用无菌小猪模型研究轮状病毒腹泻

实验无菌小猪作为轮状病毒 ( RV)腹泻研究模型 ,具有很多优点。建立起该腹泻模型 ,可以研究人轮状病毒的体内感染、RV致病机理、毒力和宿主限制性相关基因 ,评价不同种类疫苗的保护作用以及确定保护作用相关因素等 ,对 RV腹泻的防治有重要指导作用。

轮状病毒的动物感染模型

本文综述了以小鼠和兔为主的动物感染模型对轮状病毒(RV)感染与免疫的研究。根据感染动物排出病毒、血清学免疫反应等指标,可以间接评价RV口服疫苗、亚单位疫苗肠道外免疫、粘膜-肠道外联合免疫等对肠道的保护作用,以及确定保护作用的相关因素和添加佐剂等新方法的效果。

A组轮状病毒我国地方株VP6基因的序列测定及其在杆状病毒系统中的表达

通过反转录－ 聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ） 获得了轮状病毒地方株 Ｔ１１４ Ｖ Ｐ６ 全基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 片段，将其克隆入转移载体质粒ｐ Ｖ Ｌ１３９３ 中，构建成重组质粒ｐ Ｖ Ｌ１３９３ － Ｖ Ｐ６ 。对克隆的 Ｖ Ｐ６ 基因进行序列测定，并用它和杆状病毒（ Ａｃ Ｍ Ｎ Ｐ Ｖ） 野毒株 Ｄ Ｎ Ａ 共转染 Ｓｆ９ 细胞，筛选纯化得到含 Ｖ Ｐ６ 基因插入片段的重组杆状病毒，并进行了表达重组蛋白 Ｖ Ｐ６ 的检测。测序结果显示 Ｖ Ｐ６ 基因全长１ ３５６ｂｐ ，序列分析显示与 Ｗａ 株非常接近，提示 Ｔ１１４ 为亚组Ⅱ病毒株。用高价免疫血清经 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测表达产物，结果显示，重组病毒感染细胞裂解液样品中可见大小约４５ｋ Ｄ 的特异条带；亚组Ⅱ特异性单抗检测到大小约１２０ｋ Ｄ 的条带，提示重组蛋白 Ｖ Ｐ６ 获得了表达，具有正常的抗原反应性和天然 Ｖ Ｐ６ 的三体结构。

轮状病毒VP4全基因的序列分析及其在原核系统中的初步表达

目的 研究轮状病毒（ＲＶ） 我国地方株ＶＰ４ 基因特点，并获得高效表达的ＶＰ４。 方法采用ＲＴＰＣＲ 技术扩增ＲＶＰ１Ａ 型我国地方株ＣＲ１８８ 的完整ＶＰ４ 基因，克隆到原核表达质粒ｐＥＴ２１ａ（＋ ）中：（１）用末端终止法进行核苷酸序列测定，并与人（ＨＲＶ）标准株作比较分析。（２） 重组质粒转化原核表达宿主菌Ｅ－ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３） ，异丙硫半乳糖甙（ＩＰＴＧ） 诱导表达，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ） 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对其表达产物进行鉴定。结果 （１）ＣＲ１８８ ＶＰ４ 基因全长２３５９ｂｐ，含编码７７５ 个氨基酸的单一的开放读码框架（ＯＲＦ） ，与相同血清型标准株之间氨基酸序列具有高度同源性（９４ ％ ～９８％ ），与不同血清型标准株间相比较，则同源性较低（６４ ％ ～７８％ ） 。（２） 重组ＶＰ４表达量在诱导２～３ 小时时最高，占细胞总蛋白的１１ ％ ；表达蛋白与小鼠抗Ａ组ＲＶＶＰ４ Ｐ１Ａ型特异性单克隆抗体（ 单抗） 发生反应。结论 序列分析预测血清型的结果与临床标本的实验室诊断一致，ＣＲ１８８ ＶＰ４ 为Ｐ１Ａ型；ＶＰ４ 全基因在原核系统中获得表达，表达的重组ＶＰ４ 抗原可被型特?

轮状病毒北京地方株VP4基因的序列分析和原核系统的初步表达

Ａ组轮状病毒是引起婴幼儿重症腹泻的最主要病原〔1〕,结构蛋白ＶＰ4是Ａ组轮状病毒感染后刺激机体产生保护性抗体的主要抗原之一。由于ＶＰ4仅占病毒毒粒蛋白的1.5%,对ＶＰ4的高效表达将非常有助于进行其多肽的功能性、抗原性和免疫原性的研究。我们先前的工作发现Ａ组轮...