酮诱导的PC-12细胞损伤的保护作用及机制。方法将PC-12细胞分为6组:正常组,模型组(皮质酮500μmol·L^(-1)),阳性对照组(氟西汀0.3μmol·L^(-1))和低、中、高3个剂量实验组(松果菊苷:5,10,20μmol·L^(-1))。24 h后,用噻唑蓝法检测细胞存活率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位水平,用蛋白质印迹法检测细胞内胱天蛋白酶3(Caspase-3)、剪切的胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2蛋白相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果正常组、模型组、阳性对照组和低、中、高3个剂量实验组的细胞存活率分别为(100.0±3.1)%,(88.7±1.9)%,(94.3±3.4)%,(101.3±3.1)%,(102.1±1.9)%和(104.3±1.6)%。选择松果菊苷中剂量进行后续实验研究。正常组、模型组、阳性对照组和中剂量实验组的凋亡水平分别为(10.7±0.9)%,(25.5±1.3)%,(17.7±1.7)%和(19.7±0.8)%;这4组的JC-1单体比例分别为(18.7±0.6)%,(52.1±1.4)%,(25.6±0.9)%和(22.6±1.0)%;这4组的Cleaved caspase 3/Caspase 3比值分别为1.01±0.17,1.98±0.29,1.43±0.29和1.34±0.12;这4组的Bax/Bcl-2比值分别为1.23±0.21,3.01±0.81,1.64±0.39和0.91±0.29。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);阳性对照组和中剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论松果菊苷可能是通过抑制线粒体凋亡信号通路降低凋亡水平来改善皮质酮诱导的PC-12细胞损伤。松果菊苷可能是地黄发挥抗抑郁作用的物质基础之一。