TIM-3基因在上皮性卵巢癌中高表达并促进癌细胞的增殖和迁移

目的通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息,分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(TIM-3)基因在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达及作用机制。方法采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本,免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平,分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性;采用Kaplan-MeierPlotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组(未转染的SKOV3细胞系)、沉默阴性对照组(SKOV3+NCsiRNA组:转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系)和沉默TIM-3组(SKOV3+TIM-3 siRNA组:转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系);采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组(pcDNA NC组:转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系)和过表达TIM-3组(pcDNA TIM-3组:转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系)。MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平,Westernblot检测SKOV3细胞中MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达,在EOC组织中呈阳性表达,EOC组织中TIM-3阳性表达率(84.14%)显著高于正常卵巢组织(16.67%,P<0.05)。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关(P<0.05)。沉默TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性受到抑制,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),凋亡能力显著升高(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调,EMT相关蛋白E-cad水平显著上调(P<0.05)。过表达TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性被激活,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),凋亡能力显著降低(P<0.05),转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调,EMT相关蛋白E-cad水平显著下调(P<0.05)。结论TIM-3在EOC组织中高表达,可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

宫颈癌脱落细胞RBL1启动子甲基化与患者放疗抵抗的关系

目的:探究宫颈癌脱落细胞视网膜母细胞瘤样蛋白1(RBL1)启动子甲基化状态与宫颈癌患者放疗抵抗的相关性。方法:选取2015年5月至2017年4月间保定市第一医院收治的82例宫颈癌患者,接受同步放化疗一线治疗。分别于放疗前(T0)、放疗中期(T1)、放疗结束(T2)采用定量甲基化特异性PCR法检测宫颈脱落细胞RBL1基因启动子甲基化扩增曲线交叉点变化值(ΔCp值)。根据监测3个月的治疗反应,获得完全缓解或部分缓解者纳入敏感组,否则纳入抵抗组。采用多因素Logistic回归模型和受试者工作特征(ROC)曲线分析RBL1基线甲基化对放疗抵抗的预测价值。结果:抵抗组患者各时间点RBL1基因启动子甲基化ΔCp值均低于敏感组(P<0.001),T1、T2时的ΔCp值较基线值变化率均大于敏感组(P<0.001)。RBL1基线启动子甲基化是影响宫颈癌患者产生放疗抵抗的独立危险因素(P<0.05),其ΔCp值预测宫颈癌患者产生放疗抵抗的ROC曲线下面积为0.794(95%CI为0.697~0.892)。结论:RBL1启动子甲基化与宫颈癌患者放疗抵抗有关,监测RBL1甲基化的动态变化有助于优化宫颈癌的个体化治疗方案。

黄芩苷调控活化Toll样受体4/核因子-κB信号通路对复发性流产小鼠的影响

目的:探讨黄芩苷对复发性流产小鼠的影响及作用机制。方法:参照Clark经典模型构建复发性流产小鼠,并将成功构建好的小鼠随机分为模型组和实验组,每组10只;同时建立正常妊娠小鼠模型10只作为对照组。于妊娠第2天,实验组灌胃0.4 mL/mg黄芩苷,模型组和对照组灌胃等量0.9%氯化钠注射液,1次/d,连续干预7 d。酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中激素水平及母胎界面中炎性反应递质水平;免疫组织化学检测小鼠子宫组织巨噬细胞分布情况;蛋白免疫印迹法检测各组小鼠子宫组织活化Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB、髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达情况。结果:对照组、模型组和实验组小鼠母胎界面中TNF-α/IL-4为(2.78±0.36),(4.89±0.58)和(3.39±0.34),血清中E 2为(25.16±3.69),(17.56±4.52),(22.36±4.16)ng/L。小鼠子宫组织中分化抗原14(CD14)蛋白相对表达量分别为(9.36±2.34),(68.12±13.52),(33.46±2.85)%,子宫组织中TLR4蛋白表达量为(0.23±0.02),(1.25±0.33),(0.45±0.12),核因子-κB蛋白表达量为(0.59±0.14),(1.52±0.36),(0.78±0.25),MyD88蛋白表达量为(0.63±0.24),(2.34±0.22),(1.26±0.31),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芩苷可提高复发性流产小鼠雌激素水平,降低母胎界面中炎性状态,与抑制子宫内膜巨噬细胞浸润,调控TLR4-核因子-κB信号通路活性有关。

甲硝唑联合头孢曲松、多西环素治疗盆腔炎对细胞因子、免疫功能和血液流变学的影响

目的分析甲硝唑联合头孢曲松、多西环素用于治疗盆腔炎的综合效果及对细胞因子、免疫功能和血液流变学的影响。方法选择2020年1月至2021年3月妇科治疗的140例盆腔炎患者,随机分为观察组和对照组,每组70例。对照组使用头孢曲松联合多西环素治疗,在此基础上,观察组加用甲硝唑治疗,对比2组的临床疗效、炎性因子及细胞因子水平变化、免疫功能指标、血液流变学指标、盆腔包块直径及子宫动脉血流动力学指标。结果观察组治疗总有效率为95.71%明显高于对照组的77.14%(P<0.05);观察组CRP、PCT、IL-1、MCP-1、GM-CSF、高切全血黏度、低切全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、FIB、ESR较对照组患者降低,IL-2高于对照组(P<0.05);观察组CD_(4)^(+)、CD_(4)^(+)/CD_(8)^(+)明显高于对照组,CD_(8)^(+)低于对照组(P<0.05);观察组治疗后盆腔包块直径明显短于对照组,子宫动脉血流动力参数中,收缩期峰值流速(PSV)明显高于对照组,阻力指数(RI)、搏动指数(PI)明显低于对照组(P<0.05)。结论甲硝唑联合孢曲松以及多西环素对于盆腔炎患者所产生的临床疗效优良,通过改善血液流变缩小炎症肿块,最终实现增强免疫功能的目的。