天然抗炎药——余甘子作用机制的研究进展

具有药食同源特点的余甘子被视为一种理想的天然抗炎药物,现已被广泛研究、开发和利用。余甘子含有酚酸类、氨基酸类、黄酮类、多糖类、甾醇类等成分,其中没食子酸、没食子酸甲酯等多酚类物质是其主要的抗炎成分,对炎症有显著抑制作用,它们主要通过干预肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)、IL-6等炎症因子的释放发挥抗炎作用,通过影响丝裂原活化蛋白激酶/核因子-κB(MAPK/NF-κB)、核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(Nrf2/HO-1)、NOD样受体家族3(NLRP3)/Caspase-1、Janus激酶/转录激活因子3(JAK/STAT3)等炎症通路遏制炎症反应。

基于“异病同治”理论研究大黄䗪虫丸抑制心、肺纤维化生物学基础

目的:基于“异病同治”理论探讨大黄䗪虫丸(DHZCP)含药血清对肺纤维化和心肌纤维化体外模型的治疗作用及共同生物分子学机制。方法:以小鼠肺泡巨噬细胞MH-S细胞系和大鼠心肌细胞H9C2细胞系为研究对象。两种细胞均分别设4组:空白对照组、模型对照组、DHZCP组和TGF-β1特异性受体激酶抑制剂TRKI(SB-431542)组。除空白对照组外,采用SiO_(2)(50μg/cm~2)诱导肺纤维化体外模型,脂多糖(LPS,1μg/mL)诱导心肌纤维化细胞模型,DHZCP(15%)和抑制剂SB-431542(3.8μg/mL)处理后,CCK-8检测细胞活性,RT-PCR法检测各组中TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7基因的mRNA表达水平,WB检测各组中TGF-β1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达水平,免疫荧光检测上述蛋白的定位表达。结果:MH-S细胞系结果可见,与空白对照组相比,模型对照组的细胞活力下降,TGF-β1、α-SMA、Smad2和Smad3的mRNA和蛋白均升高,而Smad7的mRNA和蛋白均降低。给药干预后,与模型对照组相比,各受试药物组的细胞活力均提升,TGF-β1、α-SMA、Smad2和Smad3的mRNA和蛋白均降低,Smad7的mRNA和蛋白均上升。H9C2细胞系结果可见,模型对照组较空白对照组的细胞活力亦下降,TGF-β1、α-SMA、Smad2和Smad3的mRNA和蛋白均上升,而Smad7的mRNA和蛋白均下调。与模型对照组相比,给药干预组的细胞活力均上升,TGF-β1、α-SMA、Smad2和Smad3的mRNA和蛋白均降低,Smad7的mRNA和蛋白均上调,差异均有统计学意义。结论:DHZCP能提高MH-S和H9C2两种细胞的活性,抑制α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3表达,升高Smad7表达,表明DHZCP对肺和心肌纤维化的抑制作用与调节TGF-β1/Smad信号通路有关,这也是二者“异病同治”的生物分子学基础。

大黄[庶虫]虫丸抗多器官纤维化作用机制的研究进展

大黄[庶虫]虫丸出自于张仲景的《金匮要略》,具有补虚缓中、生新祛瘀的功效。该方已经广泛运用于多种疾病的临床治疗,并取得了肯定的疗效。多器官纤维化的研究表明大黄[庶虫]虫丸能够减缓心、肝、肾、肺等器官纤维化的发展进程,在临床和实验研究中均收获了良好的效果。该文通过综述大黄[庶虫]虫丸治疗多器官纤维化的实验机制研究发现,虽然各器官纤维化发病部位不同,但其发病机制联系紧密,从中医角度来讲,这类疾病存在着共同病机,即均为"虚劳"状态,疾病日久导致病理产物"干血"的形成。从现代医学的角度来看,这类疾病均出现细胞外基质(ECM)沉积的病理改变,其发生发展都落脚在某些效应细胞[如肝星状细胞(HSC),胰腺星状细胞(PSC)等],并有着相同的细胞[如肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),IL-1β,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等]及某些关键通路[转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt),脂多糖(LPS)旁分泌和自分泌机制等]参与其中。大黄[庶虫]虫丸作为仲景治疗"虚劳干血"的经典方剂,治疗纤维化的作用可能是通过对上述机制的干预起到抑制ECM沉积,从而缓解疾病进程的作用。希望通过该综述为阐明大黄[庶虫]虫丸治疗多器官纤维化的科学内涵提供文献支持,同时为进一步实验及临床研究奠定基础。

大黄[庶虫]虫丸经TGF-β_(1)/Smads/miR-29通路干预大鼠心肌纤维化的机制

目的:运用经方大黄[庶虫]虫丸(DHZCW)干预大鼠心肌纤维化模型,观察其对大鼠心肌纤维化的影响并探讨其作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种大鼠36只,分为空白组、模型组和DHZCW低、中、高剂量组(0.056、0.084、0.168 g·kg^(-1))、卡托普利组(10 mg·kg^(-1))组,每组6只。除空白组外,其余各组在大鼠腹腔注射异丙肾上腺素溶液5 mg·kg^(-1),连续15 d,复制心肌纤维化模型。造模开始时便同时给药,给药后28 d处死各组大鼠,取血清及心脏组织进行相关检测。采用苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色,观察组织炎症、细胞变性、坏死及纤维化等情况。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠和大鼠血清中的羟脯氨酸(HYP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、大鼠血清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键通路蛋白转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7蛋白的表达量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关键通路基因TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad7、微小RNA(miR)-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p的mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组中的纤维化病理损伤改变明显,血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均升高(P<0.01),TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量升高(P<0.01),Smad7蛋白含量降低(P<0.01)。TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5pmRNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,给药28 d后,DHZCW高、中、低剂量组和卡托普利组血清HYP、TNF-α、IL-1β、IL-6、HA、LN和PCⅢ含量均降低(P<0.01),除低剂量组,TGF-β_(1)、α-SMA、Smad2、Smad3蛋白含量降低,Smad7升高(P<0.01);DHZCW高剂量组中TGF-β_(1)、Smad2、α-SMA、Smad3 mRNA表达水平降低(P<0.05,P<0.01),Smad7、miR-29a-5p、miR-29b-2-5p、miR-29c-5p mRNA升高(P<0.05);DHZCW中剂量组的TGF-β_(1)、Smad2、Smad3的mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),而Smad7 mRNA升高(P<0.01);DHZCW低剂量组TGF-β_(1)、Smad2 mRNA降低(P<0.01)。结论:DHZCW能改善大鼠心肌纤维化,其作用机制可能与调控TGF-β_(1)/Smads/miR-29通路有关,且在0.056~0.168 g·kg^(-1)存在剂量依赖性,高剂量组效果更加稳定。